鹿瓜多肽治疗激素性股骨头坏死组织学分析

�基础与临床� 鹿瓜多肽治疗激素性股骨头坏死组织学 申利彬 (山西晋城煤业集团总医院急诊科, 晋城 � 048006) 摘要!� 目的 � 探讨鹿瓜多肽对于缺血坏死股骨头组织学的影响, 探讨鹿瓜多肽治疗股骨头缺血坏死的机制。 方法 � 选用健康新西兰大白兔 42只,体质量 3~ 4 kg,使用脂多糖及激素诱发股骨头坏死 ,将造模成功后的 36只新西兰 大白兔随机分为实验组及对照组 ,实验组按 0. 6 m l/kg肌内注射鹿瓜多肽, 对照组不做任何处理,在用药开始 4、8、12周 各选取 6只动物, 使用过量的戊巴比妥将动物处死,取实验组和对照组股骨头进行 HE染色, 计算空骨陷窝率、成骨细胞 计数。结果 � 实验组成骨细胞计数在使用鹿瓜多肽 4、8、12周显著高于对照组, 而空骨陷窝率在使用鹿瓜多肽 4、8、12 周显著低于对照组, 鹿瓜多肽可显著促进坏死股骨头的修复及成骨细胞的增殖。结论 � 鹿瓜多肽可显著促进坏死股骨 头的修复及成骨细胞的增殖,从而促进缺血坏死股骨头修复。 关键词!� 鹿瓜多肽; 股骨头缺血坏死;修复 � � 股骨头缺血坏死 ( osteonecrosis o f the femora l head, ONFH )多发生于中青年, 是一种常见的骨科难 治性疾病,其发病机制复杂多样,自然进程多为先累及 局限的股骨头承重区,引起该区域的塌陷,而后软骨下 骨骨折,最后引起髋关节的退变 [ 1]。糖皮质激素的大 量应用是非创伤性股骨头缺血坏死最常见的原因之 一,在美国, 40%接受糖皮质激素治疗的人群出现股骨 头缺血坏死 [ 2 ]。鹿瓜多肽注射液是从鹿科动物梅花 鹿的骨骼和葫芦科植物甜瓜的干燥成熟种子中提取的 多肽类活性成分,骨诱导多肽类生物因子可有效促进 机体内影响骨形态和吸收的骨源性生长因子的合成, 包括骨形成发生蛋白 ( BM P)、转化生长因子 B( TGF- B )、成纤维细胞生长因子 ( FGF)等 [ 3 - 4 ]。鹿瓜多肽对 于股骨头坏死的疗效文献报道甚少, 本实验通过鹿瓜 多肽作用于兔坏死股骨头, 通过组织学研究初步观察 其疗效。 1� 材料与方法 1. 1� 模型制作:选用健康新西兰大白兔 42只, 雌雄不 限,体质量 3~ 4 kg, 由山西医科大学实验动物中心提 供。使用 Y amamoto等 [ 5]的造模方法: 动物适应性喂 养 1周后精确称重,首次应用脂多糖 10 �g /kg经兔耳 缘静脉注射, 24 h后再注射一次, 第 2次注射脂多糖 24 h后,肌肉注射甲基强的松龙, 45 mg /kg, 1次 /d, 连 续 3 d。每只动物腹腔注射青霉素 105 U /d预防感染。 激素应用 6周后动物存活 38只, 随机取 2只兔的股骨 头分别进行 HE染色和 X线摄片。HE染色可以看到: 骨小梁稀疏变细,结构紊乱, 有碎片出现,骨小梁骨细 胞陷窝空疏,骨细胞核固缩,骨髓腔内造血组织明显减 少,脂肪细胞体积增大, 有的融合成泡状。X线可见: 股骨头骨质密度不均匀。证明股骨头出现了典型的 坏死。 1. 2� 治疗方法:造模成功后将 36只新西兰大白兔随 机分为实验组和对照组各 18只。对照组不给予任何 处理;实验组 0. 6m l/kg肌内注射鹿瓜多肽, 1次 /d,共 给药 12周。 1. 3� 取材及计量方法: 在用药开始 4、8、12周各选取 6只动物, 使用过量的戊巴比妥将动物处死, 取实验组 和对照组股骨头, 进行 HE染色、计算空骨陷窝率、成 骨细胞计数。 1. 3. 1� HE染色:股骨头生理盐水冲洗后立即置入质 量分数为 4%的多聚甲醛 ( pH = 7. 4)中, 4 ∀ 下固定 24~ 48 h,经质量分数为 20%的 EDTA脱钙 4周。脱 钙满意后梯度酒精脱水, 二甲苯透明,纵向石蜡包埋, 沿股骨头冠状面做层厚 4 �m纵向组织切片,行 HE染 色与组织学观察。 1. 3. 2� 空骨陷窝率的计算: 20倍镜下任选 10个视 野,每个视野计数 50个骨陷窝, 分别数出空缺的骨陷 窝数,求出百分比,取 10个视野的平均值, 求出空骨陷 窝率。 1. 3. 3� 成骨细胞计数: 成骨细胞位于骨小梁的边缘, 细胞较骨细胞大,胞浆蓝染。根据上述特点,每个组织 选取 2张组织切片, 按照从左至右,从上到下的顺序, 随机选取 2个骨小梁区域。在 200倍光学显微镜下, 对成骨细胞进行计数,取平均值。 �103�临床医学 2011年 4月第 31卷第 4期 � C lin icalM ed icine, Apr. 2011, V o.l 31, No. 4 1. 4� 统计学方法:所得数据用均数 #差 ( �x # s ) 表示,采用 SPSS 13. 0统计学软件对相同时间所获得 的实验组和对照组的数据进行配对 t检验, P < 0. 05 为差异有统计学意义。 2� 结果 2. 1� 组织学检测: 4周实验组骨小梁周围出现少量梭 形成骨细胞,排列稀疏, 发现骨细胞突起;而对照组骨 小梁变细、稀疏, 大面积骨陷窝空虚, 同时可见固缩的 成骨细胞核。8周实验组骨小梁周围出现成单行排列 的成骨细胞,骨小梁内幼稚骨细胞增生;而对照组部分 骨小梁断裂。 12周实验组可以观察到骨小梁明显增 厚且被大量的成骨细胞所包绕,可见新生的骨细胞;而 对照组大部分骨小梁断裂。两组成骨细胞计数及空骨 陷窝率比较见表 1~ 2。 表 1� 两组成骨细胞计数比较 (个, �x # s ) 组别 例数 4周 8周 12周 实验组 18 107 # 12a 125 # 15a 141 # 10a 对照组 18 37 # 5 39 # 7 28 # 3 � 注:与对照组相比, aP < 0. 05 表 2� 两组空骨陷窝率比较 ( % , �x # s ) 组别 例数 4周 8周 12周 实验组 18 20 # 4a 15 # 5a 13 # 3a 对照组 18 26 # 6 28 # 5 35 # 6 � 注:与对照组相比, aP < 0. 05 3� 讨论 股骨头坏死是由不同病因引起的股骨头血液供应 破坏或骨细胞变性, 导致骨的有活力成分死亡的病理 过程。治疗股骨头坏死的方法很多, 但迄今尚未有一 种满意的方法可保存股骨头的活力, 防止软骨下骨塌 陷,减缓关节退行性病变。 鹿骨提取物中骨诱导多肽类生物因子可有效促进 机体内影响骨形成和吸收的骨源性生长因子的合成, 包括骨形态发生蛋白 ( BMPs)、转化生长因子 - � ( TGF- � )、成纤维细胞生长因子 ( FGF)等, 从而具有 促进坏死股骨头修复的作用; 甜瓜籽提取物与补充的 骨诱导多肽类生物因子具有协同作用, 促进骨源性生 长因子的合成。此外,鹿瓜多肽注射液中富含的多种 游离氨基酸,为骨细胞合成 BMPs、TGF- �、FGF等骨 源性生物因子提供原料,促进骨源性生物因子的合成 有机钙、磷离子可参与钙磷代谢,提供坏死股骨头修复 所需要的物质。李章华等 [ 6]通过动物试验对 X线片 分析、组织学分析、免疫组化观察、生物力学分析等方 面观察分析得出结论:鹿瓜多肽注射液能促使骨折处 早期分泌各种生长因子促进成骨细胞出现、成熟,进而 缩短骨折愈合时间。崔晓忠等 [ 7]采用鹿瓜多肽注射 液 10m l+葡萄糖或氯化钠静脉滴注, 每天 1次, 15 d 为 1个疗程,连用 2个疗程。应用鹿瓜多肽注射液后 肿胀消退快,疼痛缓解明显, 骨痂形成早,骨折愈合提 前,鹿瓜多肽注射液促进骨折愈合的疗效。周军 [ 8]应 用鹿瓜多肽治疗骨不连和骨折延迟使愈合 36例,取得 了较好的临床疗效。方法是将鹿瓜多肽 8~ 12 m ,l加 入 250~ 500 m l生理盐水静脉滴注, 每天 1次, 10~ 15 d为 1个疗程, 用药 3个疗程。其对骨折延迟的治 愈有效率高达 80. 6% ,充分显示其在治疗骨折延迟愈 合中的治疗作用。实验组成骨细胞计数在使用鹿瓜多 肽 4、8、12周显著高于对照组,而空骨陷窝率在使用鹿 瓜多肽 4、8、12周显著低于对照组,鹿瓜多肽可显著促 进坏死股骨头的修复及成骨细胞的增殖。鹿瓜多肽可 显著促进坏死股骨头的修复及成骨细胞的增殖, 从而 促进缺血坏死股骨头修复。 参考文献 [ 1 ] � MontMA, Jones Lc, Hungerford DS. Non tranm afie osteon ecrosis of the femora l head: ten years later[ J] . J Bone Join t S tag( Am ) , 2006, 88 ( 5) : 1117- 1132. [ 2] � K oo KH, K im R, K im YS, et a.l R isk period for develop ing osteon ecro� sis of the fem oral head in pat ien ts on stero id treatm ent[ J] . C lin Rheu� m ato,l 2002, 21( 4) : 299- 303. [ 3] � 赵椰枫,杨志强,王鸥,等. 鹿瓜多肽注射液治疗中老年胸腰椎骨 折 44例 [ J] .中国骨与关节损伤杂志, 2007, 22( 8) : 702. [ 4] � 沈海丽,杜兰生,魏佳熙, 等.联合鹿瓜多肽注射液治疗骨性关节 炎的疗效分析 [ J] .中国医药, 2006, 1( 10 ): 632- 633. [ 5] � Yam am oto T, H irano K, Tsutsu iH, et a.l Cort icosteroid enhan ces the experim ental induct ion of osteon ecros is in rabb itsw ith Shw artzman re� action[ J] . C lin O rthop, 1995, 316 ( 7) : 235- 243. [ 6] � 李章华,崔西龙,王志林, 等.松梅乐注射液促进骨折愈合的机理 研究 [ J] . 武汉大学学报, 2009, 30 ( 1) : 111- 114. [ 7] � 崔晓忠, 卢致顺, 戚磊京. 鹿瓜多肽促进骨折愈合的临床观 察 [ J] . 临床和实验医学杂志, 2006, 7 ( 5) : 954- 955. [ 8] � 周军. 鹿瓜多肽治疗四肢骨折延迟愈合 36例疗效观察 [ J] . 中国 骨与关节损伤杂志, 2007, 22( 9) : 787. (收稿日期: 2011- 01- 05 ) (本文编辑:牛蓁 ) �104� 临床医学 2011年 4月第 31卷第 4期 � C l in icalM ed icin e, Apr. 2011, Vo.l 31, No. 4