蜂花粉的雌激素样作用研究

第 14 卷第 4 期 2004 年 8 月 　 江 苏 大 学 学 报 (医 学 版) Journal of Jiangsu University(medicine) 　 Vol. 14 No. 4 Aug. 2004 　 　 　 　 　 　 蜂花粉的雌激素样作用研究 张　　1 , 陈　钧1 , 杨小明1 , 吴建华2 , 杨　欢1 (1. 江苏大学生物与环境学院 ,江苏 镇江 212013 ;2. 南京中医药大学 98 药理专业 , 南京 210029) [摘 　要 ] 　目的 :以大豆异黄酮为阳性对照 ,试验蜂花粉的雌激素样作用。方法 :采用大鼠子宫称重法 ,分别测定试 验组和对照组大鼠给药后的子宫重量百分率。结果 :蜂花粉剂量为 0133 g/ d 时 ,大鼠子宫明显增加 ,表现出显著的雌 激素样作用。结论 :4111 g·(d·kg) - 1的蜂花粉能够体现雌激素样作用 ,但作用的大小可能和吸收有很大关系。 [关键词 ] 　蜂花粉 ; 大豆异黄酮 ; 雌激素样作用 [中图分类号 ] 　R96 　　[文献标识码 ] 　A 　　[文章编号 ] 　1671 - 7783(2004) 04 - 0285 - 03 The Study of Estrogen Function of the Bee Pollen ZHANG Zhen1 , CHEN Jun1 , YANG Xiao2ming1 , WU Jian2hua2 , YANG Huan1 (1. School of Biological & Environmental Engineering ,Jiangsu Univercity , Zhenjiang Jiangsu 212013 ; 2. Nanjing Univercity of Traditional Chinese Medicine , Nanjing 210029 ,China) [ Abstract] 　Objective : To observe the estrogen style function of the Bee Pollen through Bee Pollen and experi2 ment contrast of the Soy Isoflavone in this experiment . Methods : With the classical experiment method the uterus weighed [1 ], and test and contrast groups of SD rats were given the uterus weight , then divided by one’s own weights , we got uterus weight percentages. Results : Estrogen style function had been shown for the experiment group of given 333 mg/ d. Conclusion : Given 4111 g·(d·kg) - 1 bee pollens shows estrogen style function , but the power of function might have heavily related with absorbtion. [ Key words] 　Bee Pollen ; Soy Isoflavone ; Estrogen style function 　　蜂花粉中含有多种化学成分 ,其中有中不饱和 脂肪酸、黄酮类化合物、蛋白质、肽类和氨基酸 ,活性 多糖类和维生素 C等[1 ] 。蜂花粉目前被广泛用来治 疗和激素水平有关的疾病如男性前列腺疾病等。有 文献报道 :葵花粉具有明显地抑制小鼠实验性前列 腺增生的作用 ,以及利尿、抗炎作用 ,并能降低小鼠 血清睾酮含量 ,实验还证明葵花粉具有雌激素样作 用[2 ] 。国内对蜂花粉的激素样作用的报道不少[3 ] , 但是真正和雌激素样作用相关 ,且能明确证明蜂花 粉的雌激素样作用的相关报道不多。 大豆异黄酮具有类雌激素样作用 ,是一类典型 的植物性雌激素。 蜂花粉中富含大量的黄酮类成分[2 ] ,其可能反 映出来的雌激素样作用可能也和大豆异黄酮相似 , 类似于和雌激素空间结构近似的大豆异黄酮的可能 的生物效应机理。 本实验以典型的植物雌激素大豆异黄酮做阳性 对照 ,利用植物性雌激素的类似雌激素的同化作用 , 促进蛋白质合成使子宫增重 ,使子宫重量与每 100 g 体重比值上升 ,并与对数剂量呈线性关系 ,呈正相 关。 1 　材料与方法 111 　仪器与试剂 J Y882Ⅱ超声波细胞粉碎机 (上海新芝生物研究 所/ 宁波新芝科研究所) ;MP502B 型电子天平 (上海 精科天平) ;梅特勒 - 托利多 AE240 电子分析天平 (梅特勒 - 托利多仪器上海有限公司) 。蜂花粉 (北 京知蜂堂食品有限公司 ,批号 :20030616) ;大豆异黄 酮 (华北制药集团有限责任公司 ,含量 80 % ,批号 : 030203) ;羟苯乙酯 (化学纯 ,中国医药集团上海化学 试剂公司 ,批号 :w20021107) ;无水乙醇 (分析纯 , [基金项目 ] 镇江市科技局高新技术项目 (SG2000019) [作者简介 ] 张　　 (1977 - ) ,男 ,在读硕士研究生。 © 1994-2008 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 上海振兴化工一厂 ,批号 :200211367) 。 112 　实验动物 封闭群 SD 大鼠 (雌性 ,出生 20 d ,体重 70 g 左 右 ,由江苏大学动物中心提供) 。 113 　实验方法 11311 　溶液的配制 　50 %乙醇溶液的配制 :量取 250 ml 无水乙醇 ,以注射用水定容至 500 ml ,即得。 大豆异黄酮混悬液的配制 :精取 2127 g 大豆异 黄酮 ,加入 25 ml 注射用水中 ,60 ℃水浴加热并不停 搅拌 ,待混匀后 ,加注射用水至 30 ml ,摇匀 ,即得。 11312 　蜂花粉的预处理[7 ,8 ] 　蜂花粉经用 50 %乙 醇浸泡 (物液比为 1 :7) 后 ,在 J Y882Ⅱ超声波细胞粉 碎机里 ,30 ℃下 ,充分搅拌 6 h。超声破壁 (功率 15 kW)后 ,混合液经 100 目筛过滤 ,滤渣烘干 ,粉碎后 , 筛选除去纤维 ,可得 200 目左右的蛋白。滤液浓缩 , 烘干后 ,加入蛋白 ,加适量羟苯乙酯 ,以注射用水为 溶媒 ,配制成 670 mg/ ml 蜂花粉混悬液。 11313 　动物处理[9 ,10 ] 　SD 大鼠按体重随机分为 5 组 ,每组 10 只。阳性组灌胃 600 mg 大豆异黄酮/ kg大鼠 ;试验组分成高、中、低三个剂量 ,分别灌以蜂 花粉 4111g·(d·kg) - 1、8122 g·(d·kg) - 1和 12133 g· (d·kg) - 1 (蜂花粉剂量根据北京知蜂堂食品有限公 司生产的蜂花粉的所示剂量 ,通过公式 db = da ×Rb/ Ra ×(Wa/ Wb) 1/ 3 [11 ]近似换算成 SD 大鼠剂量而得) ; 阴性组每只灌以 110 ml H2O。给药前禁食 24 h ,给 药每天一次 ,连续 3 天。最后一次给药物后 24 h ,脱 颈椎处死 ,称量体重后 ,剖腹摘取子宫 ,称其湿重。 11314 　数据统计 　子宫重量百分率 = 子宫湿重/ 体 重 ×100 % ,结果以 €x ±s 表示 ,以 SAS6112 软件进行 t 检验。数据以 SAS6112 软件处理。 2 　结 　果 各试验组、阴性和阳性对照组大鼠的体重、子宫 湿重、子宫重量百分率见表 1。阴性组 SD 大鼠灌胃 三日后 ,体重没有明显增加 ;阳性组灌胃 60 mg/ d ,三 日后 ,体重相对于阴性组也没有明显差异 ,甚至略有 减少 ,但子宫湿重增加明显 ; 低剂量组灌胃给药 4111 g·(d·kg) - 1 ,三日后可见体重相对增加 ,且子宫 湿重也有明显增加 ;中剂量和低剂量组分别给药 8122 g·(d·kg) - 1和 12133 g·(d·kg) - 1 ,三日后子宫 湿重没有明显增加 ,且高剂量组的体重还有所降低 , 可能剂量过大 ,导致花粉不被吸收 ,以致难以起效。 t 检验证明低剂量组中明显存在雌激素样作用。 表 1 　不同剂量的蜂花粉对子宫湿重的影响 n = 10 分组 平均体重 (g) 平均子宫湿重 (mg) 子宫湿重 (mg) / 体重 (g) P 值 阴性组 7814 ±1016 33139 ±13119 01428627 阳性组 7712 ±1416 57112 ±11162 01748684 < 0105 蜂花粉混悬液[g·(d·kg) - 1 ] 　　　　4111 8117 ±1912 43148 ±9185 0153848 < 0105 　　　　8122 7812 ±1818 36155 ±12181 01470557 > 0105 　　　　12133 7618 ±2013 34191 ±7107 01460438 > 0105 3 　讨 　论 在本实验的实验条件下 ,发现蜂花粉有一定的 雌激素作用。对于出生 20 d 的 SD 封闭群雌性大 鼠 ,相对于空白试验组来说 ,灌胃给药 333 mg/ d ( = 4111 g·(d·kg) - 1 ,三日后 ,蜂花粉的雌激素样作用明 显 ,体现出统计学差异 ( P ≤0105) 。本实验证明蜂 花粉确实存在雌激素样作用。 本实验还发现 ,给蜂花粉药量为 666 mg/ d 和 1 g/ d ,三日后 ,大鼠体重减轻 ,没有体现出明显的雌激 素样作用。这可能是因为刚离乳的大鼠消化系统还 不够完善 ,不能接受较大的花粉的摄入 ,在一定范围 内 ,随着给药剂量的增加 ,大鼠的体重反而有减轻的 趋势。可能本实验用大鼠在本试验的条件下对蜂花 粉的摄入有一定的限度。超过这一限度 ,并不能体 现出明显的雌激素样作用。 [参考文献 ] [1 ] 　郭芳彬. 花粉与高脂血症[J ] . 养蜂科技 ,2003 , (5) : 31 - 35. 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All rights reserved. http://www.cnki.net conjunctivitis sicca2KCS)已有 50 多年了。目前公认的 干眼症是指各种原因引起的泪液质和量 ,或动力学 的异常 ,导致泪膜不稳定和眼表组织病变 ,并伴有眼 部不适为特征的一类疾病的总称 ,诊断标准尚未统 一 ,主要根据以下四个方面 : (1) 症状 ; (2) 泪液分泌 量不足或泪膜不稳定 ; (3) 眼表面上皮细胞的损害 ; (4)泪液的渗透压 ,临床诊断是至少应符合两项。正 常人泪液的分泌量随年龄的增加而出现生理性的减 少 ,有报道 [2 ] 与 18 岁时相比 , 40 到 45 岁时减少 50 % ,65 岁时减少 60 %。另外雌激素的生理性减少 被认为与 SS的发病有关 ,故老年女性更易于患干眼 症。目前除部分重症干眼症患者采用自体游离颌下 腺移植手术外 ,局部应用人工泪液的替代物仍然是 治疗干眼症的最主要的临床方法。 在角结膜最外层上皮细胞的表面布满了密集的 微绒毛和微皱襞 ,这些细胞胞质内含有单层膜围绕 的囊泡 ,其内容物为糖蛋白。囊泡提供微绒毛芽生 所需要的膜 ,它的糖蛋白内容物发布到整个上皮细 胞表面 ,参与形成细胞外被的多糖 - 蛋白质复合物。 电镜研究显示附着于细胞膜表面的糖蛋白长链深入 到来自杯状细胞的粘液之中。提示这是粘液附着到 上皮细胞膜的物理附着点 ,也是使泪膜贴附到上皮 并确保其稳定的重要一步[2 ] 。由此可见 ,泪膜是角 膜的屏障 ,角结膜上皮是泪膜附着的基床 ,完整的上 皮结构有利于泪膜张力的维持 ,泪膜的不完整可引 起角结膜上皮的损害 ,而角结膜上皮的不完整性反 过来加大了泪膜附着的难度。因此 ,对于干眼症的 病人 ,尽快恢复其角膜上皮的完整性 ,是延缓泪膜破 裂 ,减轻症状的一条重要途径。 贝复舒滴眼液的主要成分是基因重组的牛碱性 成纤维细胞生长因子。它是角膜组织的正常生理成 分 ,在正常角膜组织全层中都有分布 ,正常状态下主 要以无 (或)低活性形式存在于细胞间质中 ,对来源 于中胚层和外胚层的细胞具促进修复和再生的作 用。有研究表明 ,贝复舒能刺激角膜上皮细胞增殖 移行 ,加速角膜上皮再生。贝复舒能在一定程度上 延缓和减轻角膜上皮的再脱落损伤[4 ] 。我们的临床 观察结果与以上研究结果一致。贝复舒治疗组与对 照组相比 ,治疗前后两组角膜荧光素染色结果有显 著差异 ,泪膜破裂时间贝复舒治疗组也较对照组明 显延缓。 本次观察结果显示 : 治疗组与对照组相比 , Schimer 试验结果无显著差异 ,这表明贝复舒滴眼液 不是通过直接改变干眼症患者泪液分泌或排泄量的 途径来达到治疗目的 ,而是通过修复角膜上皮 ,延缓 泪膜破裂时间来实现治疗干眼症的。 因此 ,我们认为贝复舒滴眼液对干眼症患者能 起到一定的治疗效果。 [参考文献 ] [1 ] 　Tsubota K,Toda I , Yagi Y,et al. 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