乙肝_两对半_检测结果意义分析

·临床检验 · 乙肝 “两对半 ”检测结果意义分析 栗军香 (河北工程学院附属医院 , 邯郸市 　056002) 【中图法分类号 】　R446162　　　　　【文献标识码 】　B　　　　　【文章编号 】　1008 - 3073 (2005) 04 - 0317 - 02 【关键词 】　乙型肝炎血清标志物 ; 检测结果 ; 意义 　　目前国内医院最常用的乙型肝炎病毒 ( HBV ) 感染检 测的血清标志物是乙肝 “两对半 ”。乙肝 “两对半 ”, 即乙 肝表面抗原 (HB sAg)、乙肝表面抗体 (抗 HB s)、乙肝 e抗 原 (HBeAg)、乙肝 e抗体 (抗 HBe) 和乙肝核心抗体 (抗 HBc) 等。正确理解和解释这些检测项目的临床意义 , 对减 少医患纠纷 , 帮助临床诊断有重要价值。现就这些检测项目 意义阐述如下。 1　HB sAg HB sAg于 1963年由 B lumberg在澳大利亚土著人血中发 现 , 称为澳大利亚抗原 , 1974年正式定名为乙型肝炎表面 抗原 (简称 HB sAg) , 存在于 HBV的外壳部分。血清中检 出 HB sAg是乙肝的早期诊断指标之一 , 出现于患者血清转 氨酶 (ALT) 升高前 2～8周 , 到恢复期 HB sAg滴度逐渐降 低乃至消失 , 抗 HB s出现。但有部分患者 HB sAg在血清中 可持续存在 , 这可能是编码 HB sAg的 HBV的 s区段和肝细 胞 DNA整合。在这种情况下 , 即使 HBV已从人体内消除 , 肝细胞仍能不断地复制 HB sAg。 HBV感染后 , 大部分人没有临床表现 , 但在血中可检 出 HB sAg, 这类人称为携带者。大部分人将持续携带 HB sAg 数年乃至终身而无临床症状 ; 小部分人在平衡被打破后 , 可 发展成急性或慢性乙肝 , 甚至肝硬化、肝癌。 HB sAg不仅存在于血液中 , 而且还存在于许多体液和分 泌物中 , 如唾液、尿液、乳汁、精液等。 血清 HB sAg仅为 HBV感染的标志。由于其在血液中多 为不含病毒颗粒的空壳 , 故而不反映病毒有无复制、复制程 度、传染性强弱及预后。 2　抗 HB s 急性乙肝患者处于恢复期后 , 随着 HB sAg的逐步消失 , 血清中出现抗 HB s。抗 HB s是一种中和抗体 , 能在体内存在 相当长的时间。以 HB sAg作为疫苗免疫机体产生的抗 HB s, 对 HBV的感染具有保护性免疫作用。10m IU /m l抗 HB s为对 HBV具有免疫力的临界水平。低于此值 , 说明免疫失败。 乙肝疫苗接种者 , 体内血循环中除了抗 HB s外 , 不应出现 其他乙肝病毒感染血清免疫学标志物 , 如抗 HBe、抗 HBc 等。一旦出现除抗 HB s以外的标志物 , 则应视为既往 HBV 感染。 一般情况下 , 血清中抗 HB s和 HB sAg不同时出现 , 若 同时检出 , 可能是抗 HB s产生的早期 , 或属于不同亚型的 HBV感染 , 或由 HBV的 S基因变异所致。 3　HBeAg HBeAg是 HBcAg的可溶性成分 , 两者约有 75%共同的 氨基酸序列 , 但二级结构不同 , 各有特异的抗原决定簇 , 因 而在细胞水平其体液免疫应答是不同的。其在血清中的出现 时间稍后于 HB sAg, 一般血清 HBeAg阳性者 , HB sAg亦为 阳性。有研究表明 , 当乙肝病毒的前核心区发生点突变时 , 可使得 HBeAg无法表达 , 表现为血清 HBeAg或抗 HBe测定 持续为阴性 , 但血清 HB sAg或 HBV DNA可表现为阳性。 HBeAg与病毒 Dane颗粒、HBV DNA具有伴随关系 , 是 HBV复制活跃的血清学指标 , 血清 HBeAg阳性说明传染性 强。急性乙肝患者血清 HBeAg持续阳性 3个月以上 , 则有 疾病慢性化倾向。 4　抗 HBe 当血清 HBeAg转阴后 , 可出现抗 HBe, 抗 HBe阳性说 明病毒复制减少 , 传染性弱 , 但并非没有传染性。抗 HBe 不是保护性抗体 , 这一点与抗 HB s不同。 5　总抗 HBc和抗 HBc IgM 总抗 HBc包括抗 HBc IgM、 IgA、 IgG、和 IgE等。抗 HBc IgM可说是机体感染 HBV后最早在血液中出现的特异 抗体 , 急性乙肝时呈高滴度 , 是判断急性乙肝的重要指标。 随着急性乙肝的恢复 , 抗 HBc IgM滴度 (以及抗 HBc IgA ) 降低乃至消失。如持续高滴度 , 则有可能发展成慢性乙肝。 研究发现 , 慢性活动性乙肝患者其抗 HBc IgM滴度亦较高 , 说明 HBV复制活跃 , 是传染性强的指标之一。抗 HBc不是 保护性抗体。抗 HBc在血中呈低滴度且与抗 HB s同时存在 , 是既往感染的标志。 6　乙肝 “两对半 ”检测应用的误区 在临床上 , 将 “两对半 ”检测结果不同的阴阳性模式 与乙肝患者的临床症状联系起来 , 来判断乙肝患者临床治疗 的效果是极为常见的。有的甚至进行乙肝 “两对半 ”的定 量测定。这中间存在对 “两对半 ”结果应用的较大误区 , 是对这些病原体感染者体内相应抗原抗体的发生发展以及对 疾病状态和抗病毒治疗之间的关系不了解所致。目前针对感 染性疾病抗病原体的药物治疗 , 主要有两类 : 一是杀灭 , 如 梅毒和结核病的抗菌素应用治疗 ; 二是抑制 , 如乙肝和丙肝 的抗病毒治疗。当治疗有效时 , 前者表现为病原体的消失 , 后者表现为病原体数量的动态性降低。因此 , 与治疗效果密 切相关的是病原体的存在与否或存在数量的多少。而抗体 , 因其是机体对病原体特定抗原成分的特异免疫应答的产物 , ·713·邯郸医学高等专科学校学报 2005年第 18卷第 4期 即使是病原体因抗菌或抑病毒药物的应用已消失或大大减 少 , 也可能在体内存在相当长的一段时间或持续存在 , 其与 病原体的存在与否或存在数量无正相关关系。病原体抗原含 量高低与病原体之间有否正相关则要具体分析。如 HB sAg 和 HBeAg就不行 , 因为 HB sAg在乙肝患者血循环中以三种 形式存在 , 即圆形颗粒、管形颗粒和 Dane颗粒。其中只有 Dane颗粒中存在乙肝病毒 , 但其仅占所有 HB sAg的 012% , 其他绝大部分为空的圆形颗粒和管形颗粒 , 所以 HB sAg和 乙肝病毒之间自然就缺乏正相关。而 HBeAg通常与乙肝病 毒存在之间有很好的正相关 , 也是乙肝患者传染性强弱的一 个主要血清学指标。按理应该可以作为乙肝患者抗病毒疗效 的观察指标 , 实际上也有很多人在这样做 , 但由于乙肝病毒 基因组的前 C区常易出现点突变 , 使得 HBeAg表达缺失 , 此时血清 HBeAg测定为阴性 , 但病原体仍大量存在。因此 , HBeAg也不能作为乙肝患者抗病毒疗效观察的指标。 在乙肝 “两对半 ”中 , 真正有定量测定价值的只有抗 HB s。但这种测定也不是用于临床乙肝患者疗效观察 , 而是 用于人群乙肝疫苗注射效果的判断 ; 也就是说 , 当某人注射 疫苗后 , 如外周血中抗 HB s定量超过 10m IU /m l, 则说明受 免疫者具有对乙肝病毒的免疫力 , 免疫力及持续时间与抗 HB s含量高低应成正比。 总之 , “两对半 ”结果的实质其实只是机体感染 HBV 后免疫应答结果的反映 , 与乙型肝炎的发生和发展过程之间 并无必然的联系。因为绝大部分 HBV感染者并不出现肝炎 症状 , 而只是表现为携带者 , 但其同样会有免疫应答的产 生 , 而得到不同的 “两对半 ”结果模式。因此 , 从根本意 义上来讲 , “两对半 ”结果的阳性 , 反映的只是感染了 HBV, 与临床病情轻重之间毫无因果关系。 (收稿 : 2005 - 05 - 13) 激光共聚焦急性分离细胞样品的制备 张向阳 , 赵 　磊 (河北工程学院临床医学院 , 河北省邯郸市 　056029) 【中图法分类号 】　R44611　　　　　【文献标识码 】　B　　　　　【文章编号 】　1008 - 3073 (2005) 04 - 0318 - 02 【关键词 】　激光共聚焦 ; 细胞样品 ; 制备 　　激光扫描共聚焦显微镜是 20世纪 80年代发展起来的一 项具有划时代意义的高科技新产品 , 使现代显微镜有能力研 究和分析细胞的变化过程和结构。特别是对活细胞离子含量 变化的定量检测 , 完整细胞的三维立体结构图像重建等方 面 , 是传统的光学和电子显微镜所望尘莫及的 [ 1 ]。活细胞 样品的好与坏直接关系到观察结果 , 因此活细胞样品的制备 尤为重要。培养细胞样品的制备相对较为容易 , 急性分离细 胞常因操作不当而导致细胞状态不良 , 得不到较好的观察结 果。本实验室在参照文献方法的基础上 , 结合实际工作经 验 , 对共聚焦急性分离细胞样品的制备方法进行讨论。 1　单细胞制备 111　机械法 : 将新鲜组织块放入小容器内 , 用 hanks反复 冲洗几次 , 在 hanks液中用剪刀剪碎或研磨直至液体浑浊。 用 300目滤网将液体过滤到离心管内 , 除去小组织块 , 离心 管内补充 3～5m l Hanks。800 rpm离心 10分钟 , 即可除去上 清中的细胞碎片 , 1000 rpm离心 10分钟 , 2次 , 得到所需单 细胞。 112　胰酶法 : 将新鲜组织用剪刀剪成 1mm大小的块放入试 管内 , 加入 2m l胰酶 , 胰酶浓度 0125% , 置于 37℃恒温水 浴 , 每 5分钟振荡 1次 , 直至液体浑浊 , 因组织不同消化的 时间不同 , 一般温育 30～40分钟。加入含血清的培养液终 止消化 , 将液体过滤到离心管内 , 800 rpm 离心 10分钟 3 次 , 得所需细胞。 113　胃酶法 [ 2 ] : 将新鲜组织用剪刀剪成 1mm大小的块放入 试管内 , 加入 2m l 015%胃酶 ( pH115 ～210 ) , 消化液置 37℃恒温水浴中消化。每 5分钟振荡 1次 , 直至液体浑浊 , 加入大量 019%氯化钠溶液终止消化。300目尼龙网过滤 , 除去未消化的组织块 , 800 rpm离心 10分钟 3次 , 即可除去 上清中的细胞碎片 , 得到所需单细胞。 2　载片处理 在载玻片中间打孔 , 直径 10mm, 经酸碱处理 , 清洗烘 干备用。盖玻片用含 1%稀盐酸的乙醇液浸泡过夜 , 清洗后 烘干。将盖玻片用胶粘在载玻片打孔处 , 形成小室 , 50℃烘 干 , 在盖玻片上涂上 10%多聚赖氨酸 , 37℃烘干备用。 3　染色与粘附 将制得的单细胞用细胞液悬浮 , 制成细胞悬液 , 然后分 两种方式染色与粘附。 311　先染色后粘附 : 在细胞悬液中按比例加入荧光染料 , 37℃孵育 30～60分钟 , 每 10分钟振荡 1次。1000 rpm10分 钟离心除去染料 , 用 PBS洗涤 , 制成细胞悬液。将悬液滴 于自制的盖玻片小室内 , 避光静止 10分钟上机观察。 312　边染色边粘附 : 直接在细胞悬液中加入染料 , 混匀 , 滴于自制的盖玻片小室内 , 37℃避光孵育 30分钟。用枪头 移去含染料的细胞液 , 加入少量细胞液 , 轻摇 , 然后移去 , 重复 3次 , 加入 PBS制成样本 , 上机观察。 4　讨论 机械法常常造成严重的细胞损伤 , 较低的细胞产量 , 并 且需用适当的方法减少碎片 , 该法适用软组织及富于细胞的 肿瘤 (淋巴肉瘤、视神经母细胞瘤、脑瘤、未分化瘤、髓 样瘤等 )。酶学法对组织的分散解聚较理想 , 但会造成对所 ·813· Journal of Handan Medical College, August 2005, Vol 18, No. 4