中检所的微生物验证范例

中检所的微生物验证范例 复方磷酸可待因（欧博士止咳露）溶液微生物限度检查法验证实验 1. 样品复方磷酸可待因（欧博士止咳露），批号 309315 、402021，生产厂家为 香港欧化药业有限公司。 2. 验证用菌种 枯草杆菌 CMCC（B）63501、金黄色葡萄球菌 CMCC（B）26003、 大肠埃希菌 CMCC（B）44102、白色念珠菌 CMCC (F) 98001、黑曲霉 CMCC(F)98003。 3. 方法 中国药典有关微生物限度检查法方法验证试 验。 4. 具体操作方法 4.1 菌液制备： (1) 取经 37℃培养 18~24h，金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌的肉汤培 养物 1ml+9ml 盐水，10 倍稀释至 10-5 ~10-7，细菌数约为 50~100cfu/ml，做活 菌计数备用。 (2) 经 25 ℃培养 18~24 小时的白色念珠菌霉菌液体培养物 1ml+9 ml 盐水 10 倍 稀释至 10-5 ~10-7，细菌数约为 50~100cfu/ml，做活菌计数备用。 (3) 取经 25 ℃培养 1周的黑曲霉斜面培养物，加 3~5ml 盐水洗下霉菌孢子，吸 取出菌液，用比浊管比浊，然后取 1 ml +9 ml 盐水，逐管 10 倍稀释为 10-4， 细菌数约为 50~100cfu/ml，做活菌计数备用。 4.2 供试液制备 吸取样品 10 ml ，加 0.1%蛋白胨水氯化钠稀释液 90ml 浓度均 为 1：10 供试液，分别人工污染上述 5种代表试验菌株。 4.3 培养基稀释法： 采用加 0.5 ml、0.2 ml、0.1 ml /皿供试液，再加 15~20 ml 琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养 24~48 小时观察结果细菌计数，测定回 收率。结果见表： 4.4 回收率测定： (1) 试验组: 分别取不同品种的 1：10 供试液 1 ml、50~100 个/ ml 试验菌株同 时加入平皿中，立即倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养 24~72 小时观 察结果。薄膜过滤法以最后一次的冲洗液加入试验菌. (2) 活菌组 测定每一菌株的试验菌数 (3) 供试液对照 测定供试品本底菌数 (4) 稀释剂对照组 5 结果 菌落计数结果、常规法和培养基稀释法在复方磷酸可待因微生物限度检查法的验 证结果见表 1、2和表 3。 表 1 菌落计数（cfu/ml） 实验次数 金葡菌 10-5 枯草杆菌 10-5 白色念珠菌 10-5 黑曲霉 10-4 大肠埃希菌 10-7 1 94、90 130、80 73、72 110、90 14、 15 2 80、74 45、23 128、108 110、120 54、 34 3 153、150 78、77 73、74 110、100 30、 27 从表 2结果可以看出: （1）采用常规方法检验复方磷酸可待因溶液供试品，人 工污染 5株代表菌株，该供试品对大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉的回收率试 验均高于 70%，可采用常规方法检验。（2）复方磷酸可待因对金黄色葡萄球菌、 枯草杆菌有不同程度的抗菌活性，供试品回收率为 0.02~29.2%，均低于 70%。 表 2 复方磷酸可待因微生物限度检查方法验证 （常规法） 实验次数 人工染菌回收率% 金葡菌 枯草杆菌 白色念珠菌 黑曲 霉 大肠埃希菌 1 0.02 71.4 81.1 100.0 100.0 2 29.2 29.4 100.0 100.0 100.0 3 抑菌 抑菌 100.0 100.0 100.0 表 3 培养基稀释法（1ml 加 2 个平皿）复方磷酸可待因微生物限度检查验证 实验次数 人工染菌回收率% 金葡菌 枯草杆菌 1 80.7 100.0 2 91.4 100.0 表 3 中的结果证明，采用培养基稀释法可消除供试品对人工污染金黄色葡萄 球菌和枯草杆菌的抑菌作用。回收率达到 70%以上。因此，培养基稀释法（0.5ml/ 皿）可用于复方磷酸可待因（欧博士止咳露）的微生物限度检查。 6 结论 根据验证试验结果，确定复方磷可待因（欧博士止咳露）溶液微生物限度检查法 为细菌数测定可采用培养基稀释法（0.5ml/皿）测定，霉菌数可采用常规法测定。 注：常规法为1ml供试液加15~20ml菌落计数用培养基；培养基稀释法则为 0.5ml 供试液加 15~20ml 菌落计数用培养基为 2倍稀释，0.2ml 供试液加 15~20ml 菌落 计数用培养基为 5倍稀释。