12 蛋白质的生物合成（补充）

null蛋白质的生物合成 （翻译） Protein Biosynthesis，Translation蛋白质的生物合成 （翻译） Protein Biosynthesis，Translation第 十 二 章null翻译——将核酸中由 4 种核苷酸序列编码的遗传信息，通过遗传密码破译的方式解读为蛋白质一级结构中20种氨基酸的排列顺序 。蛋白质合成体系 Protein Biosynthesis System 蛋白质合成体系 Protein Biosynthesis System 第 一 节 参与蛋白质生物合成的物质包括参与蛋白质生物合成的物质包括20种氨基酸(AA)作为原料 酶及众多蛋白因子，如IF、eIF ATP、GTP、无机离子 三种RNA mRNA（messenger RNA, 信使RNA） rRNA（ribosomal RNA, 核蛋白体RNA） tRNA（transfer RNA, 转移RNA）一、翻译mRNA及遗传密码一、翻译模板mRNA及遗传密码 mRNA是遗传信息的携带者遗传学将编码一个多肽的遗传单位称为顺反子(cistron)。 原核细胞中数个结构基因常串联为一个转录单位，转录生成的mRNA可编码几种功能相关的蛋白质，为多顺反子(polycistron) 。 真核mRNA只编码一种蛋白质，为单顺反子(single cistron) 。 null原核生物的多顺反子真核生物的单顺反子null mRNA上存在遗传密码mRNA分子上从5至3方向，由AUG开始，每3个核苷酸为一组，决定肽链上某一个氨基酸或蛋白质合成的起始、终止信号，称为三联体密码(triplet coden)。起始密码(initiation coden): AUG 终止密码(termination coden): UAA，UAG，UGA null破译mRNA遗传密码的科学家中:Nirenbreg;左:Khorana;右:HolleynullNirenbreg:放射性示踪 Khorana:人工合成RNA片段 Holley:测序遗传密码遗传密码表目 录null从mRNA 5端起始密码子AUG到3端终止密码子之间的核苷酸序列，各个三联体密码连续排列编码一个蛋白质多肽链，称为开放阅读框架。 开放阅读框架1. 连续性(commaless)1. 连续性(commaless)遗传密码的特点编码蛋白质氨基酸序列的各个三联体密码连续阅读，密码间既无间断也无交叉。 null基因损伤引起mRNA阅读框架内的碱基发生插入或缺失，可能导致框移突变(frameshift mutation)。 2. 简并性(degeneracy)2. 简并性(degeneracy)遗传密码中，除色氨酸和甲硫氨酸仅有一个密码子外，其余氨基酸有2、3、4个或多至6个三联体为其编码。2. 简并性(degeneracy)2. 简并性(degeneracy)3. 通用性(universal)3. 通用性(universal)蛋白质生物合成的整套密码，从原核生物到人类都通用。 已发现少数例外，如动物细胞的线粒体、植物细胞的叶绿体。 密码的通用性进一步证明各种生物进化自同一祖先。 4. 摆动性(wobble)4. 摆动性(wobble)转运氨基酸的tRNA的反密码需要通过碱基互补与mRNA上的遗传密码反向配对结合，但反密码与密码间不严格遵守常见的碱基配对规律，称为摆动配对。 nullU摆动配对密码子、反密码子配对的摆动现象密码子、反密码子配对的摆动现象二、核蛋白体是多肽链合成的装置二、核蛋白体是多肽链合成的装置目 录null 不同细胞核蛋白体的组成 核蛋白体的组成核蛋白体的组成目 录null核蛋白体的组成 大亚基 小亚基 null原核生物翻译过程中核蛋白体结构模式:A位：氨基酰位 (aminoacyl site)E位：排出位 (exit site)目 录增长中的肽链新进氨基酸残基新进氨基酸残基译码位置从E位离去的t-RNA核糖体移动方向null原核生物翻译过程中核蛋白体三维模型三、tRNA与氨基酸的活化三、tRNA与氨基酸的活化反密码环氨基酸臂tRNA的三级结构示意图tRNA的三级结构示意图nulltRNA的译码作用利用反密码子－密码子配对译码蛋白质生物合成过程 The Process of Protein Biosynthesis 蛋白质生物合成过程 The Process of Protein Biosynthesis 第 二 节 null（一）氨基酰-tRNA合成酶 (aminoacyl-tRNA synthetase) 氨基酸的活化null氨基酰-tRNA合成酶的结构具3个结合位点： 氨基酸 ATP tRNA tRNA与酶结合的模型 tRNA与酶结合的模型桔黄色：tRNAnull氨基酰-tRNA合成酶反应示意图酶结合氨基酸和ATP形成氨基酰-AMP形成氨基酰-tRNA释放氨基酰-tRNAnull第一步反应氨基酸 ＋ATP-E —→ 氨基酰-AMP-E ＋ AMP ＋ PPi 目 录null第二步反应氨基酰-AMP-E ＋ tRNA ↓ 氨基酰-tRNA ＋ AMP ＋ E目 录null氨基酰-tRNA合成酶对底物氨基酸和tRNA都有高度特异性。 氨基酰-tRNA合成酶具有校正活性(proofreading activity) 。 氨基酰-tRNA的表示方法： Ala-tRNAAla Ser-tRNASer Met-tRNAMet null真核生物： Met-tRNAiMet 原核生物： fMet-tRNAifMet（二）起始肽链合成的氨基酰-tRNAnull翻译的起始(initiation) 翻译的延长(elongation) 翻译的终止(termination )整个翻译过程可分为 ：翻译过程从阅读框架的5´-AUG开始，按mRNA模板三联体密码的顺序延长肽链，直至终止密码出现。 一、肽链合成起始一、肽链合成起始指mRNA和起始氨基酰-tRNA分别与核蛋白体结合而形成翻译起始复合物 。null原核生物各种起始因子的功能 （一）原核生物翻译起始复合物形成（一）原核生物翻译起始复合物形成核蛋白体大小亚基分离； mRNA在小亚基定位结合； 起始氨基酰-tRNA的结合； 核蛋白体大亚基结合。nullIF-3IF-11. 核蛋白体大小亚基分离目 录nullIF-3IF-12. mRNA在小亚基定位结合目 录S-D序列 S-D序列 nullIF-3IF-13. 起始氨基酰tRNA( fMet-tRNAimet )结合到小亚基目 录nullIF-3IF-1IF-2GTPGDPPi4. 核蛋白体大亚基结合，起始复合物形成目 录nullIF-3IF-1IF-2-GTPGDPPi目 录（二）真核生物翻译起始复合物形成（二）真核生物翻译起始复合物形成核蛋白体大小亚基分离； 起始氨基酰-tRNA结合； mRNA在核蛋白体小亚基就位； 核蛋白体大亚基结合。null真核生物翻译起始复合物形成过程二、肽链合成延长二、肽链合成延长指根据mRNA密码序列的指导，次序添加氨基酸从N端向C端延伸肽链，直到合成终止的过程。 肽链延长在核蛋白体上连续性循环式进行，又称为核蛋白体循环(ribosomal cycle)，每次循环增加一个氨基酸，包括以下三步： 进位 成肽 转位null延伸过程所需蛋白因子称为延长因子(elongation factor, EF) 原核生物：EF-T (EF-Tu, EF-Ts) EF-G 真核生物：EF-1 、EF-2 null肽链合成的延长因子 又称注册(registration)又称注册(registration)（一）进位指根据mRNA下一组遗传密码指导，使相应氨基酰-tRNA进入核蛋白体A位。 目 录null延长因子EF-T催化进位（原核生物） 目 录nullnullTuTsGTPGDPTuTsGTP目 录（二）成肽（二）成肽是由转肽酶(transpeptidase)催化的肽键形成过程。（三）转位（三）转位延长因子EF-G有转位酶( translocase )活性，可结合并水解1分子GTP，促进核蛋白体向mRNA的3'侧移动 。nullnullEF-G在转位中的作用模式图null真核生物肽链合成的延长过程与原核基本相似，但有不同的反应体系和延长因子。 另外，真核细胞核蛋白体没有E位，转位时卸载的tRNA直接从P位脱落。（四）真核生物延长过程 三、肽链合成的终止 三、肽链合成的终止当mRNA上终止密码出现后，多肽链合成停止，肽链从肽酰-tRNA中释出，mRNA、核蛋白体等分离，这些过程称为肽链合成终止。 null终止相关的蛋白因子称为释放因子 (release factor, RF) 一是识别终止密码，如RF-1特异识别UAA、UAG；而RF-2可识别UAA、UGA。 二是诱导转肽酶改变为酯酶活性，相当于催化肽酰基转移到水分子-OH上，使肽链从核蛋白体上释放。 释放因子的功能原核生物释放因子：RF-1，RF-2，RF-3 真核生物释放因子：eRF null原核肽链合成终止过程 nullRF目 录多聚核蛋白体(polysome)多聚核蛋白体(polysome)——使蛋白质合成高速、高效进行。目 录null电镜下的多聚核蛋白体现象目 录蛋白质合成后加工和输送Posttranslational Processing & Protein Transportation蛋白质合成后加工和输送Posttranslational Processing & Protein Transportation第 三 节主要包括主要包括从核蛋白体释放出的新生多肽链不具备蛋白质生物活性，必需经过不同的翻译后复杂加工过程才转变为天然构象的功能蛋白。多肽链折叠为天然的三维结构 一级结构的修饰 高级结构修饰 一、折叠一、折叠新生肽链的折叠在肽链合成中、合成后完成，新生肽链N端在核蛋白体上一出现，肽链的折叠即开始。可能随着序列的不断延伸肽链逐步折叠，产生正确的二级结构、模序、结构域到形成完整空间构象。 一般认为，多肽链自身氨基酸顺序储存着蛋白质折叠的信息，即一级结构是空间构象的基础。 细胞中大多数天然蛋白质折叠都不是自动完成，而需要其他酶、蛋白辅助。 几种有促进蛋白折叠功能的大分子几种有促进蛋白折叠功能的大分子1. 分子伴侣 (molecular chaperon) 2. 蛋白二硫键异构酶 (protein disulfide isomerase, PDI) 3. 肽-脯氨酰顺反异构酶 (peptide prolyl cis-trans isomerase, PPI)null1. 热休克蛋白(heat shock protein, HSP) HSP70、HSP40和GrpE族 2. 伴侣素(chaperonins) GroEL和GroES家族分子伴侣分子伴侣是细胞一类保守蛋白质，可识别肽链的非天然构象，促进各功能域和整体蛋白质的正确折叠。 nullHSP70的结构蓝色：HSP70；绿色：待折叠片段null热休克蛋白促进蛋白质折叠的基本作用—— 结合保护待折叠多肽片段，再释放该片段进行折叠。形成HSP70和多肽片段依次结合、解离的循环。 nullHSP70循环绿：HSP40 红：HSP70 灰：Grp-Enull伴侣素GroEL/GroES系统促进蛋白质折叠过程 伴侣素的主要作用—— 为非自发性折叠蛋白质提供能折叠形成天然空间构象的微环境。 null疯牛病(BSE)初期症状：四肢抽搐，站立不稳 人亦可感染称Creutzfeldt-Jakob diseasenull疯牛病脑组织显微照片脑组织中出现很多空洞，形成“海绵状脑”null朊病毒Prion： 蛋白质传染源 1982年由Stanley Ben Prusiner宣布发现，1997年获奖null朊病毒的致病过程null朊病毒的解构特点被感染的蛋白质本应为α螺旋，被错误折叠为β折叠解构null蛋白二硫键异构酶 多肽链内或肽链之间二硫键的正确形成对稳定分泌蛋白、膜蛋白等的天然构象十分重要，这一过程主要在细胞内质网进行。 二硫键异构酶在内质网腔活性很高，可在较大区段肽链中催化错配二硫键断裂并形成正确二硫键连接，最终使蛋白质形成热力学最稳定的天然构象。null肽-脯氨酰顺反异构酶 多肽链中肽酰-脯氨酸间形成的肽键有顺反两种异构体，空间构象明显差别。 肽酰-脯氨酰顺反异构酶可促进上述顺反两种异构体之间的转换。 肽酰-脯氨酰顺反异构酶是蛋白质三维构象形成的限速酶，在肽链合成需形成顺式构型时，可使多肽在各脯氨酸弯折处形成准确折叠。 二、一级结构的修饰二、一级结构的修饰（一）肽链N端的修饰 （二）个别氨基酸的修饰 （三）多肽链的水解修饰鸦片促黑皮质素原(POMC)的水解修饰鸦片促黑皮质素原(POMC)的水解修饰三、高级结构的修饰三、高级结构的修饰（一）亚基聚合 （二）辅基连接 （三）疏水脂链的共价连接 四、蛋白质合成后的靶向输送四、蛋白质合成后的靶向输送蛋白质合成后需要经过复杂机制，定向输送到最终发挥生物功能的细胞靶部位，这一过程称为蛋白质的靶向输送。 •蛋白质的靶向输送(protein targeting)null所有靶向输送的蛋白质结构中存在分选信号，主要为N末端特异氨基酸序列，可引导蛋白质转移到细胞的适当靶部位，这一序列称为信号序列 。 • 信号序列(signal sequence)null靶向输送蛋白的信号序列或成分 （一）分泌蛋白的靶向输送（一）分泌蛋白的靶向输送真核细胞分泌蛋白等前体合成后靶向输送过程首先要进入内质网。 信号肽(signal peptide) 各种新生分泌蛋白的N端有保守的氨基酸序列称信号肽。 信号肽的一级结构信号肽的一级结构null信号肽引导真核分泌蛋白进入内质网 目 录（二）线粒体蛋白的靶向输送 （二）线粒体蛋白的靶向输送 目 录（三）细胞核蛋白的靶向输送（三）细胞核蛋白的靶向输送目 录蛋白质生物合成的干扰和抑制 蛋白质生物合成的干扰和抑制 第 四 节null蛋白质生物合成是很多天然抗生素和某些毒素的作用靶点。它们就是通过阻断真核、原核生物蛋白质翻译体系某组分功能，干扰和抑制蛋白质生物合成过程而起作用的。 可针对蛋白质生物合成必需的关键组分作为研究新抗菌药物的作用靶点。同时尽量利用真核、原核生物蛋白质合成体系的任何差异，以设计、筛选仅对病原微生物特效而不损害人体的药物。 null抗生素(antibiotics) 是微生物产生的能够杀灭或抑制细菌的一类药物。抗代谢药物 指能干扰生物代谢过程，从而抑制细胞过度生长的药物，如：6-MP。 某些毒素也作用于基因信息传递过程。一、抗生素类一、抗生素类抗生素抑制蛋白质生物合成的原理 null四环素族目 录 嘌呤霉素作用示意图 嘌呤霉素作用示意图二、其他干扰蛋白质生物合成的物质二、其他干扰蛋白质生物合成的物质毒素(toxin) 干扰素(interferon)白喉毒素(diphtheria toxin)的作用机理白喉毒素(diphtheria toxin)的作用机理白喉毒素++延长因子-2（无活性）干扰素的作用机理干扰素的作用机理干扰素诱导的蛋白激酶dsRNA1. 干扰素诱导eIF2磷酸化而失活ATPeIF2ADPeIF2-P（失活）Pi磷酸酶2. 干扰素诱导病毒RNA降解2. 干扰素诱导病毒RNA降解降解mRNAdsRNA干扰素2-5A合成酶RNaseLRNaseL活化null本章结束 nullfMetfMet目 录