奶牛子宫组织内肥大细胞分布规律的研究1

奶牛子宫组织内肥大细胞分布规律的研究1 曹荣峰2，丛霞，林红 （莱阳农学院动物科技学院，山东青岛，266109） 摘要：取 4 头奶牛的新鲜子宫放入生理盐水中冲洗干净，分别于子宫角、子宫颈、子宫体等部位取材，放入 10％中性福 尔马林固定液中固定，对子宫全层进行连续切片，并用甲苯胺蓝染色，然后，用油镜观察子宫内膜层、肌层、外膜层的 肥大细胞并计数，再用生物统计方法、比较了子宫各层肥大细胞的分布规律。结果发现，奶牛子宫组织内肥大细胞 主要分布在子宫内膜层，在子宫外膜层分布较少，奶牛子宫角、子宫体、子宫颈相应各层的肥大细胞含量是相互独立的。 结果明，奶牛子宫组织内肥大细胞的分布具有一定的规律性。 关键词：奶牛；肥大细胞；子宫；分布规律 Regularity of mast cell distribution in the uterine tissue of the cow CAO Rong-feng，LIN Hong (Department of Animal Science and Veterinary Medicineby Laiyang Agricultural College， Qingdao 266109，PR China) Abstract: The whole uterus from 4 cows were cleaned in 0.9% NaCl solution before the tissue samples from the uterine horn，cervix and uterine body were taken respectively. The samples were fixed in the 10% neutral formaldehyde solution，and a continuous slices of the whole uterine layer were stained by the method of toluidine blue stain. The mast cells in the uterine tissues were examined and counted under a light microscope for the distribution difference of mast cells in different uterine layers. The results showed that the mast cells of the uterine tissues of cow distributed mainly in the mucous membrane. There was a less distribution mast cells in the tunica adventitia of the cow uterine tissues. The distribution of mast cells in different uterine layers of the uterine horn, cervix and uterine body was mutual independent. The above results indicated that the mast cells showed a regular pattern of distribution in the uterine tissue of the cow. Key words: Cow；Mast cell；Uterus；Distribution 肥大细胞（Mast Cell，MC）是一种包含嗜碱性颗粒的多功能细胞，它作为机体的一种重要的免疫 细胞广泛存在人和动物体内[1]。MC能分泌多种介质，参与多种生理反应[2~5]，与动物某些变态反应性疾 病、寄生虫感染、某些非特异性炎症和肿瘤性疾病有密切关系[6]。资料表明[7]，MC在雌性生殖系统广 泛存在，MC通过其介质的释放，在生殖过程中起重要作用，特别是在子宫中，因此一直是研究的一个 主，但针对奶牛的研究较少。要揭示MC在奶牛生殖中的各种作用，就必须首先揭示其在子宫内不同 部位的分布规律，这是研究子宫内MC的基础性工作。为此，特并实施了本次试验。 1 材料与方法 1.1 实验动物 莱阳某牛场的 4 头雌性空怀期奶牛。 1.2 实验仪器和药品 轮转式切片机（KD1508，浙江金华科迪仪器设备有限公司）、系统生物显微镜、数码相机及显微 照相系统（日本 OLYMPUS 产品）、计数器、电热恒温水浴箱、电子天平、冰箱、鼓风干燥箱（德国 MMM 产品）、生化培养箱等常规器械。 甲苯胺蓝(T-B)染液；苏木精染液；伊红 Y 乙醇液；10%中性福尔马林溶液；中性树胶；二甲苯； 石蜡（硬蜡）；酒精等。 1 山东省中青年科学家科研奖励基金资助。 2作者简介：曹荣峰 (1973~), 男，汉族，黑龙江省佳木斯市人，副教授，临床兽医学博士, 硕士导师，研究方向：动物 疾病诊治技术， Email: rfcao@126.com。 1.3 甲苯胺蓝(T-B)染液的配制方法 原液：将甲苯胺蓝 1.0g 和 70%酒精 100.0ml 混合溶解，保存期 6 个月； 工作液：将甲苯胺蓝原液 5.0ml 与新鲜配制的 1%氯化钠 45.0ml 混合，用后丢弃。 1.4 肥大细胞甲苯胺蓝(T-B)染色方法 常规石蜡切片略，至将切片捞至玻片上，干燥。再经二甲苯Ⅰ脱蜡 10min→二甲苯Ⅱ脱蜡 5min→ 无水酒精Ⅰ5 min→无水酒精Ⅱ5 min→95%酒精 5 min→95%酒精 5 min→80%酒精 2 min→70%酒精 2 min→50%酒精 2min→自来水冲洗 2 min→甲苯胺蓝工作液 1~2min→蒸馏水冲洗 3 次→ 快速 95%和无 水酒精脱水→二甲苯Ⅰ5min→二甲苯Ⅱ10min→中性树胶封片。 1.5 肥大细胞计数方法 分别取奶牛子宫的子宫角、子宫颈、子宫体的石蜡组织切片，油镜下计数肥大细胞，每次以 10 个 视野中的肥大细胞数，作为一次记录数据，以同一部位的 6 张石蜡切片为一组，取 6 组数据作统计学分 析，得出子宫不同部位、层次肥大细胞的分布规律。 2 结果 2.1 肥大细胞的镜下观察结果 奶牛子宫肥大细胞在 100×10 油镜下多数呈圆形、椭圆形，细胞核呈蓝色，细胞质中充满紫红色颗 粒（如图 1~6）；蓝色细胞核常被紫红色嗜碱性颗粒掩盖而不明显。肥大细胞在子宫内膜中普遍存在， 多分布在子宫粘膜下层的小血管、腺体和淋巴管之间的疏松结缔组织内（见图 2、3）；子宫肌层肌纤维 间的结缔组织内也可以清楚地看到肥大细胞（见图 5）；在子宫浆膜层几乎没有观察到肥大细胞。 2.2 肥大细胞的数据统计及分析 肥大细胞在奶牛子宫的数量统计如表 1 所示。肥大细胞在内膜层分布最多，而在肌层和外膜层则相 对较少，在外膜层几乎很难观察到。肥大细胞在奶牛子宫的子宫角、子宫颈、子宫体的内膜层、肌层、 外膜层平均计数如图 7。 表 1 奶牛子宫的肥大细胞计数统计表 Table 1 The statistical table of the mast cell in cow’s uterus 编号 1 2 3 4 5 6 平 均 内膜层 12 32 11 17 9 20 16.8±8.5 肌层 2 0 3 2 1 2 1.7±1.0 子宫角 外膜层 0 1 0 2 1 0 0.7±0.8 内膜层 7 28 13 30 19 24 20.2±8.9 肌层 4 3 3 2 3 2 2.8±0.7 子宫体 外膜层 0 1 0 0 1 0 0.3±0.5 内膜层 14 6 19 9 20 16 14.0±5.5 肌层 4 3 5 1 6 2 3.5±1.9 子宫颈 外膜层 0 1 0 1 0 0 0.3±0.5 奶牛子宫角、子宫体、子宫颈内各层肥大细胞的含量经独立性检验，得出х2=3.71，查表得，х20.05（4） =9.49，х2<х20.05（4），则P>0.05，表明奶牛子宫角、子宫体、子宫颈内各层肥大细胞的含量相互独立，即 在奶牛的子宫角、子宫体、子宫颈部位，肥大细胞数量在内膜层、肌层、外膜层的构成比相同。 0 5 10 15 20 25 子宫角 子宫体 子宫颈 内膜层 肌层 外膜层 图 7 奶牛子宫的肥大细胞计数 Figure 7 Mast cell counting of cow’s uterus 3 讨论 肥大细胞在奶牛子宫的这一分布规律与奶牛子宫的组织结构、细胞组成及子宫的周期性变化有着密 不可分的关系。 奶牛子宫的子宫壁从内至外可分为三层：内膜层、肌层和外膜层。子宫内膜由上皮层和固有层构成。 上皮层的结构随动物种类和发情周期的不同而不同。固有层的浅层有较多的细胞成分及子宫腺导管，细 胞以梭形或星形的胚形结缔组织细胞为主，还含有巨噬细胞、肥大细胞、淋巴细胞和浆细胞等。固有层 的深层中细胞成分较少，但布满了分支管状的子宫腺及其导管（肉阜处除外）。子宫肉阜内含有丰富的 成纤维细胞和大量的血管。我们在对奶牛子宫内膜层切片进行镜检时，发现肥大细胞在此部位的血管和 腺管周围的数量很多，这与鸡胸腺和鸡脾脏中的分布相一致[8]：肥大细胞主要分布在胸腺的髓质，沿血 管密集分布或散在于淋巴细胞之间；在鸡脾脏中，除淋巴小结中心外，各部位均可见到肥大细胞，其中 在被膜下浅层实质、淋巴小结周围、血管周围密集分布。 子宫肌层由发达的内环、外纵平滑肌组成。在两层间或内层深部存在有大的血管及淋巴管，这些血 管在反刍动物子宫肉阜区特别发达。我们在对奶牛子宫内膜层切片进行镜检时，发现子宫肌层和外膜层 仅在致密的肌纤维之间才有肥大细胞出现，这也和环血管及淋巴管分布一致。 子宫外膜由疏松结缔组织构成，属浆膜性结构。子宫颈的黏膜和黏膜下层的混合层形成高的纵形皱 襞，并具有二级和三级小皱襞。固有层中无子宫腺，肌层发达。内环肌特别厚，并含有大量弹性纤维， 外覆浆膜。被膜中无肥大细胞或偶见一、二个。与其他报道相一致。 分析有可能是与组织液在此部位的循环流动有关，肥大细胞在此处聚集，能够更加容易接触到 IgE 等致敏物质，使细胞自身脱颗粒，释放出组织活性物质，参与到局部免疫反应之中。 参考文献 [1] 刘彦威，刘娜. 肥大细胞的功能[J].中国病理生理杂志，1993，9(1)：73-75. [2] Nakano T, Sonoda T, Hayashi C, et al. Fate of bone marrow-derived cultured mast cells after intracutaneous, intraperitoneal and intraveneous transfer into genetically mast cell-deficient w/wv mice.J Exp Med，1985，162：1025-27. [3] Kitamura Y, GoS, Hatanaka.Decrease of mast cells in w/wv mice and their increase by bone marrow transplantation. Blood，1978，52：447. [4] Pipkorn U, Enerback L. Nasal mucosal mast cells and histomine in hay fever effect of topical glucocorticoid treatment.Int Arch Allergy Appl Immunol，1978，84：123. [5] 袁学军，乔惠理，邓泽沛. 子宫肥大细胞的研究进展. 解剖学报，1999（26）：21-23. [6] 杨美林，路喜安. 肥大细胞在食管癌的特征-组织化学与电镜的观察[J]. 解剖学杂志. 1994, 17(1): 1-5. [7] 陈克强译.肥大细胞对蠕虫感染的应答[J]. 兽医学文摘，1988，41（1）：15. [8] 李玉谷，曾文宗. 鸡淋巴器官中肥大细胞异质性的研究[J]. 广西农业大学学报，1997，19（4）：25-29. 图 1 奶牛子宫内膜固有层的深层疏松结缔组织中 的肥大细胞（箭头指示）100×10 图 2 奶牛子宫内膜固有层的血管和腺体周 围的肥大细胞（箭头指示）100×10 图 3 奶牛子宫内膜表层组织中的肥大细胞（箭头指 示）100×10 图 4 奶牛子宫内膜固有层浅层的肥大细胞 （箭头指示）100×10 图 5 奶牛子宫肌层的肌纤维间的肥大细胞（箭头 指示）100×10 图 6 奶牛子宫子宫肉阜的疏松结缔组织中的 肥大细胞（箭头指示）100×10 1 材料与方法 1.1实验动物 1.2 实验仪器和药品 1.3甲苯胺蓝(T-B)染液的配制方法 1.4肥大细胞甲苯胺蓝(T-B)染色方法 1.5 肥大细胞计数方法 2 结果 2.1 肥大细胞的镜下观察结果 2.2 肥大细胞的数据统计及分析 3 讨论 参考文献