ELISA检测乙肝两对半的影响因素

临床辅助检查 中国社区医师 　2007年第 18期 　 (综合版 ) 　 (第 9卷总第 171期 ) 　 81　　　 EL ISA检测乙肝两对半的影响因素 金英爱 1 　王春茹 1 　赵淑华 2 　于永远 2 134000吉林省通化市中心医院 1 　　　辽宁省兴城市贰肆陆医院 2 EL ISA法广泛用于乙肝两对半检测。 但 EL ISA测定中影响因素较多 ,有时可 见到一些假阳性或假阴性 ,本文就 EL ISA 测定乙肝两对半的影响因素做如下讨论。 标本采集与处理的影响 标本采集与处理不当将对实验结果 产生影响 ,因此我们应注意以下几个问 题 : ①标本严溶血及混有红细胞的血清易 沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净 ,残留 在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样的 活性 ,催化底物显色造成假阳性 ,严重溶 血标本禁用。②采血试管洗涤不彻底、反 复使用易交叉污染 ;塑料试管能吸附抗原 物质 ,样本久置在塑料管内会使样本内抗 原含量下降造成假阴性。最好使用一次 性玻璃试管或真空管采血管 ;并使用非抗 凝标本。③标本凝固不全 ,正常血液采集 后 1 /2～2小时开始凝固 , 18～24小时完 全血块完全收缩。在工作中 ,有时为了争 取时间快速检测 ,常在血液还未开始凝固 时即强行离心分离血清 ,使血清中仍残留 部分纤维蛋白原 ,在 EL ISA 测定过程中 可以形成肉眼可见的纤维蛋白块 ,易造成 假阳性结果 ;因此血液标本采集后必须使 其充分凝固后再分离血清 ,或标本采集时 用带分离胶的采血管或于采血管中加入 适当的促凝剂。 试剂的影响 ①乙肝两对半试剂厂家较多 ;不同厂 家出产的试剂灵敏度与特异性存在一定 的差别 ,资料显示 ,不同厂家试剂的特异 性和敏感性分别为 89. 4% ～ 99. 3% , 78% ～89%存在较大差异。有的厂家酶 标板孔间 A值差大于 15% ;标记酶的活 性及显色液的稳定比较差。使用质劣的 试剂必然导致结果的假阳性或假阴性。 因此。选择高质量的试剂是保证结果准 确的关键之一。②不同学的检测试 剂 ,会使两对半结果出现一些不同。例 如 :在实际工作中常用 EL ISA检测 HB sAg 结果为阴性 ,而电化学发光检测为阳性。 除方法学的灵敏度外 ;还存在使用单抗或 多克隆抗体试剂的差别。单抗对变异抗 原或亚型乙肝标志物检测存在差异 ,建议 试剂厂家对剂的制备应该考虑亚型及型 浓度的问题。 操作技术的影响 ①加样吸嘴的洁净与否和吸量的准 确性 ,直接影响检测结果。由于吸嘴构造 特殊 ,导致清洗困难 ,因此应使用一次性 吸嘴。加样器也要经常清洗 ,定期校准。 ②温浴影响 , 96孔酶标板结构特别 ,易产 生边缘效应 ,抗原抗体结合及酶促反应对 温度有严格要求 ,酶标板周围与内部孔升 降温速率不同 ,造成周边与内部孔结果差 异 ;干浴与水浴存在明显的差异 ,尽可能 使用水浴 ,并要求固相板放入水中 ,减少 受热不均 ,贴密封膜 ,防止污物浸入。③ 冼涤是 EL ISA 操作的重要环节 ,手冼条 件一致性较差 ,对结果影响较大 ,半自动 与全自动冼板机使用不当也会影响结果 , 血清中残留的的纤维蛋白丝或洗涤液析 出的结晶易使洗板机针小孔全阻塞或半 阻塞状态 ,造成未结合标记酶洗脱不彻 底 ,导致“花板 ”造成假阳性或假阴性 ;所 以操作洗板机过程中要不时观察洗板机 针孔内洗液的通畅状况 ,及时纠正 ,洗板 机不用时应用去离子水清冼几遍。④肉 眼判断结果时 ,显色浅不易观察 ,影响结 果的准确性 ,必须使用酶标仪检测 ,以保 结果一致性。 干扰物质的影响 有人认为大约 40%的人血清标本中 含有非特异性干扰物质 ,可以不同程度影 响检测结果 ;常见的干扰物质有 :类风湿 因子、补体、嗜异性抗体、交叉反应物质和 其他物质等。如 RF因子可与标记二抗 的 FC段法结合造成假阳性 ,补体从 C1q 活化 ,使一抗和酶标二抗的抗体分子发生 变构 , Fc的 C1q分子结合点暴露出来 ,则 补体 C1q可将二者连接起来造成假阳 性 ,采用 56℃30分钟灭活补体可降低假 阳性率。 药物的影响 ①高效价的乙型肝炎免疫球蛋白会 与 HB sAg形成复合物 ,影响 HB sAg的检 出 ,所以一些 HB sAg阳性患者注射乙肝 免疫球蛋白后 , HB sAg检测会呈阴性反 应 ,导致乙肝两对半少见模式的出现 ,如 我们常遇到乙肝大三阳的孕妇 ,为阻断乙 肝母婴垂直传播时 ,在孕第 8、9、10月常 规注射 200mg乙肝免疫球蛋白 ,不仅影 响孕妇 HB sAg的检出 ;而且其所生产的 生新儿也常出现 HB sAg阴性 , HBeAg阳 性和 HBcAb阳性等少见模式 ,可能是乙 肝免疫球蛋白属 IgG抗体能通过胎盘进 入胎儿体内与胎儿血液中的 HB sAg结合 形成复合物 ;则新生儿 HB sAg检测呈阴 性 ;用 0. 5M的盐酸处理标本 1小时可提 高出率。②为预防乙肝 ,部分 HB sAg阴 性人群在接种乙肝疫苗后的 1～2周内 , 血清中可检出 HB sAg成份 ,形成一过性 HB sAg阳性 ,这可能是乙肝疫苗主要成分 是 HB sAg. ,电化学发光法能够把它检出 , 建议接种乙肝疫苗后 1 个月内不应作 HB sAg检测。 乙肝两对半检测的影响因素很多 ,必 须排除各种影响因素的干扰才能为临床 提供正确可靠的检测结果。 减不起肥 这天 ,胖老公一进门 ,就问了我一个具体问题 : “老婆 ,你猜 ,平常咱们花钱能买得到的肉 ,哪样最 贵 ?”我犹豫了好一阵也不明白就里 :“珍稀动物买不 到 ,那就只有乌龟王八了。”老公语出惊人 :“那算什 么呀 ,今儿我算领教了 ,是人的肉 !” 我差点跳起来 :“你可别吓我 ,咱可不是孙二娘开 店 !”“听我把话说完嘛。”胖老公一边说 ,一边拍拍自 己的大肚皮 ,“今儿我去减肥中心 ,他们对我说 ,保证 将我的重量减到令自己满意的程度 ,但每减肥 1斤 , 就得交他们 150元。咱这身子要减到标准体重 ,要花 6000多块。我琢磨着 ,这世界上还没见过这么贵的 肉呢。”我听了 ,连忙摇头 ,“别说了 ,越说我越恶心 ”! “怎么不能说 ,你不是天天唠叨要我减肥吗 ? 而 且呀 ,就是这么贵的肉 ,你也不得不买 !”胖老公依然 振振有词 ,“男人要命才减肥 ,花高价买自己的肉 ,买 了还得扔进下水道 ,你说 ,这不是最大资源浪费吗 ?” (蒋平 　李玉花 )