大肠菌群测定

中华人民共和国国家 食品卫生微生物学检验 大 肠 菌 群 测 定 GB 4789.3一94 代替GB 4789. 3-84 Microbiologicl examination of food hygiene Detection of ColiJorm bacteria 1 主题内容与适用范围 本标准规定了食品中大肠菌群的测定方法。 本标准适用于食品中大肠菌群的测定。 2 术语 大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来 源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可 能。 食品中大肠菌群数系以100 mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。 3 31用标准 GB 4789. 28 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂 4设备和材料 4.1 温箱:36士1 0C。 4.2 冰箱 。-4'C. 4.3恒温水浴:44.5士。5℃。 4.4 天平。 4.5 显微镜。 4.6 均质器或乳钵。 车了 平皿:直径为90 mm. 4.8 试管。 4.9 吸管。 4.10 广口瓶或三角烧瓶:容量为500 mL o 4.们 玻璃珠:直径约5 mm, 4.12 载玻片。 4.13 酒精灯。 4.14 试管架。 中华人民共和国卫生部1994一03一18批准 1994一09一01实施 GB 4789.3一94 5 培养墓和试荆 5.1 乳搪胆盐发酵管:按GB 4789. 28中4.9规定。 5.2 伊红美蓝琼脂平板:按GB 4789. 28中4.25规定。 5.3 乳糖发醉管:按GB 4789. 28中4.10规定。 5.4 EC肉汤:按GB 4789.28中4.11规定。 5.5 磷酸盐缓冲稀释液:按GB 4789. 28中3.22规定。 5.6 生理盐水。 5.7 革兰氏染色液:按GB 4789. 28中2.2规定。 6 检验程序 大肠菌群检验程序如下: 7 操作步骏 了.1 检样稀释 7.1.1 以无菌操作将检样25 mL(或9)放于含有225 mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内 GB 4789.3一94 (瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。固体检样最 好用均质器，以8 000^-10 000 r/min的速度处理1 min，做成1:10的均匀稀释液。 7.1.2 用1 mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1 mL，注入含有9 mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管 内，振摇试管混匀，做成1:100的稀释液。 7.1.3 另取1 mL灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1 mL灭 菌吸管。 7.1.4 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。 了.2 乳糖发酵试验 将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1 mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管> 1 mL及 1 ml以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管，置36士1'C温箱内，培养24士2h，如所有乳 糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。 了.3 分离培养 将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36110C温箱内，培养18^-24 h，然后取出，观 察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。 7.4 证实试验 在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1^"2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36士1 0C 温箱内培养24士2h、观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠 菌群阳性。 了.5 报告 根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL (g)大肠菌群的MPN值。 8龚大肠菌群(faecal coliform) 8.，用接种环将所有产气的乳搪胆盐发酵管培养物(见7. 2条)转种于EC肉汤管内，置44. 5士。. 2 "C 水浴箱内(水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面)。培养24士2 h,经培养后，如所有EC肉汤管均不产 气，则可报告为阴性;如有产气者，则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上，置36士 1℃培养18 24 h,凡平板上有典型菌落者，则证实为粪大肠菌群阳性。 8.2 结果报告 根据证实为粪大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告每100 mL(g)粪大肠菌群的MPN值。 大肠菌群最可能数(MPN)检索表 阳 性 管 数 MPN 100 mL(g) 95%可信限 下 限 上 限1 mL(g)X3 0.1 mL(g) X3 0.01 -L(g)X3 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 2 3 < 30 30 60 90 <5 90 0 0 0 0 1 1 1 1 0 I 2 3 30 60 90 120 < 5 130 GB 4789.3一94 续表 阳 性 管 数 MPN 100 -L (g) 96%可信限 1 mL(g)X3 0.1 mL(g)X3 0.01 -L(g)X3 下 限 上 限 0 0 0 0 2 2 2 2 0 1 2 3 60 90 120 160 0 0 0 0 3 3 3 3 0 1 2 3 90 130 160 190 1 1 1 1 0 0 0 0 0 1 2 3 40 70 110 150 G510 ::: 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 2 3 70 110 150 190 :: ::: 1 1 1 1 2 2 2 2 0 1 2 3 110 150 200 240 30 360 1 1 1 1 3 3 3 3 0 1 2 3 160 200 240 290 2 2 2 2 0 0 0 0 0 1 2 3 90 140 200 260 ;: ::: 2 2 2 2 1 1 1 1 0 1 2 3 150 200 270 340 :: ;:: 460 Gs 4789.3一94 续表 阳 性 管 数 MPN 100 mL(g) 95%可信限 1 mL(g)X3 0.1 mL(g)X3 0.01 mL(g)X3 下 限 上 限 2 2 2 2 2 2 2 2 0 1 2 3 210 280 350 420 40100 14701 500 2 2 2 2 3 3 3 3 0 1 2 3 290 360 440 530 3 3 3 3 0 0 0 0 0 1 2 3 230 390 640 950 40 70 150 1 200 1 300 3 800 3 3 3 3 1 1 1 1 0 1 2 3 430 750 1 200 1 600 70 140 300 2 100 2 300 3 800 3 3 3 3 2 2 2 2 0 1 2 3 930 1 500 2 100 2 900 150 300 350 3 800 4 400 4 700 3 3 3 3 3 3 3 3 0 1 2 3 2 400 4 600 11 000 〕24 000 360 710 1 500 13 000 24 000 48 000 注 ①本表采用3个稀释度Cl -L(g),0.1 mL(g)和0.01 mL(g))，每稀释度3管. ②表内所列检样f如改用10 mL(g),1 mL(g)和。.1 mL(g)时，表内数字应相应降低10倍;如改用。，1 mL (砂,0.01 mL(目和。.001 mL(妒时，则表内数字应相应增加10倍。其余可类推。 附加说明: 本标准由卫生部卫生监督司提出。 本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草。 本标准主要起草人刘宏道. 本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。 461