建立小鼠免疫低下模型的初步研究

建立小鼠免疫低下模型的初步研究 李业鹏计 融韩春卉车燕傻江涛 李玉伟赵熙 张靖 刘红蕾钟凯 陈庭君 (卫生部食品卫生监督检验所，北京 100021) 摘要：为建立小鼠免疫低下模型，应用环磷酰胺对小鼠引起的免疫低下状态进行了实验研究。 一次性腹腔给予25～30g的雄性BalB／c小鼠40Ⅱ叫kgBW的环磷酰胺，第=天，小鼠抗体生成细胞 实验和血清溶血素实验呈免疫低下状态；给予100mgCkgBW的环磷酰胺，第二天，小鼠迟发型变态 反应(足_踮增犀法)实验和腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验呈免疫低下状态。给予环磷酰胺一周 后，小鼠免疫状态恢复至正常，甚至会出现免疫增强的现象。小鼠的脾脏指数和体液免疫指标对 环磷酰胺较敏感。 关键词：环磷酰胺小鼠模型，免疫学 中围分类号：R15；TS218文献标识码：A 文章编号：1004—8456(2001)06—0007—04 保健食品免疫增强作用的适用人群应为免疫低 下人群，用免疫低下动物模型进行评价更接近实际 情况。利用物理、化学和辐射等造模手段导致暂时 性小鼠免疫低下状态比免疫低下遗传小鼠易于获得 且经济，因而被广泛应用。”“1目前常用的化学造模 药有环磷酰胺、氢化可的松、地塞米松、环孢菌素A、 放线菌素、长春新碱等。环磷酰胺因其是常用的肿 瘤化疗药之一而应用最广。 本实验旨在对环磷酰胺造成小鼠免疫低下状态 的条件进行研究，为建立适合保健食品免疫调节功 能评价的免疫低下模型提供基础。 1和方法 1．1材料 1．1．1造模药物注射用环磷酰胺，为抗肿瘤药， 每瓶200mg，由上海华联制药有限公司制造。批号 为012034。 1．1．2实验动物中国医学科学院肿瘤研究所实 验动物中心提供的二级BalR／c种(批准号：京动字 8910M047)健康雄性小鼠240只，25—309，随机分 组，每组10只。 1．2方法 1．2．1实验依据《保健食品功能学评价程序和检验 方法》进行。 1．2．2造模方法对各组小鼠分别以0、20、40、80、 100、150m—k譬BW的环磷酰胺一次性腹腔注射，注 射量为10ndJkgBW。在给造模药后第2、4、8、ll天 测定脾脏指数、胸腺指数、迟发型变态反应(DTH)、 抗体生成细胞实验(PFC)、半数溶血值实验(HE。)、 巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验指标，测定前4天，用 2％的羊红细胞生理盐水悬液腹腔免疫小鼠。 1．2．3结果统计方法Stata统计软件，anova 方差分析方法进行统计分析。 2实验结果 2．1环磷酰胺对小鼠脾脏指数的影响 1环磷酰胺引起小鼠脾脏指数的变化结果 mg／g 挂：(1)P≤001．(2)P《O05o 建立小鼠免疫低下模型的初步研究——李业鹏计融韩春卉等 万方数据 从表1可以看出脾脏对环磷酰胺比较敏感。一 次性通过腹腔注射给予小鼠O、20、40、80、100、150 ms／ksBW的环磷酰胺，第2天和第4天剂量反应变 化曲线基本相同，且均有剂量反应关系，所有造模组 与对照组比较均具有极显著性差异，即小鼠脾脏指 数处于免疫低下状态。 第8天和第11天，20mg／kgBW组免疫状态恢 复正常，而其它剂量组的脾脏指数代偿性增大，脾脏 指数处于免疫增强状态。 2．2环磷酰胺对小鼠胸腺指数的影响 表2环磷酰胺引起的小鼠胸腺指数变化结果 州g 注：(1)P≤001．(2)P≤0．05。 从表2可以看出胸腺指数在给药后第2天变化 不明显，只有150ms／ksBW组出现了免疫低下状 态；第4天和第8天出现剂量反应关系，且剂量反应 变化趋势相同，在80、100、150n叫ksBW组胸腺指数 出现了免疫低下状态。第1l天时，20、40、80 mg／kgBW剂量组胸腺指数均基本恢复正常，而 100、150n·g／kgBW组还处于胸腺指数指标免疫低下 状态。未见代偿性增强的情况。 2．3环磷酰胺对小鼠迟发型变态反应(DTHJ的影 响 表3环磷酰胺弓I起的小鼠迟发型反应——足跖增厚程度变化结果 mm 注：(1)P≤005，{2)P《001。 从表3可以看出小鼠的迟发型变态反应对环磷 酰胺敏感性差。给予造模药第2天，仅100mg／kg BW剂量组出现细胞免疫低下状态。而第4天和第 8天，均在40mg／kgBW出现低谷。第11天出现了 增强的情况，且有剂量反应关系。 2．4环磷酰胺对小鼠抗体生成细胞数{PFC)的影响 表4环碑酰胺引起的小鼠抗体生成细胞数实验结果 I一个，全脾 注：(I)P≤001．(2)P≤005。 从表4可以看出，环磷酰胺对小鼠抗体生成细 胞数的影响较大，其变化情况与脾脏指数吻合。第 中国食品卫生杂志2001年第13卷第6期 万方数据 2天和第4天均出现剂量反应关系，各剂量组均出 现该指标的免疫低下状态。第8天，20、40ms／ks BW剂量组抗体生成数基本恢复正常，80ms／kgBW 剂量组出现增强高峰。第11天，20、40、80mg／kgBW 剂量组出现增强的状况，100、150mg／kgBW剂量组 抗体细胞生成数仍未恢复。 2．5环磷酰胺对小鼠血清中半数溶血值(HCS0)的 影响 表5环磷酰胺引起的小鼠半数溶J1IL值变化结果 注：(1)P≤oOl，(2)P≤o．05。 从表5可以看出，环磷酰胺对小鼠血清溶血素 的影响较大，其变化情况与脾脏指数吻台，但不如抗 体生成细胞数敏感。第4天和第8天均出现剂量反 应关系，40、80、100mCksBW剂量组均出现该指标 的免疫低下状态。第8天各剂量组均开始恢复，20 mg／kgBW剂量组已恢复了正常。第ll天40、80 tng，kgBW剂量组血清溶血素已恢复。 2．6环磷酰胺对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验 的影响 表6环磷酰胺对小鼠巨嘴细胞吞噬率的影响 ％ 注：(1)P≤ool，(2)P≤o05。 从表6中可以看出环磷酰胺对小鼠吞噬细胞吞 噬能力的影响不大。第2天，100、150mg,／kgBW剂 量组出现吞噬功能低下状态。第4天的40ms／ks BW剂量组出现吞噬功能低下状态。第1l天的20 mg／kgBW剂量组出现吞噬功能低下状态。 表7环礴酰胺对小鼠吞噬指数的影响 注：(1)P≤00l，(2)P《o05。 从表7中可以看出环磷酰胺对小鼠吞噬细胞吞 噬能力的影响不大。第2天，100、150ms／ksBW剂 量组出现吞噬功能低下状态。第4、8天，40 mg／kgBW剂量组出现吞噬功能低下状态。第11天， 建立小鼠免往低下模型的初步研究——李业鹏计融 韩春卉等 9 万方数据 20mg，kgBW剂量组出现吞噬功能低下状态。 3讨论 合适的环磷酰胺量及合适的给药时间可以使小 鼠免疫系统不同的实验指标处于免疫低下状态，但 很难保证一种实验条件下同时造成小鼠四个方面7 项免疫指标的低下状态。本实验的结果与国内外关 于环磷酰胺免疫低下模型的结论一致。【2“】一次性 腹腔注射给予小鼠不同剂量的环磷酰胺一周后，小 鼠免疫状态可以恢复至正常，甚至会出现免疫增强 的现象。小鼠的脾脏指数和体液免疫指标对环磷酰 胺较敏感。 针对保健食品温和、长期作用产生功效的特点， 通过实验得出选用雄性BalB／c小鼠，25—30g，一次 性腹腔注射给药方式，环磷酰胺用量40m∥kgBW， 给药后第2天进行指标测定，可建立抗体生成细胞 实验和血清溶血素实验免疫低下状态小鼠模型。环 礴酰胺用量100me／ksBW；给药后第2天进行指标 测定，可建立迟发性变态反应实验和巨噬细胞吞噬 鸡红细胞实验免疫低下状态小鼠模型。环磷酰胺作 为小鼠免疫低下模型的造模药，对体液免疫系统较 合适。可利用该模型评价保健食品的免疫凋节的预 防作用。 为满足保健食品免疫功能的评价的需求，今后 还需要进行以下工作，该免疫低下模型的进一步验 证；建立其它指标及其它造模药的免疫低下模型。 参考文献： [1]中华人民共和国卫生部．保健食品功能学评价程序和 检验方法[z]1996—07—18 [2]樊永乎，等健脾金丹对正常小鼠与环磷酰胺所致的免 疫受抑小鼠免疫功能的增强作用[jj中国中西医结台 杂志，1993，13(4)：223--225． [3] 丁传林，等．辟胡萝h立体异构体对环磷酰胺处理小鼠 免疫功能的比较研究[J]．中国生化药物杂志．1997，187 (1)：19—21． [4]Mayumi14，UmesueM，NomotoK，eId．Cyelophamlde-in- dueedimmtmalogiealtolerance：anoverview[J]lmmunobiol— ogy．1996，195(2)：129—139 Studyoncydoplmsphamide-imamnodepressedmodel．mmice／LiYepeng，JiRong，H¨Chunhui，eta1．／I ChineseJournalofFoodHygiene．一2001，13(6)：7一10 Abstract：ThevarioususageofCycloohosphamidec￡Lrlinduceimmunodepressedmodelinmice．ThemaleBalB／cmice， whichare25—30gbodyweight．w∞injectedintoabdominalcavityfor40mg／kgBWOl"100mg／kgBWcyclophospha‘ miderespectively。thenthePFCandHC50orDTHandMacrophageLickupChicken’sRBCisofimmunodepressionnext day．Thisimmunodepressedmiceiscompensabilityafteroneweek．80much∞immunoenhance．11leitemsofspleenin· dexandhumnoralimmunityissensitivitytocyelophosphamide． Autlh0I'’saddrtss：UYepeng，TheInstituteofFoodSafetyControlandlrBpection，MinistryoftheHealthPRC，Beiing， 100021PRC KeyWords：CyclophosphamideMiceModels，Immunological { 本刊通告 l i ； j ； j 本刊电话变更为010—87781383，原电话取消。； ； ； { t中国食品卫生杂志，编辑部 } 中国食品卫生杂志2001年第13卷第6期 万方数据