HPLC法测定莲芝消炎片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量

594 中国药事 2007年第 21卷第 8期 HPLC法测定莲芝 莲内酯的含量 消炎 片中穿心莲内酯和脱水穿心 吴柳春，高敦宇，黄桂华，李可林 (广西柳州食品药品检验所，柳州 545001) 摘要： 建立莲芝消炎片中脱水穿心莲内酯、穿心莲内酯含量的 HPI C测定方法。色谱柱为 SUNTEK Kromasil C18柱 ；流动相为甲醇一水 (60：40)，流速为 0．8 mL ·rain- ，波长为 250 nm。线性范围为 脱水穿心莲 内酯 0．8000~2．240~g，r=0．9999，穿心莲内酯 0．1011～O．2831gg，r一0．9995，平均回收率 脱水穿心莲内酯为 98．99 ，RSD为 1．4 ，穿心莲内酯为 101．48 ，RSD为 1．5 。方法准确可靠，简 单易行 ，适用于莲芝消炎片中脱水穿心莲内酯、穿心莲内酯的含量测定。 关键词 ： 莲芝消炎片 ；高效液相 色谱 法；含量测定 中图分类号：R927．2 文献标识码：A 文章编号：1002—7777(2007)08—0594～02 Determination of Lianzhi Xiaoya _’P川 by HPLC W u Liuchun，Gao Dunyu，Huang Guihua and Li Kelin (Institute for Food and Drug Control of Liuzhou ， Guangxi 545001) ABSTRACT A HPLC method for the dRtermination of Lianzhi Xiaoyan Pil1 was established．A SUNTEK KromasiI C18 column was used with methanol～water (60：40) as mobile phase．The flow rate was 0．8 mL ·min- and detection wavelength was 250 nm，The linear range for deoxyandrographolide was 0．8000～ 2．240／~g (r一0．9999)and those for andrographolide was 0．1011～ 0．2831~g (r一 0．9995) ．The average recovery and RSD for deoxyandrographolide were 98．99 and 1．4 ，and those for andre·grapholide were 101．48 and 1．5 respectively．The method was accurate， reliable， simple and feasible，it could be used for the content determination of Lianzhi Xiaoyan Pil1． KEY WoRDS Lianzhi Xiaoyan Pil1．HPLC：determination 莲芝消炎片是 由穿心莲 、山芝麻组成的复方制 剂，为有效控制其产品质量，笔者建立了同时测定产 品中穿心莲 内酯和脱水穿心莲内酯的高效液相色谱 方法，为完善该制剂的质量标准Ⅲ提供实验依据。 1 仪器与试剂 岛津 LC一2010A 高效液相色谱仪，紫外检测 器，LC solution色谱工作站。AS7240BT超声波 清洗器 (天津奥特赛恩斯仪器有限公司)。脱水穿 心莲 内酯对照 品 (中国药品生物制 品检定所 ，批 号 ：0854—200204)、穿心莲 内酯对照品 (中国药品 生物制品检定所 ，批号 ：0797—9803)，莲芝消炎片 (柳州亿康 药业有限责任公 司，批号：050517， 050519，0511151)。甲醇为色谱纯，水为超纯水， 其余试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2．1 色谱条件：色谱柱：SUNTEK Kromasil C18 (4．6 mm× 250 mm，5 m)，流动 相 ：甲醇一水 (60：40)，流速：0．8 mL ·rain- ，检测波长：250 nm，进样体 积 ：2O L，柱 温 ：4O℃，理论 板数 ： 按穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰计算均应不低于 2000，分离度：大于 10。 2．2 对照品溶液的制备 ：分别取脱水穿心莲 内酯 、 穿心莲内酯适量 ，精密称定 ，加 甲醇制成每 1 mL 含 0．08 mg的脱水穿心莲内酯对照品溶液及 0．01 mg的穿心莲 内酯对照品溶液。 2．3 供试品溶液的制备：取本品 2O片，除去包 衣，精密称定，研细，取 0．5 g，精密称定，置具 塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25 mL 密塞，称定 维普资讯 http://www.cqvip.com 中国药事 2007年第 21卷第8期 595 重量，超声处理 1 h，放冷，再称定 重量 ，用 甲醇 补足减 失的重量，摇 匀，滤过，精 密吸取续 滤液 10 mI ，加在中性氧化铝柱上 ，用 甲醇 2O mL洗 脱，收集洗脱液，置 50 mI 量瓶中，加甲醇至刻 度，摇匀，用微孔 滤膜 (0．45~m)滤过 ，取 续滤 液，即得。 2．4 阴性对照溶液的制备：按处方比例配制缺穿 心莲 的阴性空 白样 品，按 2．3项下 的制备方法制 成阴性对照溶液。 分别吸取对照品溶液，供试品溶液，阴性对照 溶液注入色谱仪色谱图，阴性对照溶液在穿心 莲内酯、脱水穿心莲内酯峰位置无干扰，见图 1。 ： ． 八 0 ， 10 l5 2I) t，ml a．穿心莲内酯对照品；b．脱水穿心莲内酯对照品； C．样 品；d．阴性对照。 图 1 莲芝消炎片 HPLC色谱 图 2．5 线性关系考察：分别精密吸取脱水穿心莲内 酯和穿心莲内酯对照品溶液 10，14，18，20，24， 28 L，按上述色谱条件测定峰面积，以对照品进 样量 ( g)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标 准曲线。得线性回归方程为：脱水穿心莲内酯y一 4．72776×10 X+5．1187×10 (r一0．9999)，线 性范 围 为 0．8000～ 2．240~g；穿 心 莲 内酯 y一 8．08301×10。X+6．34824×10 (r一0．9995)，线 性范 围为 0．1011～0．2831 g。 2．6 精密度试验：精密吸取脱水穿心莲内酯、穿 心莲内酯对照品溶液各 2O肚L，重复进样 6次，以 峰面积计算脱水穿心莲内酯和穿心莲内酯的RSD， 分别为 0．25 、0．96 。 2．7 稳定性试验：吸取同一供试品溶液，每隔 2 h测定 1次，10 h内连续测定 6次，各成分 RSD 均小于 2．0 ，结果表明，样品在 10 h内稳定。 2．8 重 复 性 试 验 ：取 同 一 批 号 样 品 (批 号 ： O511151)，按含量测 定项 下 的方 法操 作，平行 6 份，照上述色谱条件测定，测得脱水穿心莲内酯的 含量平 均 值 为 19．020mg·g～，RSD 为 0．45 9／6； 穿心莲内酯 的含 量平均值为 1．598mg·g ，RSD 为 0．95 。 2．9 回收率试验：精密称取已知含量的样品 6份 (批号：O511151)，分别精密加入脱水穿心莲内酯、 穿心莲内酯 (以溶液形式加入)，按上述测定方法 进行测定，结果见表 1、表 2。 表 1 脱水 穿心莲 内酯 回收率 测定 结果 (n一6) 样品中 对照品 测得量 回收率 平均回收率 RSD 含量(rag)加人量(rag)总量(rag) ( ) (％) ( ) 5．717 5．944 11_692 1OO．52 5．708 5．944 11_652 1OO．OO 5．736 5．944 11_690 1OO．17 5．725 5．944 11．560 98．17 98．99 1_4O 5．698 5．944 11．494 97．51 ． 73S S．944 11．S3S 97． R 表 2 穿心莲内酯回收率测定结果 (n一6) 2．10 样品测定：按前述方法制备对照品溶液与供 试品溶液，分别吸取对照品溶液与供试品溶液各 2O L，按上述色谱条件测定并计算含量，结果见 表 3。 表 3 样品含量测定结果 (n一3) mg／片 3 讨论 实验结果表明，本法专属性强，简单易行，阴 性无干扰，可满足莲芝消炎片中脱水穿心莲内酯、 穿心莲内酯的含量测定。在供试品溶液制备 中，比较了超声 1小时、浸泡 1小 时与超声 0．5 小时、加热 回流 0．5小 时的提取 效果，结果表 明 超声 1小时提取较好。 参考文献 ： El3 卫生部药品标准 ES3．ws3一 3977—98 维普资讯 http://www.cqvip.com