HPLC法测定阿奇霉素及阿奇霉素胶囊的含量

中国药师 2010年第13卷第1期chimPIlamacist2010．V01．13No．1 方法。盐酸噻吩诺啡原料药的有关物质检测HPLC方法已 经建立¨J。本研究建立的HPLC方法表明主峰与各杂质峰 均能达到基线分离(图9)，具有灵敏度高的优点，达到了检 测需求，可用于盐酸噻吩诺啡片的有关物质测定。 一般HPLC方法中药物的检测波长选择最大吸收波长， 盐酸噻吩诺啡的最大吸收波长为215unl，接近末端吸收，易 产生干扰。同时由于片剂剂型的原因，辅料种类较多，含有 赋形剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂等，末端吸收较强，干扰主药 的测定(如图2所示)，因此215砌不是最佳检测波长。由 图1可见盐酸噻啡诺啡在242am存在第二个吸收峰。其吸 光系数约为215nln处的45％，但消除了辅料的末端吸收所 带来的干扰，由图4可见，检测波长为242nln时，辅料几乎 不干扰主药的测定。另一方面通过线性关系及最低检测限 的考察，确定选择242nln作为盐酸噻吩诺啡片的有关物质 检查的吸收波长。 在实验中我们还探讨了不同pH(pH为2．5，3．0，4．5， 5．0，5．5)对主药色谱行为的影响，结果发现随着pH增加， 主药保留时间后移，拖尾现象严重，同时峰面积迅速减少，因 此用磷酸调节流动相pH至3．0。 由有关物质测定结果可见，不同规格的盐酸噻吩诺啡片 的有关物质含量不同，且具有显著性差异，低剂量片在长期 贮存过程中所产生的有关物质较多，而高剂量片所产生的有 关物质的较小，提示盐酸噻吩诺啡片不同剂量药物的有关物 质及有效期的制定应该有所不同。 依据化学药物杂质研究的技术指导原则旧】，对于创新药 物，杂质限度的最终确定需根据临床研究结果进行综合权 衡，故在申报创新药物临床研究时，可对杂质限度做一个初 步的规定。本品在处方筛选时已考察辅料与药物的相互作 用，本制剂所用辅料对主药无影响，不影响主药的稳定性。 本品的杂质主要由原料药引入，盐酸噻吩诺啡片的实测结果 显示二种规格片剂(O．2，0．5mg／片)的杂质总量均小于 2．o％，由于药品研发过程是一个不断完善的过程，我们继续 在临床研究期间完善相关研究，将放大生产的样品与临床研 究样品中的杂质进行详细比较，制定合理的杂质限度。 参考文献 l宫泽辉，苏瑞斌．颜玲娣，等．2000年防复吸研究工作[J】．中国药物依 赖性杂志，2001，10(1)：4_6． 2刘艳丽，颜玲娣，周培岚，等．噻诺啡抑制羟考酮依赖的小鼠和大鼠戒断症 状的实验研究[J]．中国药学杂志，2007，42(23)：1783．1885 3 国家食品药品监督管理局．化学药物杂质研究的技术指导原则[S】．2005 年，17-28 4中国药典[S]．2005年版．二部．附录29 5 ICHHarmonizedTripartiteGuideline：ImpuritiesInNewDnIgProdu出，Q3B (R)，5Feb，2003，l-22 6阎平，谢剑炜．高效液相色谱法测定盐酸噻吩诺啡有关物质的方法研究 [J]．实验室，2006，25(12)：8-10 (2009-06-30收稿2009-08-07修回) HPLC法测定阿奇霉素及阿奇霉素胶囊的含量 刘珂 张亚杰 (辽宁省食品药品检验所沈阳110023) 摘要目的：建立HPLC法测定阿奇霉素及阿奇霉素胶囊的含量。方法：色谱柱为资生堂C。MGII柱(250toni×4．6mm， 5岬)，乙腈-磷酸盐缓冲液(取磷酸氢二钾8．7g，加水溶解稀释成1000ml，用磷酸调pH至8．2)(60：40)为流动相，流速为1．0 ml·min～，检测波长210lull。结果：阿奇霉素在17．5～875．0I．t,g·ml-1的范围内，线性关系良好(r=0．9999)。平均回收率为 99．7％，碰’D=O．47％(乃=9)。结论：本法灵敏、准确、简便。 关键词 阿奇霉素；阿奇霉素胶囊；高效液相色谱；含量测定 中图分类号：11927．2文献标识码：A 文章编号：1008-049X(2010)01-0081-03 DeterminationofAzithromycinandAzithromycinCapsulesbyHPLC LiuKe，ZhangYajie(LiaoningProvincialInstituteforfoodandDrugControl，Shenyang110023，China) ABSTRACTObjective：Toestablish811HPLCmethodfordeterminationofasithromyeininazithmmyeinandazithmmycincapsules． Method：AnHPI_EsystemWaSequippedwithaCAPCELLPAKC18MGⅡcolumn(250nun×4．6nlm，5tLm)，usingaeetonitrile— ph08phatebuffer(todissolvedipotassiumhydrogenphosphate8．7gdilutingto1000mlwithwater，andadjustpHto8．2withph08一 phofieacid)(60：40)asmobilephase．‰flowrateWaS1．OInl·rain～．ThedetectivewavelengthWaSat210uln．Result：nelinear rangeofazithromyeinWas17．5-875．0峭·ml“(r=0．9999)，theaveragerecoveryWaS99．7％(，l=9)；Conclusion：眦smethodis sensitive，accurateandsimple． KEYWORDSAzithromyein；Azithromycincapsules；HPIE；Determination 阿奇霉素是一种多元含氮大环内酯类抗生素，其抗菌谱 广，临床疗效显著。对阿奇霉素及制剂的质量分析，《日本抗 生素基准解说》和《中国药典)2005年版二部均采用抗生素 微生物检定法测定其含量，此法操作较为复杂，试验周期长， 影响因素多¨1。国内文献也有关于HPLC法测定阿奇霉素 含量的相关报道m引。本文在参考《美国药典)30版增补本 作者简介：刘珂，女，副主任药师，从事抗生素检验工作。 Tel：(024)25434014，13386821425E．mail：liukellll@sina．锄 艿矿 万方数据 w。ww·zgys·org 研究报告 第1册阿奇霉素有关物质的测定方法的基础上制定了本 法¨J，结果较满意。 1仪器和试药 Agi]entI100／1200Series高效液相色谱仪，包括二元高压 泵，自动进样器，紫外检测器，柱温箱及工作站。阿奇霉素标 准品(中国药品生物制品检定所，批号：130352-200706，931懈 ·舶g“)；阿奇霉素(批号：080301，21研01001，080316-1，浙江永 宁药业股份有限公司，黄石世星药业有限公司，浙江国邦药业 有限公司)；阿奇霉素胶囊(规格：0．25g，批号：070401， 061111，08010601，河南京豫药业公司，海南普利制药有限公 司，武汉五景药业有限公司)；乙腈为色谱纯；磷酸氢二钾为分 析纯；水为重蒸水。 2方法与结果 2．1色谱条件 色谱柱：资生堂clsMG柱(250nli'll×4．6nlln，5岬)； 流动相：乙腈．磷酸盐缓冲液(取磷酸氢二钾8．7g，加水溶解 稀释成1000ml，用磷酸调节pH至8．2)(60：40)；稀释液：磷 酸盐缓冲液(pI-I7．0)一甲醇(15：1)；流速：为1．0Inl·min～； 检测波长：210rim；进样量：20山。 2．2品溶液的制备 精密称取阿奇霉素标准品适量，并用流动相溶解后稀释 成每1ml中约含阿奇霉素100峭的溶液。 2．3供试品溶液的帝3备 精密称取供试品适量，并用流动相溶解后稀释成每1ral 中约含阿奇霉索100lag的溶液。 2．4线性关系考察 精密称取阿奇霉素标准品23．50mg，置25Inl量瓶中，并 用流动相溶解后稀释至刻度，摇匀，分别精密量取lO“分别 置25，50，100，200，500ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇 匀。以对照品浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，得线性回归 方程为：Y=28．556X+60-931r=0．9999(n=9)，表明阿奇霉 素在17．5—875．0lag·ml。1范围内，线性关系良好。 2．5精密度试验 精密量取对照品溶液，连续进样5次，阿奇霉素峰面积 的RSD=0．99％，表明该方法精密度良好。 2．6溶液的稳定性 将对照品溶液及供试品溶液室温放置，每隔1h测定1 次，结果表明对照品溶液及供试品溶液在5h内峰面积无明 显变化，RSD=0．99％。 2．7重复性试验 精密称取供试品6份，按含量测定方法稀释，测定。阿 奇霉素胶囊重复性试验的平均含量为99．1％，碰渺= 0．95％。 2．8最低定量限 按上述条件测得阿奇霉素的最低定量限为55llg。 2．9回收率试验 阿奇霉素胶囊的三个生产厂家处方成分基本一致，处方 比例略有差异，将不同厂家的空白辅料按处方比例混好，备 用。按80％．100％，120％三个不同浓度分别精密称取阿奇 霉素对照品9份，按处方比各加入上述备好的空白辅料，混 匀，照含量测定方法测定，结果见表1。 J汐 表1回收率试验结果(n=9) 2．10样品含量测定 按照上述HPLC方法和条件，测定供试品的含量，色谱 图见图1(空白辅料无干扰)，HPLC法与抗生素微生物法测 定阿奇霉素及阿奇霉素胶囊的含量结果见表2，表3。 lO 20 30 0 10 20 30岫 A B 0 10 20 30thatin C A．标准品B．供试品C．空白辅料1．阿奇霉素 图1 HPLc色谱图 表2 3批原料测定含量结果(n=3) 药名 生产单位 批号 H鬻产抗瓣物⋯7 (P,g·mg“) 阿奇霉素浙江永宁药业股份有限公司08030197．8 黄石世星药业有限公司 20070100196．5 浙rJ：国邦药业有限公司080316-197．4 979 971 978 阿奇霉素胶囊河南京豫药qp公司 海南普利制药有限公司 武汉五景约业有限公司 96．4 98．1 99．2 99．3 99．7 100．1 3讨论 阿奇霉素无特征性紫外吸收，故检测波长定为末端吸收 210nm。《美国药典》采用HPLE法测定阿奇霉素的有关物 质，采用的是聚合物极性柱，供试品的浓度为每1ml中约含 7mg阿奇霉素，本文参考上述方法用于测定阿奇霉素的含 量，采用的是资生堂C馋色谱柱，在试验过程中发现供试品 浓度过高，阿奇霉素的峰展宽，供试品浓度过低，阿奇霉素的 峰的响应值太小，均影响结果的准确性，经多次试验，最终浓 度定为每1IIll中约含100p,g阿奇霉素。本文分析方法的特 点是色谱峰的对称性较好，对称因子均在0．7—1．3之间，柱 效高，主色谱峰的理论板数均在10000以上，保留时间合 适，重复性好，从而有效的控制阿奇霉素及制剂的质量。从 表2、表3可以看出用微生物检定法与HPLC法测定供试品 的含量结果基本一致，但HPLE方法专一性较好，操作简单， 结果准确。 参考文献 1中国药典【s]．2005年版．二部．291-292 坝Ⅲ咖啡蛳舢 万方数据 中国药师 2010年第13卷第1期ChinaPhanIlacist2010，V01．13No．1 高效液相荧光法测定乙胺吡嗪利福异烟片中盐酸乙胺丁醇的含量 颜鸣 隋因 郭涛 赵庆春 (沈阳军区总医院沈阳110016) 摘要 目的：建立高效液相色谱荧光法测定乙胺吡嗪利福异烟片中盐酸乙胺丁醇(EMB)的含量。方法：用苯乙基异氰酸 酯(PEIC)作为衍生剂，选择不同溶媒介质，考察反应温度、摩尔比对衍生物的影响，确定反应条件。色谱条件：kromasilC。。 (200nlmx4．6mm，5炉)柱，流动相：甲醇-水(70：30)，荧光检测波长：kex210nln，kem285砌。结果：以碱性乙腈作衍生化 反应条件反应溶媒，在室温下振荡5rain，衍生剂与盐酸乙胺丁醇摩尔比6：l。盐酸乙胺丁醇线性范围加一120峭·ml。1(r= 0．9967)，平均回收率为99．7％，RSD为0．96％。结论：该方法专属性强，衍生化反应迅速，操作简单，容易控制，适用于复方 制剂中盐酸乙胺丁醇的含量测定。 关键词 盐酸乙胺丁醇；高效液相色谱；衍生化 中图分类号：R927．2文献标识码：A 文章编号：1008-049X(2010)01-0083-03 DeterminationofEthambutolHydrochiorideinYianbiqinglifuyiyanTabletsbyHPLCwithFluorescence Detection YahMing，SuiYin，GuoTao，ZhaoQingchun(GeneralHospitalofShenyungMilitaryRegion，Shenyangl10016。China) ABSTRACTObji蚓tive：ToestablishallHPLCmethodwithnuorescencedetectionforthedeterminationofethambutol(EMB)hydro- chlorideintheYianbiqinglifuyiyantablets．Method：Phenylethylisocyanate(PEIC)Wa$usedtobethederivativereagent．r11leeffects Onthederivativewereinvestigatedfromdifferentreaction，temperature，timeandmolarratio．ByusingH眦method．thederivativeof ethambutolwereseparatedonthecolumnofkromasilC18(200哪×4．6咖，5pan)．’rhemobilephaseW88consistedofmethanol—wa． ter(70：30)．Theflowratewas1．OInl·min～byfluoratkex210哪andhem285nnl．Result：Alkalizeacetonitrilesolutionwagused 拍thereactionmedi啪．11lemolarratioofPEICtoetIIambutolwas6：1．Thereactionsolutionwasneededtobeshakenfor5minutes underlOOmtemperature．Thederivativeofethambutolhydroehloride蛐linearovertherangeof10—120tang·ral。(r=0．9967)．11le averagerecoveryWaS99．7％。with兄sDO．96％．Conclusion：Thismethodisnotinterferedbyotherantituberculardrugs．Thederiva- tivereactionofethambutolisrapid，controHedeasilyandsuitabletodetermineethambutol(EMB)hydrochlorideinthecompoundprepa- ration． KEYWOlIDSEthambutolhydrochloride；HPLC；Derivafi∞： 结核在全世界发病率仍然很高，杀灭结核分枝杆菌。克 服其产生的耐药性是目前治疗结核药的一大难。面临这 ～问题，临床常用盐酸乙胺丁醇、利福平、异烟肼和吡嗪酰胺 等多种药物的不同联合用药方式，以提高疗效，延缓耐药性 发生。目前，抗结核药固定剂量的复方制剂研究已成为多药 耐药性结核治疗的临床需要⋯，其复方制剂的开发和应用正 在被接受和欢迎。为此，本文进行了柱前衍生化用高效液相 荧光法测定乙胺吡嗪利福异烟片中盐酸乙胺丁醇含量的 研究。 1仪器与试药 高效液相色谱仪(510型泵，486型紫外检测器)，美国 waters公司；N2000型色谱工作站，浙江大学；美国Finnigan 公司LCQ型液相色谱一质谱联用仪；电雾离子化源；LCQ数 据处理系统；苯乙基异氰酸酯(衍生剂)，sigma公司；甲醇、 乙腈为色谱纯；盐酸乙胺丁醇对照品，中国药品生物制品检 定所，批号10165-0103；乙胺吡嗪利福异烟片，批号060511， 沈阳红旗制药有限责任公司。 2方法与结果 2．1色谱条件 色谱柱：kromasilC13(200姗x4．6姗，5oan)；流动相： 甲醇-水(70：30)；荧光检测波长：kex210nnl。kem285tim；柱 温：室温；流速：1．0ml·min～。 2．2衍生条件的确定 2．2．1 衍生化反应介质 选用水、甲醇、碱性乙腈溶液作 为衍生溶媒反应介质口J，观察衍生物的生成量。准确量取盐 酸乙胺丁醇对照品用水、甲醇、碱性乙腈，分别配成100／．tg· lnl。盐酸乙胺丁醇溶液。取各溶液0．4ml，加2mg·Inl。1苯乙 基异氰酸酯乙腈溶液(衍生剂溶液)0．Iml，使其过量，在室 作者简介：颜鸣，女。副主任药师，主要从事药物制剂和临床药学工作。Tel：(024)28851435E—mail：ymyx@sina．01)m 2陈悦，俞忻璐，姜晓丽．反相HPLC法测定阿奇霉紊软胶囊的含量【J]．中圈 抗生素杂志．2007，32(7)：414-418 3阚家义，许威．HPLC法测定阿奇霉素散剂的含量[J]．中国抗生素杂志， 2006。31(1I)：672-674 4容永欢．高效液相色谱法测定阿奇霉素在其分散片中的含量[J]．中国药 学．2005。3(2)：92-94 5纪标，王东凯，薛梅妍，等．}硼Lc法测定注射用门冬氨酸阿奇霉素的含量 和有关物质[J]．中国抗生素杂志，2005，30(6)：347-349 6王明娟，许明哲，胡昌勤，等．HPLC法分析阿奇霉素及各类注射剂中有关 物质的含量[J】．中回抗生素杂志，2008，33(12)：740-745 7 USP[S】．30theds．2007．3753-3754 (20094)5-06收稿2009-09—17修回) 黜 万方数据 HPLC法测定阿奇霉素及阿奇霉素胶囊的含量 作者： 刘珂， 张亚杰， Liu Ke， Zhang Yajie 作者单位： 辽宁省食品药品检验所,沈阳,110023 刊名： 中国药师 英文刊名： CHINA PHARMACIST 年，卷(期)： 2010,13(1) 参考文献(7条) 1.纪标;王东凯;薛梅妍 HPLC法测定注射用门冬氨酸阿奇霉素的含量和有关物质[期刊论文]-中国抗生素杂志 2005(06) 2.容永欢 高效液相色谱法测定阿奇霉素在其分散片中的含量[期刊论文]-中国药学 2005(02) 3.阚家义;许威 HPLC法测定阿奇霉素散剂的含量[期刊论文]-中国抗生素杂志 2006(11) 4.USP 2007 5.王明娟;许明哲;胡昌勤 HPLC法分析阿奇霉素及各类注射剂中有美物质的含量[期刊论文]-中国抗生素杂志 2008(12) 6.陈悦;俞忻璐;姜晓丽 反相HPLC法测定阿奇霉素软胶囊的含量[期刊论文]-中国抗生素杂志 2007(07) 7.中国药典.2005年版.二部 2005 本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_zgys201001035.aspx