冻干人纤维蛋白胶制品中磷酸三丁酯残留量的气相色谱法测定

中 国医 药 工 业 杂 志 Chinese 文章鞠号 {1001 8255(2002)03 O137—02 冻干人纤维蛋白胶制品中磷酸三丁酯残留量的气相色谱法测定 盛凤仙 (上海新 医药股份有限公司 ，上海 200135) 摘要 ：采用气相色谱法测定冻干人纤维 蛋 白胶翩 品中磷 酸三丁酯残 目量 以磷酸三丙 醋(TPP)作 内标 ，采 用 HP- 20M(Carbowax 20M)色谱柱 ，气化室温度 ：19O。C；检测器温度 ：210。C；柱温 ：140。C；载气为舞气。磷 酸三 丁酯在 2～ 16 g／ml浓度范围内线性关系良好，相关系数为 0．9995，平均回收率为 100．2 (RSD 2 78 ) 关t词 ：冻干人纤 维蛋 白胶 ；磷酸三丁醋 }残目量 ；气相色谱法 ；测定 中田分类 号 ：TQ460．7 2；O657．7 1 文献标识码 ：A 冻干人纤维蛋 白胶是由高浓度人纤维蛋 白原 、 人凝血酶、氯化钙及灭菌注射用水组成，具有止血 、 覆盖、粘合伤口等作用l1 ]。本公司试制冻干人纤维 蛋 白胶 的病毒灭活工艺采用 国际公认的 S／D灭活 法 ]。该工艺中所加的磷酸三丁酯(TNBP，1)对小 鼠的LD；。为 602 mg／kg ]，对人体有害。所以在终产 品中其残留量应≤ 10~g／ml(《中国生物制品规程 》 2000年版 ，356)。本文参考该规程(附录，696)，利用 气相色谱法对冻干人纤维蛋白胶制品中 1残留量测 定作了初步探讨。 1 仪器与试药 惠普 HP一6890型气相 色谱 仪 ，配有 HP—Vectra化 学工 作站及 氮磷检测 器；SORVALL RC 5C 型离心 机{XW一80A 型旋涡混合器 (上海医科 大学 仪器 厂)。 1(含 量 应 不低 于 99 )、磷 酸 三丙 醋 (2，TPP，内 标 ， 99 )均由中国药品生物翩品柱定所提供j冻干人纤维蛋白 胶由本公司研究部门提供；正己烷(AR，上海化学试剂有限 公司)。 2 方法与结果 2．1 色谱条件 色谱柱 ：Hp-20M(Carbowax 20M ，10 m×0．53 mm，1．33 m)；气 化室温度 ：1 90。C；检测 器温度 ： 210℃ ；柱温 ：140℃；铷珠加热 电压 ：3．4 V；氨气流 速 ：3 ml／min；空气流速 ：6O ml／mln；柱流量：20 ml／ m ill。 2．2 溶液制备 1工作液 ：精密称取 l 100 mg，用正己烷定 容至 10mI，得到 10mg／ml 1标准贮备液 。精密量取 收藕 日期 ；2o01—09 26 作者简介：盛风仙(1965)．女，工程师 执生药师，从事药物 和质量管理工作 。 Tel 021 68567815 E-mai L：wllss{x@eltiz ne【 1标准贮备液 600 1，用正己烷定容至 10 ml。 2内标工作液：精密称取 2 100 mg，用正己烷定 容至 10 ml，得到 10 mg／ml内标贮备液。精密量取 内标贮备液 400 1，用正己烷定容至 1O m1。 1．5 mol／L高氯酸溶液 ：吸取高氯 酸(71 )12 ml用蒸馏水定容至 100 ml。 2．3 标准 曲线的绘制 分别 精密 吸取 1标 准 工作 液 10、20、40、6O、 8O 1置加有 3 ml蒸馏水的具塞玻璃离心管中，然后 分别加入 内标工作液 5O uJ，按“2 6”项下的方法测 定，记录色谱图。以 1与 2峰面积之比y对 1的浓度 c 进 行线 性 回 归，得 回 归 方 程 Y= 0．2023C一 0．02788，r一0．9995。线性范围为 2～1 6~g／ml 2．4 精密度和稳定性试验 取同一批号样 品 6份，按“2 6”项下方法操作 ， 测得 1的平均残 留量为 6．60 ，RSD为3．48 一 6)。 取 同一份样 品溶液，分别于 0、4、8、12 h测定， 测得 1的残 留量基本不变，RSD 为1．89 (”：4)。 2．5 回收率试验 采用加样 回收试验。精密吸取不舍 1的蛋白浓 度约为 1％的空 白样品 3 ml置具塞玻璃离心管中， 分别加入 1标准工作液 40、6O、80 1，然后各管加入 内标工作液 5O ，按“2．6”项下方法测定，计算回收 率 ，得平均 回收率为 100．2 ，RSD 为 2．78％(”= 6)。 2．6 样品测定 精密 吸取蛋 白浓度 约为 1％的样 品 3 ml置具 塞玻璃离心管中，加入内标工作液 50 1 1．5 tool／L 高氯酸溶液 0．75 ml，振荡 1 rain，37~C水浴保温 10 rain。取 出，加 入 正 己烷 4 ml，振 荡 2 rain，8000 r／rain离心 30 rain，以去除乳化。在不干扰界面情况 维普资讯 http://www.cqvip.com 138 下，吸取有机相 (上层正己烷)，然后用空气流吹去有 机溶剂使其浓缩至约 0．4 ml(不可加热)。按上述色 谱条件 ，取 0．2 vl上机测定 。得 1和 2的峰面积 ．用 回归方程计算 1的残留量，结果如 1。 表 1 样品中 1的残留■晨!J定结果(H一3) 3 讨论 3．1 本实验采用 2为 内标是 因为它与 1差一个 CH 基 ，接近于同质 ，保留时间分别约为 1．6和 5I(nun) O 5 如 圈 1 气相色谱圈 A：样品 FB：空白样 品 1 1} 2 2 中国医药工业杂志 Chinese Journal of Phar~ eeut[eals 2002，33(3 4．7 min，分离度 R>1．5。空 白冻干人纤维蛋白胶的 色谱峰对 1和 2的色谱峰无干扰(圈 1)。 3．2 样品在预处理过程中易成乳化，离心时适 当降 低 温度 (如 10。C)或延长离心时问 ，即可破 坏乳化 层。若处理后 ，乳化仍未完全破除，可在振荡器上略 振荡后，再离心 。 3．3 在操作过程 中，标准及待检样品溶剂挥发速度 应尽量一致。 参考文献： [1] 薛 毅，王庆才．纤维蛋白胶对实验性肝损伤的止血效 果观察[JZ．中华实验外科学杂志，1996，13(3) 151 1 2． Ez] 薛 毅，王庆才．纤维蛋白胶在家兔实验性皮肤损伤愈 台中的作用口]．中华实验外科学杂志，1997，14(4)： 255． [3] Horowitz B．Wiebe ME，Lippin A．et at．Inactivation of viruses in labile blood derivatives I．Disruption of lipidmnveloped viruses by tri(月buty1)phosphate de— tergent combinations_J]．Transfusion，1985．25(6)： 516 522． [4] Piet MP，Chin S，Prince AM，et a1．The USe of tri(n buty1)phosphate detergent mixtures to inactivate he patitls viruses and human immunodeficiency virus in plasma and plasma’s subsequent fractiormtion EJ]． Transfusion，1990，30(7)：591 598． Determination of Residual TNBP in Freezing Human Fibrin Sealant Kit by GC SHENG Feng—Xian (Shanghai Xi~ ing m ☆ n “ ．Ltd．．Shaz ghai 200135) ABSTRACT：The residual quantity of tri( buty1) phosphate (TNBP) in freezing human fibrin sealant kit was determined by GC．HP一20M column was used with tripropyl phosphate(TPP)as the inter na1 standard．The injector，detector and column temperature were 1 90。C，210℃ and 140。C．respectiveIv． The carrying gas was nitrogen．The standard curve was linear in the range of 2～16~g／ml(r一0．9995)． The average recovery was 100．2％(R D 2．78％)+ Key Words：freezing human fibrin sealant kit；TNBP；residua1；GC；determination $33—25 分子氲一醛体系将叔胺化台物氲化成 N一氲化物 Dongre RS等[Synth Commun 2001，31：167] 无需金属催化剂，叔胺化台物与分子氧 2一甲基丙醛体 系室温反应 10～24 h可生成N 氧化物。1O例收宰 76 ～ 90 [吴 比捕j $33-26 4-羟基睦啉酮的快速合成 Lange JHM 等[-Tetra hedron Lett，2001，42：1367] 苯 胺类和琅代丙二酸酯置于一敞 开容器 用 500 W 微 波照射 15 min，得到 4-羟基喹啉(2(1H)酮衍生物 。19倒有 13倒收宰 40 ～94 [刘继束摘 周伟澄校] " 舯 ∞ ≈ 册 b 0 ∞ ∞ 0 维普资讯 http://www.cqvip.com