家禽基因工程白细胞介素一2对疫苗的

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立 20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 家禽基因工程白细胞介素一2对疫苗的 免疫增效试验 崔丽’，江庆国’，肖显悦’，李状元’ (1大连三仪生物工程研究所;2大连三仪动物药品有限公司 白细胞介素是由免疫活性细胞产生的一类细胞因子，这类细胞因子在参与机体免疫功能的调节上发 挥着很重要的作用，一部分白细胞介素已通过基因克隆达生产，其中基因工程白细胞介素-2(以下简 称白细胞介素-2)是由大连三仪生物工程研究所研制的一种生物药品，为进一步观察和验证白细胞介素- 2在临床上对家禽免疫所发挥的作用，特委托辽宁省动物保健中心做以下试验。试验分别在非免疫鸡群进 行新城疫和禽流感免疫时加上白细胞介素-2并设置试验对照，以观察差异。在鸡群进行相应免疫后一周 开始监测相应抗体，以间隔一周的时间连续监测5次，试验组禽流感免疫鸡群在监测抗体5次后淘汰， 新城疫免疫鸡群在进行新城疫免疫后六周进行鸡新城疫攻毒试验。观察使用白细胞介素-2后，对强毒攻 击的保护力提高程度。侧试结果表明，免疫鸡群用疫苗的同时使用白细胞-2能够提前产生免疫并提高家 禽免疫后杭体水平、强毒攻击时的保护率较高。现将试验结果报告如下。 一、材料与方法 (一)材料:白细胞介素一2，由大连三仪动物药品有限公司提供，批号:200203309，用法是与相应 冻千疫苗混合后点眼、摘鼻。抗原，鸡新城疫抗原由中国兽药监察所提供，批号:20011107。禽流感 抗原由哈尔滨兽医研究所提供，H9, 20020308; H5, 20020418由辽宁省动物检疫站购买。疫苗， 新城疫冻干苗由辽宁益康生物制品厂提供，批号为20020317，新城疫灭活油苗由哈尔滨兽医研究所提 供，批号 20020201。禽流感灭活油苗由哈尔滨兽医研究所提供，H9型批号 20020416. H5型批号 20020313由辽宁省动物检疫站购买。鸡新城疫种毒，由中国兽药监察所提供，编号 AV1611。非免疫 鸡，1日龄由沈阳市畜牧研究所提供。饲料，由沈阳市正成饲料厂提供，不含任何药物添加剂。试验场 地，辽宁省动物保健技术研究中心动物室。试验时间:2002年6月3日一2002年8月10日。 (二)试验方法:1日龄非免疫鸡进入试验场后经过五天的饲养观察，将健康活泼的非免疫鸡群在 6日 龄随机分成8组，1个对照组，7个试验组。其中试验1一3组为新城疫试验组，试验4一7组为禽流感 试验组，第8组为对照，每组20只，试验鸡群置于同一饲养场所按相同的饲养管理方式进行饲养并开展 试验，新城疫和禽流感的疫苗免疫时间均在7日龄进行。 1组:进行新城疫免疫，免疫方式为白细胞介素-2十新城疫冻干苗+灭活油苗，按说明剂量把白细 胞介素-2与新城疫冻千苗混合后点眼摘鼻，同时颈部皮下注射新城疫灭活油苗，0.2m1/羽。 2组:进行新城疫免疫，免疫方式为新城疫冻千苗+灭活油苗，按说明剂量把新城疫冻千苗以点眼滴 鼻的方式进行免疫，同时颈部皮下注射新城疫灭活油苗，0.2m1/羽。 3组:进行新城疫免疫，免疫方式为新城疫灭活油苗。按说明剂量颈部皮下注射0.2m1/羽。 4组:进行禽流感免疫，免疫方式为白细胞介素一2十禽流感灭活油苗。白细胞介素-2按说明剂量 点眼摘鼻，同时颈部皮下注射H5型禽流感灭活油苗0.2m1/羽。 中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立 20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 5组:进行禽流感免疫，免疫方式为禽流感灭活油苗，按说明剂量颈部皮下注射H5型禽流感灭活油 苗0.2ml/羽。 6组:进行禽流感免疫，免疫方式为白纽胞介素-2+禽流感灭活油苗，白细胞介素-2按说明剂量 点眼滴鼻，同时颈部皮下注射H9型禽流感灭活油苗。2ml/羽。 7组:进行禽流感免疫，免疫方式为禽流庙灭活油苗，按说明剂量颈部皮下注射 H9型禽流感灭活油 苗0.2ml/羽。 8组:对照组，不做任何免疫。 试验组与对照组鸡群在进行相应疫苗免疫后的五周内每周一次翅静脉采血并进行HI抗体监侧。 疫苗免疫后五周时间内进行5次抗体监测后，淘汰禽流感试验组鸡群，对新城疫试验组和对照组鸡群进 行新城疫攻毒试验，用AV1611株ND强毒按100EID50的剂量胸部肌肉注射lml,观察7天。 二、试验结果 新城疫抗体平均水平见表1，禽流感抗体平均水平见表2，新城疫攻毒试验见表30 表1 新城疫HI杭体监侧结果 、毓盗 1 2 3 4 5 平均 1 5.14 6.00 6.97 6.00 5.37 5.9 2 5.00 5.33 6.83 5.17 5.00 5.47 3 3.86 4.50 5.33 5.00 4.50 4.64 对照组 0 0 0 0 0 0 表2 禽流感HI抗体监测结果 毓望\1 2 3 4 5 平均 4 5.57 7.50 6.33 5.83 5.67 6.18 5 5.00 6.67 6.00 5.50 5.00 5.63 6 5.63 7.33 7.17 5.67 5.53 6.27 7 6.00 5.83 6.17 5.17 5.00 5.63 8 0 0 0 0 0 0 表3 新城疫攻毒死亡只数统计表 赢rJ} }rM-1 12 24 36 48 72 96 累计 1 0 2 1 1 2 3 1 1 2 1 5 8 精神 不振 食欲减退 出现临 床症状 3 6 8 3 20 中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立 20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 三、与讨论 从表1鸡群新城疫HI抗体监侧显示，各组试验鸡均在免疫7天后产生一定水平的抗体，试验1. 2 组鸡只抗体水平明显高于试验3组，并在免疫21天后抗体水平达到最高，继而杭体以一定幅度逐渐下 降。其中试验 1组鸡只ND抗体水平高于试验2组0.43，差异显著，高于试验3组 1.26，差异极显 著。试验2组鸡只ND抗体水平高于试验3组0.83，差异显著，空白对照组鸡只新城疫抗体水平为0. 从表2鸡群禽流感 HI抗体监测显示，各组试验鸡均在免疫 7天后产生一定水平的抗体，试验 4 组、试验6组鸡只禽流感抗体水平在免疫后14天达到高峰，试验5组、试验7组鸡只禽流感抗体水平 在免疫后21天达到高峰，继而抗体以一定幅度逐渐下降。其中试验4组鸡只禽流感杭体水平高于试验5 组0.53,差异显著，试验6组鸡只禽流感抗体水平高于试验7组0.64，差异显著，空白对照组鸡只禽 流感抗体水平为0. 攻毒试验结果:试验 1组鸡只没有发病和死亡;试验2组死亡发病，死亡率为5%;试验3组鸡只 发病死亡率为25%;非免疫鸡只全部死亡。发病鸡呈典型的新城疫临床症状。 四、分析结论 1、进行新城疫免疫的同时使用白细胞介素-2,能够提高新城疫抗体水平并差异显著。以冻干苗和灭活 油苗进行新城疫免疫的鸡群抗体摘度明显高于仅仅进行新城疫油苗免疫组的抗体水平，这与目前新城疫 的免疫现状是一致的。 2、进行禽流感免疫的同时使用白细胞介素一2,能够提高禽流感杭体水平，并且比对照组提前一周产生 禽流感的抗体高峰。禽流感和新城疫免疫对照组均在21天达到杭体高峰，这一现象与禽流感的免疫缺乏 冻干苗做基础免疫有关，以及白细胞介素一2作为基因工程免疫调节剂能够特异刺激家禽机体产生细胞免 疫、非特异增强家禽机体体液免疫有关。 3、新城疫强毒攻击试验结果表明，用白细胞介素-2与新城疫疫苗同时免疫的试验组的成活率远高于不 使用白细胞介素-2的新城疫疫苗免疫组，尤其高于仅仅做新城疫灭活油苗的免疫鸡只。强毒攻击试验结 果表明高抗体鸡群并不是安全的，抗体只能中和进入血液内野毒，并不能作用于已经进入宿主细胞内的 野毒，这与所报道的新城疫 “高杭体水平虽能抑制鸡群发病，但不能清除病毒”是吻合的。 4、鉴于试验条件限制和种毒来源及安全因素，本试验未进行禽流感强毒攻击试验，禽流感抗体水平的高 低与鸡感染禽流感病毒后保护率的相关性数据有待进一步试验。 参考文献 (略)