第08章_维生素类药物的分析

nullnull第八章维生素类药物的null概述维生素： 是维持人体正常代谢机能所必需的 微量营养物资。 人体不能合成维生素。null VitA、D2、D3、 E、K1 等 脂溶性水溶性 VitB族(B1、B2、B6、B12) VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺VitMVitPPnull-H 维生素A醇 -COCH3 维生素A醋酸酯 -COC15H31 维生素A棕榈酸酯R :第一节 维生素Anull为一个具有共轭多烯侧链的 环己烯（一） 具有UV吸收 存在多种立体异构化合物null维生素A 325.5 100% 新维生素Aa 328 75% 新维生素Ab 320.5 24% 新维生素Ac 310.5 15% 异维生素Aa 323 21% 异维生素Ab 324 24% 相对生物效价nullVitA2VitA3 易发生脱氢、脱水、聚合反应null △或有金属离子存在时氧化↑null环氧化物VitA醛VitA酸nullCHCl3不溶于水 易溶于有机溶剂和植物油等null条件 无水无醇CHCl3null蓝色紫红null（BP（1998））λmax为326nm 一个吸收峰λmax为350～390nm 三个吸收峰null去水VitA（VitA3）↓VitAnullnullUSP 显色剂 磷钼酸 斑点颜色和Rf值BP 杂质对照品法 显色剂 三氯化锑null立体异构体 氧化产物及光照产物 合成中间体 去氢维生素A（ VitA2） 去水维生素A（ VitA3）UV法（一）null三点校正法 1. 条件： （1）杂质的吸收在310~340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小； （2）物质对光的吸收具有加和性。null2. 波长的选择： （1） 1 VitA的max（328nm） （2） 2 3 分别在1的两侧各选一点 测定对象 VitA醋酸酯第一法 等波长差法nullnull第二法 等吸收度法(皂化法)测定对象 VitA醇nullnull测定法 （1）基本步骤: 第一步 A选择 选择依据： 所选A值中杂质的干扰已基本消除 null注意： C 为混合样品的浓度 第二步 求null第三步 求效价换算因数由纯品计算而得：nullnullnull第四步：求标示量％null 方法：（2） 第一法维生素A醋酸酯null 判断 是否在326～329nm之间在326～329nm之间 改用第二法是否null 规定值 差值null 判断差值是否超过规定值的有一个以上超过无超过 计算 A328（校正） 用A328计算nullnull第二法第二法null VitAD胶丸中VitA的含量测定 精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量0.08262g/丸）的物 0.2399g 至250ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一20 ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度为nullA300 ：0.354 A316 ：0.561 A328 ：0.628 A340 ：0.523 A360 ：0.216A300 /A328 ：0.555 A316/A328 ：0.907 A328/A328 ：1.000 A340/A328 ：0.811 A360/A328 ：0.299 求本品中维生素A的含量？nullA300 /A328 ：0.564 A316/A328 ：0.893 A328/A328 ：1.000 A340/A328 ：0.833 A360/A328 ：0.344 0.555 0.907 1.000 0.811 0.299 + 0.01 －0.01 0 + 0.02 + 0.04 － － － － －= = = = =nullnull（等吸收度法） 适用于维生素A醇第一法无法消除杂质干扰时用此法[ 皂化法、6/7A法 ]（3）第二法null水溶性脂溶性null 判断max是否在323～327nm之间取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定 计算是否null 判断 A300 /A325 是否大于0.73是否取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定 计算A325(校正)nullnull03%－3%null（二）三氯化锑比色法优点 简便 快速λmax 618nm～620nm标准曲线法氨基嘧啶环－CH2－噻唑环(季铵碱)氨基嘧啶环－CH2－噻唑环(季铵碱)第三节 维生素B1HClCl-null（一）溶解性1、易溶于水2、水溶液呈酸性（二）UV共轭双键λmax = 246nmnull嘧啶环 —— 伯氨噻唑环 —— 季铵1、可与酸成盐2、与生物碱↓→↓3、含量测定 —— 非水碱量法（三）硫色素反应（四）碱性nullChPnullnull硫色素＋2HnullVitB1H+H+H+nullS元素反应Cl-反应null喹那啶红－亚甲蓝 （紫红→天蓝）nullnullUV法（二）null片剂、注射剂（每片）相当于标示量的%=A = ECL规格 g/片g/100mlgChPnull（每ml）相当于标示量的%=规格 g/mlmlnull准确度高 灵敏度低 操作繁琐 设备简单nullnull2×337.273479.22null 取本品约50mg，精密称定，加水50ml溶解后，加盐酸2ml，煮沸，立即滴加硅钨酸试液4ml，继续煮沸2分钟，用80℃恒重的垂熔玻璃坩埚滤过，沉淀先用煮沸的盐酸溶液（1→20）20ml分次洗涤，再用水10ml洗涤1次，最后用丙酮洗涤2次，每次5ml，在80℃干燥至恒重，精密称定，所得重量与0.1939相乘，即得null例 精密称取本品0.0519g，加水50 ml溶解，加盐酸2ml煮沸，立即滴加 硅钨酸试液4 ml，继续煮沸2分钟，用 80℃恒重的垂熔玻璃坩埚滤过，沉淀 先用煮沸的盐酸溶液（1→20）20 ml 分次洗涤，再用水10ml 洗涤1次，后 用丙酮洗涤2次，每次5ml。在80℃干 燥至恒重，称得沉淀重量为0.2557g。 求本品的含量按干燥品计算为多少？null(本品干燥失重项下测定结果为3.73%)nullA. 取样量±50mg 提高灵敏度B. 80℃ 保持4个H2OC. HCl 增大沉淀颗粒D. 硅钨酸 ：VitB1 = 8 ：1 使沉淀完全E. 硅钨酸边搅拌边缓慢加入 增大沉淀颗粒nullnull激发波长365nm 发射波长435nmnull+ NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇 + NaOH + 异丁醇+ NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇 + NaOH + 异丁醇SdAb对照液供试液null（1）灵敏度高，线性范围宽 （2）代谢产物不干扰，适用于 体液分析null第四节 维生素CL－抗坏血酸nullnull二烯醇结构二酮基结构二烯醇结构null有活性有活性无活性null糖类的显色反应结构与糖类相似nullC3－OH的 pKa = 4.17C2－OH的 pKa = 11.57一元酸nullL(+)－抗坏血酸 活性最强手性C（C4、C5）**null与碱反应nullnullnullnull1、与AgNO3反应2、与2，6 - 二氯靛酚反应(2005)氧化型(2005)null（玫瑰色）（无色）null3、与碱性酒石酸铜反应USP4、与KMnO4反应null或盐酸50℃吡咯USPnullnullnullBP0.01mol/L HCl三、杂质检查三、杂质检查（一）溶液颜色 因维生素C原料与制剂都易变色，常用比较法（和一定的吸光度比较）测定其有色杂质。 原料≤0.03 λ=420nm 片剂≤0.07 λ=440nm 注射液≤0.06 λ=420nmnull指示剂 淀粉指示液nullnull 取本品约0.2g，精密称定，加新 沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶 解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴 定液（0.05mol/L）滴定，至溶液显蓝 色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液 (0.05mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6nullnull（1）酸性环境 d . HCl （2）新沸冷H2O减慢VitC被O2氧化速度（3）立即滴定 赶走水中O2减少O2的干扰null（4）附加剂干扰的排除片剂 —— 滑石粉 —— 过滤nullnullUSPJPnullnull（2）快速滴定 2min内 （1）酸性环境 HPO3-HAc 稳定VitC防止其他还原性物质干扰（3）剩余比色测定 （定量过量）（测剩余染料）null（4）缺点 需经常标定贮存≤一周干扰多 氧化力较强null1、HPLC的优点灵敏度高选择性高分离分析同步微量分析干扰少 快速null2、HPLC法分离VitC常用方法及测 定对象 对象 制剂、生物样品、果汁方法 离子交换色谱法 离子对色谱法 分配色谱法（正、反相）血、尿、组织、细胞等null例多种维生素片中VitA、 VitB1、 VitB2 、VitB6 、烟酰胺、VitC、 VitE的含量测定色谱柱 ODS 流动相 A、水 -甲醇（4 ：1） B、甲醇 （梯度洗脱） 抗氧剂 二巯基丙烷磺酸钠null水溶性维生素 离子对色谱法（樟脑磺酸） 内标法 + 校正因子 内标物——苯酚脂溶性维生素 外标法 苯并－二氢吡喃醇第六节 维生素Enull***null生物效价 右旋体 ： 消旋体 = 1.4 ：10（天然品）（合成品）dl－α－生育酚醋酸酯null结构与性质一、苯环 + 二氢吡喃环 + 饱和烃链1、易溶于有机溶剂，不溶于水2、UV3、酯键 易水解null（一）硝酸反应橙红色null（橙红色）生育红HNO3强氧化剂null 取本品约30mg，加无水乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml，摇匀，在75℃加热15分钟，溶液应显橙红色。null三氯化铁－联吡啶反应（二）null对-生育醌弱氧化剂null红色nullλmax = 284nmλmin = 254nm0.01%无水乙醇中null维生素EUV图null薄层板 硅胶G展开剂 环己烷 -乙醚（4 ：1）显色剂 硫酸（105℃ 5′） VitE Rf = 0.7null游离生育酚 硫酸铈滴定液（0.01mol/L） 二苯胺（亮黄→灰紫） 利用游离生育酚的还原性， 将硫酸铈还原成硫酸亚铈试剂（二）null（M生育酚= 430.8）例 取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸铈液（0.01mol/L）不得过 1.0ml。null≤2.15％null药典规定消耗硫酸铈液（0.01mol/L）≤1.0ml设：应消耗硫酸铈液≤ V ml 0.01×1.0 ＝实际浓度× V若硫酸铈液浓度不是0.01000mol/L， 应重新计算硫酸铈的消耗量null例 Ce(SO4)2 = 0.01020mol/LnullGC法（一）GC特点1、选择性好 灵敏度高 速度快 分离效能好挥发性低、不稳定、极性强→衍生化易受样品蒸气压限制null载气→N2 固定液→硅酮（OV-17） 担体→硅藻土或高分子多孔小球 柱温→265℃ 检测器→氢火焰离子化检测器(FID) 内标→正三十二烷 n ≥ 500 R≥2内标法加校正因子nullnull内标法供试液（样品+内标）内标物对照液（对照+内标）null校正因子：null实际工作中的计算方法null例内标液 取正三十二烷加正己烷溶解 并稀释成1.0mg/ml溶液对照液 精密称取VitE对照品0.2011g 置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内 标液10ml，密塞，振摇使溶解，取 1~3ul注入GC仪，测定，计算供试液 精密称取供试品0.1998g置棕 色具塞锥形瓶中，精密加入内标液 10ml，密塞，振摇使溶解，取1~3ul 注入GC仪，测定，计算null对照液供试液本品含C31H52O3应为96.0 ~ 102.0%nullBP GC 内标 正三十二烷 R≥1.4USP GC 内标 十六酸十六醇酯 R≥1.0JP HPLC 外标 dl－α－生育酚 R≥1.4null利用生育酚的易氧化性还原型氧化型二苯胺（亮黄→灰紫）null防止Ce(SO4)2的水解 减慢生育酚被O2氧化速度C、酸性条件Ce(SO4)2易溶于水 生育酚易溶于醇B、溶剂分子量较大，反应慢 易被O2氧化A、反应速度nullMVitE = 472null样品→ dl－α－生育酚 固定相→十八烷基硅烷键合硅胶 流动相→甲醇-水（49 ：1） 检测波长→292nm R＞2.6 RSD≤0.8%null测定对象→血清中VitA和VitE 固定相→十八烷基硅烷键合硅胶 流动相→甲醇-水（96 ：4） 检测波长→ 8′前330nm 8′后292nmnull108．在三氯醋酸或盐酸存在下，经 水解、脱羧、失水后，加入吡 咯即产生蓝色产物的药物应是 A. 氯氮卓 B. 维生素A C. 普鲁卡因 D. 盐酸吗啡 E. 维生素Cnull99：77. 下列药物的碱性溶液，加入 铁氰化钾后，再加正丁醇， 显蓝色荧光的是 A. 维生素A B. 维生素B1 C. 维生素C D. 维生素D E. 维生素Enull97：77．既具有酸性又具有还原性的 药物是 A. 维生素A B. 咖啡因 C. 苯巴比妥 D. 氯丙嗪 E. 维生素Cnull99m：132.维生素C的鉴别反应，常采 用的试剂有 A. 碱性酒石酸铜 B. 硝酸银 C. 碘化铋钾 D. 乙酰丙酮 E. 三氯醋酸和吡咯null99m：84. 测定维生素C注射液的含量 时，在操作过程中要加入 丙酮，这是为了 A. 保持维生素C的稳定 B. 增加维生素C的溶解度 C. 使反应完全 D. 加快反应速度 E. 消除注射液中抗氧剂的干扰null98：85. 能发生硫色素特征反应的药物 是 A. 维生素A B. 维生素B1 C. 维生素C D. 维生素E E. 烟酸null97：81．使用碘量法测定维生素C的 含量,已知维生素C的分子量 为176.13，每1ml碘滴定液 (0.1mol/L) 相当于维生素C 的量为 A. 17.61mg B. 8.806mg C. 176.1mg D. 88.06mg E. 1.761mgnull97：[121—125]（99：[121—125]） 可发生以下反应或现象的药物为 A.维生素B1 B.维生素C C.两者均能 D.两者均不能 121.与碘化汞钾生成黄色沉淀 122.麦芽酚反应 123.在乙醚中不溶 124.与2,6-二氯靛酚反应使颜色消失 125.硫色素反应ADCBAnull115．维生素A的鉴别试验为 A. 三氯化铁反应 B. 硫酸锑反应 C. 2,6-二氯靛酚反应 D. 三氯化锑反应 E. 间二硝基苯的碱性乙醇液反 应null77．中国药典（2000年版）规定维生 素A的测定采用紫外分光光度法 （三点校正法），此法又分为 A．等波长差法 B．等吸收度法 C．6/7 A法 D．差示分光法 E．双波长法null78．维生素E的鉴别试验有 A．硫色素反应 B．硝酸氧化呈色反应 C．硫酸-乙醇呈色反应 D．碱性水解后加三氯化铁乙醇 液与2,2-联吡啶乙醇液呈色反 应null80. 下面哪些描述适用于维生素A A. 分子具有长二烯醇侧链，易被氧化 B. 具有较长的全反式共轭多烯结构 C.含酯键，经水解后产生苯并二氢吡 喃衍生物，易被氧化 D.与三氯化锑的无醇氯仿液中呈不稳 定兰色，很快转变为紫红色 E.样品用无水乙醇溶解后，加硝酸加 热后，呈橙红色 null 维生素A与 反应即显蓝色，渐变成紫红色；反应需在 条件下进行。 （ ） 维生素A分子中由于具有共轭多烯侧链，因而其性质很稳定，不易被氧化变质。三氯化锑无水×null 维生素E在酸性或碱性溶液中加热可水解生成游离 ，当有氧或其他氧化剂存在时，则进一步被氧化成醌型化合物，尤其在碱性下更易发生。生育酚null 维生素B1 的噻唑环在 介质 中可开环，再与嘧啶环上氨基缩合 环合，然后经 等氧化剂氧 化生成具有荧光的 ，加 荧 光消失，加 荧光又显出；此反应 称为 反应。碱性铁氰化钾硫色素酸碱硫色素null 维生素C是 元弱酸，具有强 性，易被氧化剂氧化，常用 作其它制剂的 剂。 一还原抗氧null 维生素E中游离生育酚的检查时 规定消耗硫酸铈滴定液（0.01mol/L） 不得过1.0ml，现硫酸铈滴定液的实 际浓度为0.01053mol/L，应不得超过 多少ml？ A. 0.95 B. 0.97 C. 0.99 D. 0.92 E. 1.05null 中国药典维生素C的含量测定 取本品约0.2g，精密称定，加新 沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶 解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴 定液(0.1mol/L)滴定，至溶液显蓝色， 在30秒内不褪。每1ml碘滴定液 (0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6。 已知：取样量为0.2084g，消耗碘滴 定液（0.09981mol/L）22.75ml。 null要求：（1）解释划线部分 （2）计算本品的含量是否符合 规定 （规定本品含C6H8O6应不低于99.0%）nullVitB1片UV法含量测定 取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于VitB1 25mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液(9→1000)约70ml，振摇15分钟，加盐酸溶液(9→1000)稀释至刻度。用干 燥滤纸滤过，精密量取续滤液5.0ml，置 另一100ml量瓶中，再加盐酸溶液 (9→1000)稀释至刻度，摇匀，在246nm 处测定吸收度，按C12H17ClN4OS·HCl的 吸收系数（ ）为421计算，即得。null已知 20片重 = 1.4070g A246=0.461 取样量 = 0.1551g 规格 = 10mg/片 求 本品含量是否符合药典规定？ （应相当于标示量的90.0～110.0%)null