池养南美白对虾卵巢促熟技术

南美白对虾(Penaeus vannamei)分布于西太平洋沿岸，是北美和中南美洲重要的养殖对虾之—，它具有生长迅速、对饲料蛋白质需求量低、出肉率高、离水存活时间长、易于进行集约化养殖以及抗病力强等优点。江苏省大丰市等沿海地区近年来试养南美白对虾的情况明，这种虾比中国对虾生命力强，是值得推广的养殖新品种。为此，当前的首要任务是采用全人工育苗技术解决苗种问题。南美白对虾的雌虾在—般蓄养条件下性腺不会成熟；在驯养条件下，其成熟也无规律。国内在这方面也未见详细的报道。作者于1996年3—5月对池养的南美白对虾进行了摘除眼柄、强化营养、控制光照等促熟试验，取得了较好的效果，现报告如下。 材料与方法 1．亲虾的选择 1996年3月12日，从江苏省大丰市某养殖场的亲虾越冬池中选取雌虾200尾，个体健壮活泼、无病无伤，尾重40.6—56.7g，平均47.8g。经观察，这些雌虾的性腺均未发育。培育前，用400×10-6浓度的福尔马林海水溶液浸洗消毒3min，然后以每组40尾随机分为5组，分别放人4×2.5×1.2m的室内水泥池中培育。培育池事先经浓度为1000×10-6的漂白粉溶液消毒处理。 2．培育管理 亲虾培育池水深80cm。每次投饲前吸污一次，清除残饵、粪便等；同时换水，日换水量为20％左右。为确保池中充裕的溶氧量并防止过分干扰亲虾，每隔8h充气一次，每次5min。水质控制指标为：盐度28‰—30‰、溶氧量5mg／L以上、PH 7.6-8．5、氨氮含量低于0.1mg／L。另外，不定期用0.5—1×10-6的土霉素或呋喃西林交替泼洒，预防疾病。 3．促熟 水温调控 从水温16℃的越冬池取出亲虾，分组放人促熟培育池后，均以每天0.5℃的升幅(早晨8：00升0.3℃，晚上20：00升0．2℃)连续升温8d至20℃；恒温两天后，仍以每天0．5℃的升幅升温，直到水温达到26℃时恒温培育。未作对照试验。 摘除眼柄 在分组时，对Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组亲虾用镊烫法摘除左侧眼柄；Ⅳ、Ⅴ组亲虾未摘除眼柄，作为对照组。 饲料投喂 各池每天投喂2次(上午8：00，下午18：00，日投饲量视水温和摄食酌定。足量投喂，以池中稍有残饵为度。试验分蛤肉投喂组和蛤肉活沙蚕半投喂组，以作对比。 光线控制 低光照试验组用黑色塑料布遮光，使池面的光照强度在200lx左右；对照组为室内自然光，光照强度在2800lx左右，两组光周期均为14L: 10D。 4．卵巢成熟度检查 亲虾培育至第45天，先用目测法逐一检查卵巢发育情况，然后从各组中选出具代表性的亲虾进行解剖，并取一小块卵巢组织样品用10％甲醛液固定→各级酒精脱水→石蜡包埋 →切片(8—11um)→德拉菲尔氏苏木精和1％醇溶伊红染色。根据目测和解剖学、组织学观察，对亲虾的卵巢发育程度按分期鉴定。 I期(末发育期) 解剖观察，看不见卵巢或卵巢纤维无色透明；从外壳看不见卵巢。 Ⅱ期(增殖期) 解剖观察，卵巢半透明，色白浊带灰色，呈长条状，小于肠直径；从外壳看较难辨别。切片观察，卵母细胞直径40-56um，看不到卵黄粒，细胞呈强嗜碱性。 Ⅲ期(生长期) 卵巢不透明，呈浅黄色，卵巢直径比肠直径大。镜检切片，卵径75 -120um，卵母细胞核呈嗜碱性，细胞质呈嗜酸性，胞内逐渐积累卵黄物质，滤泡包围每个细胞。外观卵巢清晰可见。 Ⅳ期(近成熟期) 解剖观察，卵巢不透明呈褐色，并遍及头胸部的整个脊背和腹部。镜检切片，卵径120-200um，卵黄粒粗大，滤泡层成膜状紧贴卵细胞。 Ⅴ期(成熟期) 卵巢变宽，轮廓清楚，颜色加深，呈褐绿色；从外壳可看到颗粒状的卵。镜检切片，卵径约200—240um，卵黄粒粗大，滤泡层破裂，临近产卵。 结果 培育试验进行到第45天，检查各组亲虾性腺发育情况，其结果见表1。 讨论 1．摘除眼柄对亲虾卵巢的促熟效果 由上表可以看出，在培育条件相同的情况下，摘除单侧眼柄的Ⅱ组和Ⅲ组亲虾，45d后 其卵巢成熟率分别比未摘除眼柄的V组和ⅣF组亲虾提高51．6％和32．5％，且摘除眼柄各组中均有亲虾近成熟期或达成熟期；相比之下，未摘除眼柄的各组亲虾卵巢发育还停留在Ⅲ期(生长期)。实验表明，摘除单侧眼柄对南美白对虾性腺有明显的促熟效果，其原因是，靠近对虾眼球的眼柄中存在着称为“x—器官”的窦腺复合体，这一神经腺体能分泌性腺抑制激素，抑制卵细胞内卵黄物质的沉积，而卵黄发生是卵母细胞成熟的重要一步[1,4]。通过镊灼法摘除眼柄后，破坏了该窦腺组织，从而消除了它对卵巢发育的抑制作用。卵母细胞在促性腺激素的作用下，可加速向卵黄粒期、成熟期过渡。目前国内外采用的眼柄摘除方法有多种，本试验所采用的镊烫法操作简单、伤口不易感染、成活率高，适于推广。 2．饲料质量对亲虾卵巢发育的影响 由表1可见，投喂贝肉和活沙蚕的混合饲料组(Ⅱ组)，其卵巢成熟率比投喂单一的贝肉组(1组)提高21．8％，达到近成熟期或成熟期的亲虾比率提高45％，说明饲料的种类和配合对南美白对虾亲虾性腺的成熟率和发育速度有较大的影响。研究指出，饲料中蛋白质、脂肪酸等营养成分的组成与对虾的成熟和产卵有着密切的关系。斑节对虾成熟卵巢中的不饱和脂肪酸，特别是二十碳五烯酸的含量是非成熟卵巢含量的1．2—3．2倍；该脂肪酸一部分还可转化成前列腺素，可促进对虾的成熟、产卵[2]。D’croz等(1998)用管沙蚕作饲料添加剂，证明了该沙蚕含有高浓度的二十碳五烯酸，可加快养殖对虾的性腺成熟和排卵[3]。由于此类不饱和脂肪酸是对虾的必需脂肪酸，又必须从饲料中摄取，而活沙蚕含有高浓度的二十碳五烯酸，贝肉中含量相对较少，加之贝肉被投入较高水温的池中，其脂肪酸易氧化变质。因此，本试验中投喂贝肉和活沙蚕的混合饲料组显示出较好的促熟效果。 3．光照强度对亲虾促熟效果的影响 在表1中，弱光照强度(200lx)的Ⅱ组和Ⅴ组，卵巢成熟率分别比自然光照强度 (2800lx)的Ⅲ组和Ⅳ组提高32．6％和13．5％。由于南美白对虾在自然繁殖海区一般栖息 于水深10-20m的浑浊水体中，适应于低光照的环境[4]，并且光线还可能通过对虾视神经系统影响体内的内分泌活动，进而对对虾的繁殖、蜕皮等一系列生理活动过程产生影响。因此，该对虾的卵巢发育和成熟需要低光照条件；相反，强光照强度不但不利于内分泌系统诱导卵巢发育，而且易使对虾受惊扰而跳跃、相互碰撞等，减缓卵巢的正常发育。 表1 促熟技术对南美白对虾卵巢发育的影响 组别 眼柄摘除 饵料组成 光照强度 虾数 在不同发育期虾数 成活率 I 摘 贝肉 200 40 3 8 15 9 2 70．3 92．5 Ⅱ 摘 贝肉+沙蚕 200 40 1 2 6 20 9 92．1 95．0 Ⅲ 摘 贝肉十沙蚕 2800 40 4 11 20 2 59．5 92．5 Ⅳ 未摘 贝肉十沙蚕 2800 40 9 18 10 27．0 92．5 Ⅴ 未摘 贝肉+沙蚕 200 40 7 17 15 40．5 97．5 4，水温对亲虾性腺发育的影响 在适温范围内，水温越高，对虾的代谢越旺盛，性腺发育速度越快。根据南美白对虾在自然海区的繁殖特点，性腺发育的适宜水温应为23-29℃[4]。本试验的催熟水温恒定在26℃，亲虾蜕皮少、性腺发育较快、成活率高。若将水温再调高2-3℃，能否更加有利于性腺发育，这有待于进一步研究。 5．综合促熟技术对亲虾卵巢的促熟效果 本试验结果明显得出，Ⅱ组促熟45d成熟率高达92．1％，为各组之最，说明综合措施较之于单一措施效果更好。这可以理解为，卵巢的成熟过程需要通过内分泌的调节、必需营养素的供给、以及适宜的外界环境条件配合，三者协同作用才能更有效地促进；反之，缺少其中某一项因子，都会使亲虾的性腺发育受到不同程度的影响。 6．促熟技术对亲虾成活率的影响 本试验中，各组成活率均在92．5％以上，表明采用上述促熟技术对亲虾成活率无明显影响，因而这些促熟技术是可行而实用的。 小结 1。适当增温和控光、加强营养、切除眼柄等促熟技术，可使池养的南美白对虾亲虾逐渐达到卵巢成熟。 2。在各项促熟技术中，眼柄摘除与否对亲虾卵巢的促熟效果影响最大，其次是光照强度和饲料的营养成分。 3．多项促熟技术综合应用较之单一措施更有效。本试验以控温26℃、摘除单侧眼柄、光强200lx、投喂蛤肉和活沙蚕组成的混合饲料，试验到第45天时，卵巢成熟率达92.1％。 表明试验所用的综合技术是有效而实用的。