Ⅱ型神经纤维瘤病分子遗传分析指导临床个体化诊疗的研究

．564． 主堡煎墅匡堂盘查至Q!!生鱼旦箜!Q鲞箜鱼塑￡塾鱼!盟垦坠塑坐曼亟』坚12Q!!：y旦!：!Q：堕Q：鱼 ·神经肿瘤转化医学- Ⅱ型神经纤维瘤病分子遗传分析 指导临床个体化诊疗的研究 王维 杨学军 王华民 董雪涛 李瑜 明浩朗 张斌 于圣平 任炳成 陈聪 刘彬刘志峰 【摘要】 目的建芷临床适用的Ⅱ型神经纤维瘤病(NF2)的分子遗传分析方法，对NF2患者及 其后代进行分子遗传诊断，以指导NF2家族的遗传咨询及个体化病情监测、随访及临床干预。方 法 以天津医科大学总医院神经外科自2009年1月至2010年1月收治的10例NF2患者为研究 对象，收集患者的肿瘤组织标本，原代培养并鉴定术中获取的许旺细胞瘤组织。抽提原代培养的肿 瘤性许旺细胞及患者『IIL液的基因组DNA(2例NF2患者已有后代且同意接受基因测序，同时对其后 代的血液进行基冈组DNA提取)，对2例NF2患者亲子二代血液及患者的肿瘤性许旺细胞基因组 DNA进行NF2基因测序。制定不同的临床干预及随访．结合亲子二代分子遗传检测结果，对 NF2家族制定后代的长期随访计划。结果初步建立NF2许旺细胞瘤组织标本与基因组DNA 库。基因测序结果显示肿瘤性许旺细胞与患者血液提取的NF2基因突变位点相同。第一组母女存在 完全相同的基因突变位点，第二组母子基凶突变位点不完全一致。二组检测到的突变位点均位于靠 近外显子的调控区。 结论NF2许旺细胞瘤组织标本及基因组DNA库Hf以为该病分子遗传研 究提供组织及基因组DNA资源。分子遗传分析可以指导临床工作，提前预计后代罹患风险，为高风 险人群制定个体化的随访计划。个体化的临床十预可以提高患者的生活质量，延长生存期。 【关键词】 Ⅱ型神经纤维瘤病；分子遗传学；临床十预 【中图分类号】R730．264【文献标志码】A 【文章编号】 1671—8925(2011)06—564—06 IndividualizeddiagnosisandtreatmentofneurofibromatosistypeIIgradedbymoleculargenetic analysisWANGWei,YANGXue-jun,WANGHua——min,DONGXue——tao,LIYu,MINGHao——lang, ZHANGBin,YUSheng-ping,RENBing-cheng,CHENChong,LIUBin,LIUZhi卡ng．Department ofNeurosurgery,GeneralHospitalofTianjinMedicalUniversity,Tianjin300052,China Correspondingauthor．"YANGXue-jltn,Email：ydenny@yahoo．eom 【Abstract】0bjectiveToestablishamoleculargeneticanalysismethodapplicableclinicallyfor geneticdiagnosisofpatientswithneurofibromatosistypeII(NF2)andtheiroffsprings，andfurtherguide thegeneticcounselingofNF2family，conditionmonitoring，follow-upaswellasclinicalinterventionof thepatients．MethodsTenpatientswithNF2，admittedtoourhospitalfromJanuary2009toJanuary 2010，werechosen；tumorigenicSchwanncellsinSchwannomawereisolatedandpurifiedforprimary culture．GenomicDNAwasextractedfromtumorigenicSchwanncellsandfromthebloodof2patients andtheiroffspringswhoagreedtoacceptgenesequencing；theNF2genewassequenced(El一15andE17 exonsandadjacentintrons)．AccordingtotheimplicationofNF2genesequencing，geneticcounseling wasgiventotheNF2family，andthepotentialNF2patientsinoffspringswerefollowedupina long-term．ResultsSchwannomatissueandgenomicDNAbankwereestablishedinitially．Totally sameNF2genemutationsweredetectedingenomicDNAextractedbothfromtumorigenicSchwarmcells andbloodcellsinthesamepatient．Bycomparingthegenotypesbetweenthepatientsandtheoffsprings， consistentNF2genemutationswerefoundbetweenafemalepatientandherdaughteraged3，butnot completelyconsistentgenemutationsbetweenanotherfemalepatientandhersonaged15．Allofthe mutationsinNF2genewerelocatedinthecontrolregionneartheexons．Basedonthepatient’Sclinical DOI：10．3760／cma．j．issn．1671—8925．2011．06．007 作者单位：300052天津，天津医科大学总医院神经外科 通信作者：杨学军，Email：ydenny@yahoo．com 万方数据 中华抻＆Ⅸ学杂忐2011年6月第10卷镕6ⅫChinJNeedJu眦20llVoll0N06 ㈣In㈣sandsmptomsr—hleplansforcrlnimtinZc—tiomnd自lhⅢemdeveloped “nd∞ioaSchw∞nomatissueandgcnomicDNAbankcouldmppiymebio㈣eforgenellc mol∞ulⅡ,es*ingandt嗽[rncn[srndiesMolecuhrgcncficmalymwouldapptyinelini∞lpmclicc gllidanec．NF2riskprediction，andf；oIlow-up口lanforhigh·riskNF2hlc[ivid∞lsEarlydiagnoslsand lyca0,aen【1condiLionm咖“n芒a刮longk呻fMl⋯updpc瑚n“l∞缸clinicalinteⅣentionan n∞d目toimpmvctheq∞1时oflimandprOtongthesurvi"l 【Keys】Neu∞劢ro眦【0粥typeI】，MoIecuI+geneticam协is；cI坷∞IirLIe州n[ion Ⅱ型神经纤维瘤病(ncurofibromatosls帅cⅡ， NF2)皿种较罕见的常染色体显性遗传病．发病率 约为25／10万I】．常表现为许旺细胞瘤、多发怙膜 循、睦腹瘤、脊髓肿瘤，神经纤维瘤，神经鞲肥厚病及 晶状体后囊浑浊等rI，取侧前庭神经许旺细胞瘸是 NF2的典型临球特征，约50％患者有叫确的家旅遗 传病史．50％dl新发基因突变引起。致病责任基因 NV2为抑癌基Pq¨I．定位于染色体22q122(22号染 色体1区2带2亚带)，全＆为120kb，编码产物称 为Merlin蛋白。研究表明由于脚蔡罔突变造成 Merlin蛋白的缺失与失括。从而丧先r肿瘤抑制作 州．导致肿瘤的形成M。本研究拟初步建立NF2许 旺细胞埔标本与基蹦组DNA库以及临床适用的 NF2分子遗传分析方法，为发现新的Ⅳ门基因突变 彤式及NF2基囚型与l临床表现型之问的关系提供 组织及DNA资源．并且对NF2患者及其后代进行 分了遗传诊断，以指导NF2家族的遗传咨询、个体 化病情监测、随_i方及临床T预。 与方法 一、病例选样 患青来源于夫津医科大学总医院神经外科自 2009年1月至2010年1月收情的lO铡患者，l临床 表现及影像学资料均符合1987年美国捌立卫生研 究院(NlHl提卅的NF2临床诊断i’i。所有手术切 除标水于术后经病理检查证实均为许旺细胞瘤。所 有受试者均知情同意。 本组2例患者有后代且同意接受基因测序。先 证者的影像学资料见嘲I：患者I为双侧前庭神经 讷-旺细胞瘤台并椎管内多发许旺细胞瘤．患者2为 双侧前庭神经许旺细胞癌合并颅内多发脑膜瘤，第 一组：母29岁，女3岁；第二纽：母4】岁．子15岁。 2组患者及其子女空腹采集外周血标本5mL。 二、主要试用}及仪器 DMEM培养基购自美国Gibco公司：10％胎牛 血清(BsA)购自美国Hyclone公司；50叫mL神经 调节蛋白(NRG，I．B1)贿自美国RD公司；垒血基因 组DNA提取试剂盘、琼脂睹凝胺回收试剂盘均购 n北京博迈德基州技术有限公司：贴壁细胞基因组 提取试剂盒购自美『qPromcga公司；DNA分圻仪 (3730XL型)购自美国ABI公司。 i、实验方法 l许旺细胞瘤组织的原代培养及鉴定：术中收 集的10坷NF2患者的许吒细胞瘤组织标本保存于 一80t冰箱，建立m许旺!母胞癌组织标本库。原代 培养lO例新鲜许旺细胞癌组织．I型腔原酶消化培 养法提取肿蜊性许旺细胞低浓度胰蛋白酶快速消 化法、差数贴疃法和克隆筛选技术纯化细胞。镜下 观察细胞形卷学．免疫细胞化学染色检测S-100嚣 白的表选．鉴定经体外培养纯化的细胞为肿瘤性许 旺细胞m。 2基岗组DNA的提取按照美国Prom+ga公 Ag女【^自**ⅢT1wl镕№H#(“％M《#《*目．#∞十#m目a*m**J．B：e女lM■口* #＆TlwI镕4H∞Ic广1jt*m}《mT}＆S#％ftg)Ce#l自《■*#∞T1w『mⅢ日镕 (1．一b**$}《《F$&R*Ⅸ*十镕々)．D：±女2^目#*ⅢTIWl**n#(Ⅱ自*十*自R# 镕R#{自目**日■Ⅵ*bmH％m^《mr女R■mHgm《}##$目e目＆4m) 口I Nne女∞#镕{女# n}IIn'agingofpall⋯Ihn¨mb⋯‰№Il 万方数据 566坚幽整塑型盘查垫监t月第』堂_塑堕盟_!型吐盟坚m咄尘堕弛!吐丝上幽 刮WiTjMGenomieDNAPI．nficmionKit中骷壁细 胞DNA提取说明提取上述培养的阽壁细胞基因 组；按J{cf北京博迈德基因技术有限公司人m基因组 提取试剂盎巾的提取说明按步骤挺取患者及其丁女 的血渡基因组；209几琼脂糖凝腔电泳梭渊DNA的 完镀性后十一20℃冰箱保存．建立NF2患者的基因 组DNA库。 3PCR扩增目的基因：根据NF2基罔l～15号、 17号外显子及其邻近内含子的序列．由北京博迈德 基因技术有限公司并台成t述基因片最上下辩 的引物；聚合酶链反应体系共50“L：向200止EP 骨中依次加^模板DNA2vtL．上下游引物2“L．2× TaqMaslerMix25ttL，加ddH'o举50¨L；反应条 件：94℃预变性3rain．94℃|竖性30s、53℃退火30 s、72℃延伸30s．40次循环．72℃总延伸10rain。由 十17号外显于段其邻近的内含子较长．分三段进行 扩增测序。根据目的片段的大小．将争部PCR扩增 产物分三组进行PCR扩增：E2一E14片段大小在 300--500bp，72℃延伸303；El，E15片段大小在 50肌800bp，72℃延伸45s；E17-I、E17-2、E17—3片 段大小在1400—1700br,．72℃延伸105s。 4NF2基囚测序：PCR扩增产物f20g凡琼脂 糖凝胶中40v电压电泳20min，出现清晰的目的 条带后，DNA胶回收纯化，片{DNA分析仪进行双 向测序。 5临床T预及随访：制定不同的临床干预及随 访计划，站含亲于--fL分子遗传检测结果．对NF2 家族制定后代的长期随访计划。 结 集 一、许旺细胞瘸组织的原代培养及鉴定 体外原代培养至第3代的舯I卣性许旺细胞．倒 置显微镜下可见大部分细胞胞核呈长椭圆形．核仁 小清楚，胞体呈长梭形或长=角形，两端有细长的突 起或3个突起。免疫细胞化学染色结果品示经纯化 的肿痛性许旺细胞中S-100蛋白表达呈强阳性．胞 质和胞核均为棕黄色，细胞里双植梭形或。角彤阳 性细胞计数>95％。(阿2) ■、基因组DNA的提取结米 肿I卣性许旺细胞及血液壮园!f【DNA抽提后经 植酸蛋门丹析仪梭测娃示所提取细胞DNA符台要 求．纯度(A小瑚)在l8—20之删．浓度在100ng／¨L 左右，均符合DNA提取试剂盒要求．20g，L搓胶电 辣显币DNA无降解，丁一80℃冰箱像存．建立NF2 患者的基因组DNA库． 一 剑 A：《n*#％ni*3n∞*镕＆*Ⅱ自mfxl001B：≈《∞№m {me＆■**n*Ⅱ日№S-100自自∞《#(n001 目2《n*#∞*镕＆*Ⅱ目№＆$≈ №0}d砌6州∞Qr印⋯mbculled唧Ⅲ喊t＆hwe．ncells 三、PCR扩增序列凝胶电泳 根姑16个外显子及其邻近区域的目的基凼．进 行PCR扩增后，PCR扩增产物丁20g，L琼脂糖凝 腔巾20v电压电泳40min检测．R示18彖日的基 凼完替性较好(图3)．经DNA胶回收纯化后，A'F2 基因町以经DNA分析仪进行驭向测序。 bb 2000 i 2 3 45⋯9iolii2i，14i516J718M I一15：El—EIS{1“18：E17-l～E174MMmr 自3ⅣR*口I-15e17e*R十＆HqⅢn☆}∞月wF*t Ib*镕m Fi一^p”#斟el∞”qh⋯ofl6mplificd⋯∞d删搿m —orm目w 四、～门萆田测序结果 NF2甚园测序结果最示所有的基埘突变形式均 为邻近外显子j研控序列的点突变．第一组母女NF2 蕈晰测序比对结果显币：_l士亲与女儿有干H同的基因 突变位点，分剐俺fEl、ElS、E17外显早上F游。第 二组曙子N．P2纂暇测序比对结果盐示：母子有不完 全相同的基因突坐位点．母亲部证El、E2，E4、E15、 E17外冠子的区域存a点突变．而邻近E2外娃子的 调控序列未见儿了的突变位点。两个NF2家族基因 突变结果地袁1．部分测序结果见图4。 五、临床下预及随访 患者l采取的l临床干预：手术切除右侧桥小脑 角医的前庭神经许旺细胞癌及颈椎管内的许忏豇盯胞 增．尽力保明患者的有效听力及肢体感觉运动功能： 术巾还发现了患者舌咽神经许H主细胞瘾．手术一并 切除；对铡前庭神经许吒细胞癌建议半年后根据精 情接受医学处理。术后患者忠删有效听力保留．饿 复良好出院。患者2采取的临束干预于术七u除右 侧桥小脑角区的前庭神经许旺细胞I卣及颅内占位效 应l弭最的脑膜埔．对侧前庭神经许旺细胞憎建议、} 年后再临床十预．以保证患者的生活质量。 对上进NF2先证者在术后3个月及半年复瘴 万方数据 生竖盟堑堕量盈童垫且主立旦苎』堂j韭塑—些Ⅱ业地型∞虹堕!!Q丛，J!I10,No6 寰l 2mNF2§者Ⅱ其}女∞脚§目目序结％ Tab．1肝2genesequcncingofthc2lⅪticntswithneumfibmmatosistype“扎dthei-offsprings 除该病，建议其密切随访，20岁时行头颅厘神经轴 MRI检在： 卓9E■■l■t■__■■●■-■■-■■■■_哇8 ‘ 一 讨论 E ，啦'絮!!!!!_—'警 O A-*mm}日±**110＆*￡G“％!(t*4$F自女 JL)，B$=目e女E2F**15＆#§c—A女《{t☆4※F～ JLff*Ⅲ女女＆^M*4#mg女*女A1 目4Ⅻ目Ⅱ№Ⅲ2mmm女＆#f女∞ⅣR#日*{ n一～n口nereunion5inp“en(s”mD哪o∞删∞lstypell “thetr0却n”F 头部MRI增强榆查．以后每年对患者痛情评估t 次，包括神经病学、眼科检查、听力检测、内听道薄扫 CT艘头部MRI增强检查，若出现惟管肿瘤症状与 体征时行脊髓MRI稳查。对2制NF2先正者的子 女进行了全而系统的检查，并在随访中发现患者l 的女儿腋窝及腰部有多处皮肤牛奶咖啡斑，直径约 2cm．在对其进行头颅MRI基线检查中未发现附显 异常．结台基闲测序结果，考虑萁为该病的高危人 群．建泌其每年进行神经科、皮肤科和眼科检查． 10~20岁时每2年进行头部MRI检查1次，20qO 岁时每3年检查1次．脊髓MRI检查每3年1移：： 患者2的儿子进行身体全面检查时，未发现皮肤牛 奶咖啡斑及脊柱侧弯等该病的症状及体征，虽然母 子M2基因突变位点不完全一致．但是不能完仝排 目前NF2的诊断依据主要是患者的临床裘 现㈣。随着分子生物学与遗传学的发展，分子遗传诊 断可更多的应用于临床．为基因突变导致的家族性 遗传病提供诊断依据。其意义在于：可以发现家族 特异性的基田突变：确定这些家族成员是否为潜在 的NF2患者．及是否有必要接受临床监测；研究基 凶突业与临床表型之间的关系；及时给于高危人群 个体化临床干预等。 目前已有很多分干遗传检测方法用于检测NF2 致病性基因突变【lq．如单链构象多态性、Southern杂 交分析、异源双链分析、变性梯度凝腔电泳、温度梯 度凝胶电泳，错配的化学切割、等位基凼特异性寡棱 昔酸、等位革出特异性扩增、RNA酶A切割、多重 连接依糊性探引扩增及变性高技液相色漕技术[nl 等。日前应用t进基罔测序技术已经发现上百种的 NF2基因突变I”】。上述几种方法各有优缺点：单链构 象多态性技术对点突变有较高的检出宰，但它不能 检出所有的点突变尤其足那些位于内含子和启动 子区域的点突变．也不能检测一些大的缺先； Southem杂交分析技术町用于发现基因的部分或全 部删除．而不适合基因点突变的检测，对Southem 杂交分析束检测到的基斟突变仍需行DNA序列测 定分析：悭性高效液相色谱技术特别适台基田跨度 大．外显子较多的基固检测等。上述各种方法最终 还需要进行序列分析方能确定突变类型及突变位 点，若要从根本上了解M2的发病原因及预测患者 万方数据 ·568· 主堡煎墅匿堂盘查垫!!生鱼旦箜!Q鲞筮鱼塑g塾垫!堕塑翌里曼亟地曼至Q!!：yQ!：!鱼：盟Q：鱼 后代是否发病，还需要分子遗传分析技术发现NF2 术原则：尽可能切除肿瘤并保留一侧耳的有效听力， 基因突变的形式。该病的致病基因NF2基因在转录 避免双侧面瘫【峪阍，提高患者的生存质量。本组先手 翻译时由于交错拼接而产生2种Merlin蛋白同型术切除患者1右侧桥小脑角区的前庭神经许旺细胞 异构体，其中Merlinl型由外显子1～15和17编码，瘤、舌咽神经许旺细胞瘤及颈椎管内的许旺细胞瘤， 含有595个氨基酸；Merlin2型由外显子1～16编码。保留了右侧听力，为对侧前庭神经许旺细胞瘤手术 具有590个氨基酸。异构体l具有闭合与开放两种切除留下了余地；右侧残留的前庭神经许旺细胞瘤 形式存在，由于16号外显子的45bp处的终止子提 建议患者行立体定向放射治疗；对于腰骶部椎管内 前停止转录形成截断蛋白，这种剪接体包含了一个 的多发肿瘤占位，当患者出现症状时再考虑手术切 变异的C端，因此不具有分子内的相互作用，而只 除；对于背部的多发皮下结节，当出现增长速度快、 以开放的形式存在，没有生物学功能【B】。因此，本实 出血、疼痛及影响患者容貌时行手术切除。本组先 验NF2基因的测序范围是外显子1～15和17及其行手术切除患者2左侧桥小脑角区的前庭神经许旺 邻近的内含子区域。由于本研究所测的NF2基因外 细胞瘤及颅内较大的脑膜瘤．对侧前庭神经许旺细 显子及其邻近的调控序列数目不多，基因跨度不长， 胞瘤及其他脑膜瘤建议半年后根据病情再采取相应 进行NF2目的基因扩增后直接测序是较为理想的 的处理，由于左侧肿瘤较大，听力保留不全，但解除 基因检测手段。 了占位效应，缓解了症状，提高了患者的生存质量。 比对亲子NF2基因测序结果发现：第一组母女 对上述两个家族，我们对其制定了详尽的个体化随 存在完全相同的基因突变位点，均位于邻近E1、 访计划，每年进行全身系统的检查。以期对该病做到 E15、E17外显子的调控区，女儿作为该病的高危人早期发现，尽早给予个体化的临床干预。 群，需长期接受密切随访及临床监测，以期尽早发现 NF2严重影响着患者的生存质量．分子遗传分 NF2，给予其制定个体化的临床干预，提高其生活质 析技术可预测后代罹患风险，很好的指导该病的临 量；第二组母子基因突变位点不完全一致，邻近E1、 床工作，对患者制定个体化的病情监测、随访及临床 E2、E4、E15、E17外显子的调控区域存在位点共突干预，提高其生活质量。目前的治疗方法既不能阻 变，而邻近E2外显子的调控序列未见儿子的突变 止患者出现新生肿瘤，也不能阻止患者家族的发病。 位点，目前子代虽不能确定为该病的高危人群，但不 由于NF2涉及信号转导子的突变，通过药物封闭或 能完全排除该病发生的可能性，仍需要密切随访观 选择性的逆转这些异常激活的信号通路也是有效的 察。上述先证者的临床表现主要是双侧前庭神经许 治疗方法，向该病的靶器官及细胞转导野生型NF2 旺细胞瘤、多发脑膜瘤及椎管内多发许旺细胞瘤。 基因，通过该蛋白的再表达，期待可以抑制肿瘤性病 由于先证者的患病可能源于致病基因的新发突变且 变的发生及发展【m。从根本上预防和治疗NF2可能 是体细胞嵌合型，此时由外周血抽提的DNA中可 还要依赖于分子生物学和分子遗传学的发展。由于 能检测不到致病基因的种系突变，故同时对患者肿 该病为单基因突变致病．通过基因工程对发生种系 瘤组织原代培养获得的细胞及血液提取的基因组进 突变的生殖细胞或植入前胚胎细胞进行基因修饰。 行测序，基因测序结果相同排除了患者是体细胞嵌 恢复野生型基因的正常序列有望彻底阻断疾病在家 合体的可能性，更能确保分子遗传分析技术的准确 族中的传递。 性。 目前对于NF2临床干预的原则是对伴发的各 种肿瘤．尤其是影响到功能及容貌时应积极地进行 外科手术切除Baqs]。双侧前庭神经许旺细胞瘤是 NF2的治疗难点，对病灶直径<1cm且无神经功能 障碍者可行动态观察随访；对双侧听神经瘤大小相 当，先切除听力稍差侧的肿瘤；对双侧肿瘤大小相差 悬殊，一侧巨大占位压迫脑干，先切除受压严重侧的 肿瘤，尽快解除肿瘤占位效应；若首次术后听力保 留，对侧肿瘤可于术后6个月或1年再次行手术切 除；若术后听力丧失，对侧肿瘤可先观察或行立体定 向放疗或手术切除。双侧前庭神经许旺细胞瘤的手 参考 文献 [1】LouisDN，Stemmer-RachamimovAO．Neurofibromatosistype2 【A]／／KleihuesP，CaveneeWK,eds．Pathologyandgeneticsof tulrlorsofthenervoussystem[M]．LyonInternationalAgencyfor ResearchonCancer(IARC)Press，2000，8：219-222． 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bMn∞#”日Rf月十目mR#*女自女{，201I+11(I)：CurtopmNeⅢol。2003，t6(I)=2733 82-87 【lq*${，ⅫE．Rnim*t*＆*口镕☆＆∞№∞AE}m 州9 EvansDG．NH帅劬mm岫is2口jl—I一⋯啪№⋯sⅢtJl十目mf℃*＆&#*☆，2007，7(4)：336-342ceatml⋯6h删osBm脯wEhⅫn咖”帅cⅡ】P]-G口m【171*{{，*{m，‰$}m*☆#**Ⅻ％☆《。21*￡#＆ ivled．2009,11∞599-610 *#Ⅸ日*mⅢ”∞《目m十目mR#＆《☆女0，2007，7 [tO】TomiIaMooMM01州kgeneticdle口aosisoffamilialⅫ№B(4)：301·305 ⋯J IntJCLiB0nc。l，2004，q4)：246-256 (H#日期=201}蚰t5) 【lI)DeLu∞A，B峨inoA，Giar,mD，dnINFIg“⋯Lysisbased ($A镕#．{女婿) DIⅢ％C[JIHumM啪L20032l∞：171-172 《颅脑损伤彩色图谱》出版 ·读者·作者·编者· 作青姚青松 mⅨ#：r采科#{11Ⅸ# 出版年：2005-9 定价150Ⅱ ISBN7-5359-3887-6 内容简卉：本书幕目内第一$“目谱形式表#lj勺各娄女颅#扭伤的专业书全书共有彩色目"474％．目女并茂．*象直 观。脯损伤目§i标本日过水平切Ⅲ*#协Ⅲ冠状切面m察“E柱与镜检相结台的方式±Ⅲ解读头皮、骨、硬脯膜、蛛嘲膜及 脑寅质各部位∞各粪■损伤∞形悫学。B临床E师、病Ⅱ目师、挂EI作者{日与研究的。要参考书。 代镕《十目*Ⅸ}※{》编辑部．每奉100i。Ⅸ*电镕010-66269520；010—63495531；010—83901261 万方数据 Ⅱ型神经纤维瘤病分子遗传分析指导临床个体化诊疗的研究 作者： 王维， 杨学军， 王华民， 董雪涛， 李瑜， 明浩朗， 张斌， 于圣平， 任炳成， 陈聪 ， 刘彬， 刘志峰， WANG Wei， YANG Xue-jun， WANG Hua-min， DONG Xue-tao， LI Yu ， MING Hao-lang， ZHANG Bin， YU Sheng-ping， REN Bing-cheng， CHEN Chong， LIU Bin， LIU Zhi-feng 作者单位： 天津医科大学总医院神经外科,天津,300052 刊名： 中华神经医学杂志 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF NEUROMEDICINE 年，卷(期)： 2011,10(6) 本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_zhsjyxzz201106007.aspx