茶多酚对人膀胱癌细胞光动力学杀伤效应的影响

茶多酚对人膀胱癌细胞光动力学杀伤效应的影响 浙江中医学院附属医院泌尿外科 刘树硕杨永华裘顺安王慎鸿王泽时 光动力疗法的基础是生物光动力敏化作用，目前研究过的大多数生物体系 中的敏化作用均有分子氧参加。在这种敏化剂引发的光氧化过程中，有大量的 氧分子被消耗，也是一种在可见光参与下的特殊氧化过程。叶绿索衍生物 (Chlorophyllderivative，CPD4)作为一种新型植物类光敏剂，其实验及临床方面的 研究已有报道，但目前对应用抗氧化剂是否能阻断光动力学杀伤作用的研究尚 鲜有报道。为了探讨抗氧化剂与光动力学杀伤效应的关系，本实验以人膀胱癌 细胞为对象，在体外培养下，了解茶多酚(TeaPolyphenols，TP)对CPD4光动力学 杀伤效应的影响。 1、材料与 1．1材料瘤株：膀胱移行上皮癌细胞(1-、24)和膀胱腺癌细胞(SCaBER)， 由中国科学院上海细胞生物学研究所细胞库提供。药物：叶绿素衍生物为墨绿 色粉剂，由浙江省中医研究院研制，杭州民生药厂生产，批号：930723—4。药 物用无血清RPMI1640培养基配成1mg／ml溶液，经抽滤除菌后深低温冰箱避 光保存；茶多酚由中国茶叶研究所提供(纯度99％)，用无血清RPMI1640培养 基配成浓度10mg／ml，经抽滤除菌后深低温冰箱保存。MTT试剂购自Sigma公 司：铜蒸气脉冲激光机由浙江大学及浙江医疗器械研究所研制。 1．2方法 两种瘤株细胞均培养在含20％灭活小牛血清和青霉素IOOpg ／mg、链霉素100l_tg／mg的RPMI1640培养基内，细胞均呈单层贴壁生长，在 5％C02饱和湿度，37℃孵箱内常舰培养。指数生长期膀胱T一24和SCaBER 细胞经等量O．02％EDTA和6．25％胰蛋白酶消化制成细胞悬液，隔孔接种在96 孔细胞培养板上。每jL0．2ml培养液内含细胞50．80个，每组4个复孔。不 加任何药液作为对照组：单纯叶绿素组为每孑L内加入浓度为10pg／mg的CPD4 0．1ml。细胞在暗室内室温下逐孔以波长为510nm波长的光及能量为12J／cm2 的激光进行照射，然后将药液弃去，在孵箱内继续避光培养。在部分培养孔中 加入茶多酚0．1ml后分别于3h、6h、9h和12h作MTT比色分析。同时与不加 茶多酚的单纯叶绿素光动力治疗的抑瘤率进行比较。抑瘤率计算方式为：抑瘤 率(％)=[(对照组平均吸光率一实验组)，对照组平均吸光率]×100％。 以上实验重复3遍，所得数据供统计学处理。 1．3统计学方法采用均值单因素方差分析(ANOVA)和q检验，直线相关分 析采用pearson方法。 2、结果 2．1T一24细胞各组的抑瘤率叶绿索组为74．10士4．09，茶多酚3h、6h、9h 和J2h组的抑瘤率分别为65．64士6．24，44．00士5．34，33，364-8．88和21．774-3．58。 茶多酚各组与叶绿素组比较(t检验)分别为：3h组P>O．05，6h、9h和12h组 P<0．001。ANOVA分析各组n=|J均值比较：F值为67．94，PO．叭，其余各组问 比较P>O．00l。q值检验：除9h‘j12h组之问比较Po．05，9h和12h组P <0．001。ANOVA分析各组间均值比较：F值为38．97，PO．01，9h组与12h组之间比较P>0．05， 其余各组问比较P>O．001。q值检验：除9h与12h组之问比较P>O．05外，其 余各组问比较P