福尔马林引起的急性内脏炎症痛模型

7 一 7 ( n I A叩l Phvs 1999．15(4 福尔马林引起的急性内脏炎症痛模型 尺 (首都医科大学神经生物学系，北京 100054) R } ff 摘要 目的：为深八开展内脏痛的研究，建立急一h生内脏炎症痛模型。：实验选用Wistar大鼠，雌雄不拘，体重 240 -- 270 g。本实验分两个部分：①大鼠乙状结脑壁粘膜下注射福尔马林(0 lm【，5％)复制急性内脏炎症痛模型：②栓 蔼I吗啡(1,~g／kg，2,~g／kg，4 mg／k~)对模型疼痛分敷的影响：结果：①福尔马林具有显著的致痛效应，实验组的疼 痛分敷显著高于对照组(P<0．叭)；②疼痛分数能够反映内脏疼痛程度；③吗啡对模型具有显著、剂量依赖的止痛 效应(P<0 01)。结论：①大鼠乙状结脑壁粘膜下注射福尔马林可作为急性内脏炎症痛模型；②疼痛分敷能客观反 映了内脏疼痛程度，可作为量化指标： ＼ 关键词 急性炎症 福尔马林 吗啡 内脏痛 璐自 击 内脏痛在临床医学中非常常见，但对其产生的 机理却了解甚少。为了研究内脏痛的机制建立内 脏痛模型是一个必需的步骤。本工作是向大鼠结肠 壁注射福尔马林(0．1 m 1．5％)，复制急性内脏 炎 症痛模型，观察并评估其行为反应。 1 材料和方法 1．1 动物及手术 本实验选用 Wistar大鼠，雌雄不拘(由首都医 科大学动物科学部提供)体重 240～270 g。实验时 室温 ～20℃，实验时间9：00～23：00，隔绝噪音。 乙醚气体维持大鼠麻醉，使用37℃温热生理盐水冲 洗直肠内粪便，然后由肛门插入特制直肠窥器．在目 视条件下，距直肠缘 35 nl／n于粘膜下注射 0 1 ml 5％福尔马林或 0．1 m1生理盐水。注射时注意不能 穿透乙状结肠壁。注射完毕缓缓退出直肠窥器，撤 去麻醉，将动物置于观察笼内。大鼠麻醉恢复时间 约 2 min，然后开始记录动物各种行为反应次数．每 15 min为一个时间段，共记录2 h，8个时间段。 l 2 动物分组 实验分两部分：第一部分检验福尔马林致痛效 应，设置 1个实验组：乙状结肠壁注射福尔马林[F (s．w)]和3个对照组(n=8)(1)麻醉组(An)：(2) 麻醉+插入直肠窥器组(An+c)：(3)麻醉 +插入直 肠窥器+乙状结肠壁注射生理盐水组(An+c+s． w)第二部分：检验吗啡的镇痛效应。乙状结肠壁注 射福尔马林 15 min，待其出现行为反应后，向大鼠 腹腔内注射吗啡(1．~／kg，2 mg／kg．4 mg／kg)(M 组)或生理盐水(0．1 mg／kg，NaCl组，n=8)。 1 3 动物行为分析及评分 据报道，几种固定行为反应可反映内脏痛：舔腹 部或外阴区域(1icking of abdomen or perineal area， L)_1 大鼠呈现蹲位，双后肢轻度外展，头部伸向下 腹部，反复舔下腹部或外阴区域，或者头部扭向后肢 外侧，舔臀部外侧或后肢，现较平静，受惊扰则停 止动作；腹部收缩(contraction of abdomen，A)，大鼠 以后肢站立，腹部收缩背部弯曲高耸，身体重心向 前，臀部抬离地面，有时伴有身体晃动．表现较平静， 受京扰不停止动作。伸展身体(body stretching， B) ．2．3J，大鼠以前肢支撑身体，后腹部平贴地面，后 肢后伸，整个身体伸长，肌肉紧张伴有颤抖，表现痛 苦，受惊扰不停止动作；肋腹部收缩(contraction of flanks，F) ．4_，大鼠整个身体平贴地面或以前肢支 撑身体，后腹部平贴地面，由脸面观察双下肢内侧并 拢，肋腹部强烈收缩，呈现明显凹陷，伴有颤抖或身 体扭曲，有时同时伴有伸展身体(B)，表现痛苦，受 惊扰不停止动作。 本工作利用不同时间段内的疼痛计分(pain scores，s)来反应不同时间段内的疼痛程度，计分高 者说明疼痛程度重。前述行为反应可做为疼痛计分 指标，根据疼痛程度依次评分为 L为1分；A为 2 分；B为 3分：F为4分- 。 1．4 评分办法 每 15 min进行一次疼痛计分(s)，其公式为： S：1L+2A+3B+4F[Sl L，A，B，F分别为每15 min内记录到的各行为 反应的次数。 *国家自然科学基金资助项目(No 39670871) 1997—11-28收稿 1999—06—10修回 维普资讯 http://www.cqvip.com 中国应用生理学杂志 l9 ；15(4 1．5 病理切片制作 大鼠分别于：(1)麻醉(An)；(2)麻醉+插入直 肠窥器组(An+C)；(3)乙状结肠壁注射生理盐水 30min后(NaCI(s．w))；(4)乙状结肠壁注射福尔 马林 30min后(F(S．W))，在相应乙状结肠壁切下 1 cm的一段肠壁(3、4包含注射点)，即刻制成冰冻 切片，并 HlE染色，观察其组织病理改变。 1．6 数据分析和统计处理 实验结果以均值±差(j± )表示，组间差 异使用方差分析(A ovA)。 2 结果 2．1 福尔马林的致痛效应 实验组(E(s．W))大鼠在麻醉状态下，在乙状 结肠壁粘膜下注射福尔马林，麻醉恢复后即开始出 现内脏痛的行为反应，同一种行为反应呈现随时间 变化的动态趋势。实验中观察到，在前一小时内主 要表现为肋腹部收缩(F)、伸展身体(B)、腹部收缩 (A)，间而穿插有舔腹部或身体外周区域(L)，但出 现频率极低，l h后L则成为主导行为反应(表1)。 Tab．1 BehaviouraI numbers of groupF(s．W)at differenttime polnts(~-±5．n 8) 与其它对照组相比：在An与An +C组没有表 现出内脏痛的行为反应，其疼痛分数与F(S．W]相 比，在各时间段有显著差别(P<0 01)。在 NaC1 (S．w)中，大鼠麻醉恢复后也表现出内脏痛的行为 反应。如舔腹部或外阴区域(L)，两者的疼痛分数 (s)都呈现出随着时间延长而降低的趋势，但 F(S． w)疼痛分数在各时间段均显著高于 NaCI(S．w)组 (表2，图 1)。 ．2 Pain scores of glc~pNaCI(SW)，andF(SW)at differenttime points(~± ， 8) <0 05 <0 01． r-atl(~w) 450 400 350 300 250 200 1 50 100 50 一 三 l l l l 薹 l l l r n 0 h ∞ 口 Time n F蜒．1Pain seoa-esofgroupNa~(SW)andF(SW)at differ— ent time poin~(x± ) P<0 05 ‘PBPB不仅阻断PL 介导的胸腺细胞凋亡，也阻断蛋白激酶c激动剂佛波a~(PMN)介导的胸腺细胞 凋亡，提示PLA2和蛋白激酶c之间的相互依赖关系。表明PLA2可能是胞内凋亡信号传导中的一部份。 LPS和A23187间接促进PL 活性，是普遍使用的PL 激活因素。因此我们采用LPS和A m作为PL 激动剂。p-BPB 是一种强烷化剂，直接作用于酶的活性中心位点，而氯喹则阻断酶和底物的结合或稳定细胞膜。 总之，我们的初步结果同国外有关PLA2活性凋节细胞凋亡的结果基本一致，表明PL 活性参加调节PMN捅亡活动而 在炎症过程中发挥重要作用。 (-)6国家自然科学基空资助项目，No 39770716；1998—09—03收稿 1999 07一o8垮回) 阻瞳■阻 一 w 嘲 一 一 上瞄豳盟 一 上 茁 维普资讯 http://www.cqvip.com