抗酒石酸酸性磷酸酶检测试剂盒(PNP比色法)

抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)检测试剂盒(PNP比色法) 简介： 酸酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内，各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶适宜pH。存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistnt acid phosphatase，TRAP)均在细胞滤泡中，并不是释放入血液，血液中的TRAP绝大多数来源于破骨细胞，因此可以通过测量血液中的TRAP了解破骨细胞的功能状态，几乎被认为是是机体破骨活性的唯一血液指标。TRAP一种糖基化的含金属蛋白酶，在破骨细胞(osteoclast)和破软骨细胞(chondroclast)中高表达，在活化的巨噬细胞和神经元中也有表达。 Leagene抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)检测试剂盒(PNP比色法)(Tartrate Resistnt Acid Phosphatase Colorimetric Assay Kit)检测原理是利用Para-nitrophenyl phosphate(pNPP)为一种常用的磷酸酶显色底物，在酸性条件下，可在酸性磷酸酶的作用下生成p-nitrophenol。在碱性条件下p-nitrophenol呈黄色，产物黄色越深，说明酸性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过分光光度计测定吸光度，据此通过比色分析就可以计算出酸性磷酸酶活性水平。在适量的酒石酸存在的情况下进行酸性磷酸酶的活性检测，检测得到的酸性磷酸酶的活性就是抗酒石酸酸性磷酸酶的活性。该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的抗酒石酸酸性磷酸酯酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 编号 名称 TE0045 60T Storage 试剂(A): ACP Assay buffer 50ml 4℃ 试剂(B): pNPP 2支 -20℃ 避光 试剂(C): Tartrate Solution 2ml 4℃ 试剂(D): p-nitrophenol(10mM) 0.2ml -20℃ 避光 试剂(E): Stopping Solution 80ml RT 使用说明 1份       自备材料： 1、 比色杯 2、 水浴锅或恒温箱 3、 分光光度计 操作步骤(仅供参考)： 1、 配制检测工作液： ①配制显色工作液： 取出1支pNPP，恢复至室温后溶解于ACP Assay buffer，混匀，冰上预冷备用。新配制的显色工作液应及时用完。 ②配制品工作液：取出p-nitrophenol(10mM) 恢复至室温后，取溶解于μl ACP Assay buffer，使浓度达到一定程度。 2、 准备样品： ①血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规制备后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，冻存，用于抗酒石酸酸性磷酸酶的检测。 ②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要可用PBS或生理盐水进行适当匀浆，一般细胞数量在106以上，组织应在100mg以上，离心取上清，冻存，用于抗酒石酸酸性磷酸酶的检测。 ③植物样品：取适量的植物组织加入少量生理盐水或PBS，充分捣碎或研磨，静置，用纱布或滤纸过滤，离心，留取上清液并测量体积，冻存，用于抗酒石酸酸性磷酸酶的检测。 ④高活性样品：如果样品中含有较高活性的抗酒石酸酸性磷酸酶，可以使用ACP Assay buffe、PBS或生理盐水稀释后再行检测。 3、 加样：按照下表设置空白对照、标准品、待测样品，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。标准品的用量分别为0.03、0.06、0.12、0.18、0.24、0.3ml，待测样品直接加0.3ml。如果样品中的酸性磷酸酯酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行管。   空白对照管 标准品管 待测样品管 ACP Assay buffer 0.3ml (0.3-x)ml (0.3-y)ml 显色工作液 0.3ml 0.3ml 0.3ml Tartrate Solution 30μl 30μl 30μl 待测样品 — — yml 标准品工作液 — xml —         4、 轻轻混匀，孵育。 5、 每孔加入Stopping Solution终止反应。 6、 酶标仪检测处吸光值，如果无法检测，亦可检测范围内吸光值，一般应数小时内检测完毕。 计算： 酸性磷酸酶活性单位的定义：pH4.8 37℃条件下，每分钟水解para-nitrophenyl phosphate显色底物产生1微摩尔p-nitrophenol所需的酸性磷酸酶的量定义为一个酶活力单位。根据酶活性定义，计算出样品中的抗酒石酸酸性磷酸酶活性。 注意事项： 1、 待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。 2、 建议每次测定时都做标准曲线，以使标准更准确，另外标准品需避免反复冻融。 3、 如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但应考虑根据比色杯的最小检测体积，尽量采用小体积的比色杯。 4、 所测样本的值高于标准曲线的上限，应用ACP Assay buffer稀释样品后重新测定。 5、 一支显色工作液配制后需当日使用完毕，因此请注意适当多准备一些样品一起检测。 6、 p-nitrophenol溶液对人体有害，反应终止液有腐蚀性，请小心操作。 7、 如果希望进行酶活性的绝对定量，进行酶反应时应精确计时，此时推荐采用孵育30min或更长时间，以减小操作过程中的时间误差。 8、 待测样品中抗酒石酸酸性磷酸酶活性较低时，可适当延长孵育时间至30min。 9、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期：12个月有效。 编号 名称 CC0007 磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁) CS0001 ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer) DC0032 Masson三色染色液 DF0135 多聚甲醛溶液(4% PFA) NR0001 DEPC处理水(0.1%) PS0013 RIPA裂解液(强) TE0002 碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(PNP微板法)     相关：