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15种中药提取物对几种植物病原菌抑菌活性的初步研究

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15种中药提取物对几种植物病原菌抑菌活性的初步研究 第 33 卷 增刊 西北农林科技大学学报(自然科学版) Vol. 33 Suppl. 2005 年 8 月 Jour . of Nor thw est Sci-Tech Univ . o f Agr i. and Fo r . ( Nat . Sci. Ed. ) Aug. 2005 15种中药提取物对几种植物病原菌 抑菌活性的初步研究� 张应烙,尹彩萍 (井冈山师范学院 生命科学系,江西吉安 343009)   [摘 要 ] 以 15 种中药丙酮提取物为材料, 测定了其对杨树溃疡病菌( D. gr eg ar ia)...
15种中药提取物对几种植物病原菌抑菌活性的初步研究
第 33 卷 增刊 西北农林科技大学学报(自然科学版) Vol. 33 Suppl. 2005 年 8 月 Jour . of Nor thw est Sci-Tech Univ . o f Agr i. and Fo r . ( Nat . Sci. Ed. ) Aug. 2005 15种中药提取物对几种植物病原菌 抑菌活性的初步研究� 张应烙,尹彩萍 (井冈山师范学院 生命科学系,江西吉安 343009)   [摘 要 ] 以 15 种中药丙酮提取物为, 测定了其对杨树溃疡病菌( D. gr eg ar ia)、棉花枯萎病菌(F . oxy s- porum f. sp. vas inf ectum)、番茄早疫病菌( A . solani)、小麦纹枯病菌(R . s olani)和小麦赤霉病菌(F . graminearum)等 5 种植物病原菌的生物活性。结果明,在质量浓度为 0. 05 g / mL 时, 花椒提取物对所有供试菌菌丝生长抑制率均 在 80%以上, 苍术、沉香、艾叶和草豆蔻提取物对其中至少 2 种供试菌菌丝生长抑制率均在 60%以上; 在质量浓度 为 0. 1 g/ mL 时,花椒、沉香和艾叶提取物对棉花枯萎病菌孢子萌发抑制率均在 90%以上;草豆蔻提取物对棉花枯 萎病菌孢子萌发抑制率大于 65%。花椒、沉香、艾叶、草豆蔻、苍术等 5 种中药作为植物源杀菌剂值得进一步研究。 [关键词] 植物源杀菌剂; 中药提取物;抑菌活性 [中图分类号] S482. 3+ 9    [文献标识码] A [文章编号] 1671-9387( 2005) S0-0175-03   从植物中寻找具有抑菌活性的物质, 特别是具 有新型分子结构和特殊作用机理的化合物, 是农药 研发的一条重要途径[ 1]。我国有丰富的中药资源,这 是开发植物源农药的理想来源 [ 2]。本试验在查阅中 药学及其他相关文献的基础上, 从众多的中草药中 选择了 15味有医用抗菌活性的中药[ 3] ,对其农用抑 菌活性进行了初步研究,旨在为新型生物农药开发 提供依据。 1 材料与 1. 1 材 料    供试菌种 为小麦 纹枯病菌 ( Rhiz octonia cer ealis )、棉 花枯萎 病菌 ( Fusarium oxy sp orum f . sp. v asinf ectum)、杨树溃疡病菌( Dothior ella gre- garia)、番茄早疫病菌( A lter nar ia solani)、小麦赤霉 病菌( Fusar ium graminearum) , 均由西北农林科技 大学植物病理研究所提供;供试中药样品共 15种, 均购自江西省吉安市青原区河东中心卫生院, 中药 名称与供试部位详见表 1。 1. 2 方 法 1. 2. 1 中药提取物的制备 将 15种中药 60 ℃烘 干, 粉碎, 用丙酮震荡提取 3 次, 时间间隔分别为 24, 16, 16 h, 摇床摇速为 140 r/ m in, 过滤后合并 3 次滤液,浓缩, 使最终质量浓度为 0. 5 g / mL, 具体提 取过程参照冯俊涛等 [ 4]的方法。 表 1 供试中药样品 T able 1 Tested Chinese herb 供试中药 Chines e her b 供试部位 Tested part 供试中药 Chinese h erb 供试部位 T es ted part 夏枯草 Pr unella vulgar is 果 Fruit s 沉香 A quilaria sinensis 茎 Stem s 鱼腥草 H out tuynia cor data 茎叶 Stems and leaves 草豆冠 A lp inia kat sumadai 种子 Seeds 苍术 A tracty lodes lancea 根茎 Roots and Stem s 蒲公英 T arax acum mong oli cum 全草 Th e wh ole 泡桐 Paulow nia f ortu ne i 花 Flow er s 艾叶 A r temisia argy i 叶 Leaves 佩兰 Eup ator ium f ortunei 茎叶 Stems and leaves 金盏菊 Calend ula of f icinali s 花 Flow ers 花椒 Zanthoxylum bungeanum 果 Fruit s 威灵仙 Clemati s chinensi s 根 Roots 金银花 L onicera j ap onica 花 Flow er s 穿心莲 A nd rog rap his p aniculata 叶 Leaves 草果 A momum tsao-ko 果 Fruit s 1. 2. 2 中药提取物抑菌活性测定 提取物对病原 菌菌丝生长和孢子萌发抑制作用的测定分别采用生 � [收稿日期] 2005-07-08 [基金项目] 井冈山学院院级课资助项目( 2004) [作者简介] 张应烙( 1976- ) ,男,江西上饶人,讲师,硕士,主要从事病害综合防治及植物源杀菌剂研究。 长速率法[ 5]及载玻片法 [ 6]。对菌丝生长抑制作用设1 个浓度,即0. 05 g / mL。带毒培养基的制备:取1. 2. 1 所制备的中药提取物 1 mL 于灭菌的 10 mL 试管 中,加入 9 mL 50 ℃左右的 PDA,摇匀, 倒入灭菌培 养皿中即成。对孢子萌发抑制作用设 1 个浓度,即 0. 1 g/ mL,直接用孢子悬浮液对中药提取物稀释 5 倍即可。同时用丙酮处理作对照,每处理重复 3次。 2 结果与分析 2. 1 提取物对 5种病原菌菌丝生长的抑制作用   表 2 表明, 在质量浓度为 0. 05 g / mL 时, 花椒 提取物对所有供试菌抑制效果均最好, 抑制率均在 80%以上,其中对小麦纹枯病菌的抑制作用最强, 抑 制率为 100%, 表明花椒提取物抑菌谱较广;苍术和 沉香提取物抑菌活性次之, 对其中 4种供试菌抑制 率均在 60%以上;艾叶和草豆蔻提取物抑菌活性也 较好, 对其中至少 2 种供试菌抑制率均在 60%以 上; 其他中药提取物对 5种病原真菌的抑菌效果均 较差,抑制率均在 60%以下。 表 2 0. 05 g / m L 中药提取物对 5 种病原菌菌丝生长的抑制作用 Table 2 I nhibition o f Chinese herb extr acts on hypha o f 5 kinds o f pa thogen fungi 供试中药 Chinese herb 杨树溃疡病菌 D. gregaria 棉花枯萎病菌 F . oxy sp orum f. sp. v asinf ect um 番茄早疫病菌 A . solani 小麦纹枯病菌 R. cerealis 小麦赤霉病菌 F. graminearum 菌落 直径/ mm Colony diameter 抑制率/ % Inhibition rate 菌落 直径/ mm Colony diameter 抑制率/ % Inhibition rate 菌落 直径/ mm Colony diamet er 抑制率/% Inhibit ion rate 菌落 直径/ mm Co lony diamet er 抑制率/% Inhibit ion rate 菌落 直径/ mm Co lony diamet er 抑制率/% Inhibit ion rat e 夏枯草 P . v ulgaris 40. 33 37. 8 41. 67 9. 7 39. 17 8. 7 34. 50 37. 8 40. 17 43. 2 鱼腥草 H . cordata 33. 00 51. 1 25. 17 51. 5 30. 67 32. 1 30. 83 45. 8 39. 33 44. 6 苍术 A . l ancea 25. 50 64. 7 16. 63 73. 8 25. 67 45. 9 14. 67 81. 1 29. 00 61. 8 泡桐 P . f or tunei 47. 83 24. 2 27. 41 45. 8 24. 67 48. 5 37. 33 31. 6 40. 00 43. 5 佩兰 E . f ort unei 36. 50 44. 7 41. 67 9. 7 35. 67 18. 3 38. 83 28. 4 53. 00 21. 9 沉香 A . s inensis 19. 33 75. 8 12. 83 82. 7 17. 50 68. 3 10. 08 91. 1 31. 67 57. 3 草豆冠 A . katsumadai 35. 67 46. 2 23. 33 23. 3 13. 83 78. 4 17. 00 76. 0 32. 33 56. 2 蒲公英 T .mongolicum 52. 83 15. 1 26. 33 48. 5 33. 33 24. 8 34. 33 38. 2 40. 83 42. 1 威灵仙 C. chinensis 48. 00 23. 9 35. 67 24. 9 32. 50 27. 1 43. 50 18. 2 47. 33 31. 3 穿心莲 A . p aniculata 29. 17 58. 0 40. 5 12. 7 26. 17 44. 5 27. 83 52. 4 33. 17 54. 8 草果 A . t sao-ko 40. 33 37. 8 39. 00 16. 5 25. 00 47. 7 34. 67 37. 4 56. 67 15. 8 花椒 Z . bungeanum 7. 33 97. 6 12. 17 84. 4 7. 25 96. 6 6. 00 100. 0 14. 00 86. 7 艾叶 A . argy i 28. 67 58. 9 15. 95 74. 8 23. 00 53. 2 22. 50 64. 0 29. 00 61. 8 金银花 L. j ap onica 50. 83 18. 7 42. 67 7. 2 34. 50 21. 6 38. 50 29. 1 54. 17 19. 9 金盏菊 C. of f ici nalis 35. 50 46. 5 40. 00 13. 9 24. 17 50. 0 38. 00 38. 2 38. 33 46. 3 CK 61. 17 45. 50 39. 50 51. 83 66. 17 2. 2 提取物对棉花枯萎病菌孢子萌发的抑制作用 表 3表明, 在质量浓度为 0. 1 g/ mL 时, 花椒、 沉香和艾叶提取物对棉花枯萎病菌孢子萌发抑制作 用效果显著, 抑制率均在 90%以上;草豆蔻提取物 对棉花枯萎病菌孢子萌发抑制作用效果也较好, 抑 制率为 66. 7% ;其他 11种中药提取物对棉花枯萎 病菌孢子萌发抑制作用效果较差,抑制率均在 60% 以下。 表 3 0. 1 g / mL 提取物对棉花枯萎病菌孢子萌发抑制作用 Table 3 I nhibition o f Chinese herb ex tr acts on spor e of F . oxy sp orum f. sp. v asinf ectum 供试中药 Ch ines e herb 萌发率/ % Emergence rate of spore 抑制率/ % Inhibit ion rate 供试中药 Chinese h erb 萌发率/ % Emergence rate of spore 抑制率/ % In hibit ion rate 夏枯草 P. vulgar is 38. 9 59. 1 威灵仙 C . chinensis 67. 3 29. 2 鱼腥草 H . cor data 69. 9 26. 4 穿心莲 A . p anicu lata 90. 1 5. 2 苍术 A . lancea 74. 5 21. 6 草果 A . t sao-ko 87. 0 8. 4 泡桐 P. f ortunei 92. 2 2. 9 花椒 Z . bung eanum 4. 3 95. 5 佩兰 E. f ortu ne i 91. 6 3. 6 艾叶 A . ar gy i 2. 7 97. 2 沉香 A . sinensi s 3. 7 96. 1 金银花 L . j ap onica 87. 0 8. 4 草豆冠 A . kat sumadai 31. 6 66. 7 金盏菊 C . of f icinal is 70. 7 25. 6 蒲公英 T .mongoli cum 94. 5 0. 5 对照孢子萌发率/ % 95. 0 176 西北农林科技大学学报(自然科学版) 第 33 卷 3 结 论 花椒、沉香、苍术、艾叶、草豆蔻等 5种中药的抑 菌活性值得进一步研究。本研究结果表明, 花椒提取 物对所有供试菌的菌丝生长和孢子萌发抑制效果均 较好,抑制率均在 80%以上; 沉香、苍术、艾叶、草豆 蔻等 4种中药提取物对供试 5种病菌中至少 2种的 菌丝生长抑制作用在 60%以上, 且沉香、艾叶、草豆 蔻等 3种中药提取物对棉花枯萎病菌孢子萌发抑制 作用均在 65%以上。因此,花椒、沉香等 5种中药提 取物中含有农用抗菌成分,且抑菌谱较广,对其深入 研究可能会开发出无公害植物源杀菌剂。 本研究中只采用丙酮作为溶剂对 15种中药进 行了提取,对其中抑菌效果不好的中草药,可换用非 极性或强极性溶剂提取后检测其抑菌活性。此外, 本 试验筛选出的有效中药的活体盆栽试验、有效成分 的分离纯化及其对病原菌的作用机制也有待于进一 步的研究、探讨。 致谢: 井冈山师范学院生命科学系 2000 级徐燕花、胡志玲、郑瑞瑶、林佩珠等同学参与了部分生测工作,在此表示衷心感 谢! [参考文献] [ 1] 吉冈宏辅.天然生理活性物质的探索与农药开发[ J] .农药译丛, 1985, 7( 1) : 1- 7. [ 2] 李永刚,文景芝. 30种中药抑菌活性的筛选试验初报[ J] .植物保护学报, 2003, 30( 1) : 109- 110. [ 3] 宫毓静,安汝国,虞 慧,等. 164种中药乙醇提取物抗真菌作用研究[ J ] .中草药, 2002, 33( 1) : 42- 47. [ 4] 冯俊涛,石勇强,张 兴. 56种植物抑菌活性筛选试验[ J] .西北农林科技大学学报(自然科学版) , 2001, 29( 2) : 65- 68. [ 5] 吴文君.植物化学保护实验技术导论[ M ] .西安:陕西科学技术出版社, 1988. [ 6] 方中达.植病研究方法[ M ] .第 3版.北京:中国农业出版社, 1998. Study on fungistasis of 15 kinds of Chinese herb extracts to several kinds of plant fungi ZHANG Ying-lao, YIN Cai-ping ( Department of L if e Sciences, J inggangshan Normal College, J i�an, Jiangx i 343009,China) Abstract: T he bioact ivity of 15 kinds of Chinese herb actone ext racts w ere tested w ith 5 kinds of fung i. The r esults of separate cult iv ating condit ion show ed that the ex tr act of Zanthoxy lum bungeanum had more than 80% inhibit ion rates to the hypha g row th of all tested fung i and the ex tr acts of A tr acty lod es lancea, A quilaria sinensis, A rtemisia ar gy i, A lp inia katsumadai had mor e than 60% inhibit ion on the hypha growth of at least 2 kinds of fungi under the concentrat ion of 0. 05 g/ mL. The ex t ract of Zanthoxy lum bungeanum, A quilaria sinensis, A rtemisia argy i had more than 90% inhibit ion and the ext ract o f A lp inia katsumadai had mor e than 65% inhibition on the spor e germination o f Fusar ium oxy sp orum f . sp. vasinf ectum under the concentrat ion of 0. 1 g / mL. Key words : botanical fung icides; Chinese herb ex t racts; fung istasis 177增刊 张应烙等: 15 种中药提取物对几种植物病原菌抑菌活性的初步研究
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