天然产物T12抗真菌作用及其机制研究

�� �� �� � �� � � �� �� �柳 � � � � � � � � � , � � � � � � � � � � �� �� � ��� � � �� �� �即� �� � 一�� � �� � �� � ��� � �� �� �� � � � �� ‘�� 艺� � , � � � � , � � �� � � �� � 一 �� � � � � � �� �肚� � � , �匕� �� � �� �� � ,肠 � � �� � , �� � � � � �� � � � � � ��� �� �� 卯 � � � � � �� �� 印��� � �� � � � ��� ��� 呀 � �� �� �� �� �� ��仁�」� 乃笋入妒入口 � � �� � � �侧理 , �� � � , �� � �� � � � � � 一 �� � � 〔� 〕 � � � � � � , ��� � � � � � � � �� � ��� ��� � � �� � �� ��� ����� �� � 运 � � � �呱�� � ���� � ���� � �� ��� � ��〕� � �� � � � � , �� � � , � �� � � � � � 一 � � � � � �〕 � �� � �� �� , ����� � � � , �� 二�� �, �� � � � � �� � �� � � � ���油 ��� �� � �� � �飞 �� � � ��� � �� �� ��� �� � � � �� �� ��� � � �〕� � 乃笋� ��� � � � � � �� � , � � � � , � ���� 二� � 一 � � � 【� 〕 宫泽辉 , 苏瑞斌 , 颜玲姊 , 等 � � ��� 年防复 吸研究 工作汇 报 【�〕� 中国药物依赖性杂志 , � � �� , � ��� � � � 一 � � �� 〕 匆阴� � �� � , � ��� � , ���� ��� � �飞 �� � � � �规认� �� 城���� � � � � ��� � � � �� �� �� � � �� �� �� � �� � � � � � � �� �� ��� � 栅��� � �� � � � �皿� � � � � �� 钾��� 盯 ��〕� 尸瓜 �� �� � �� � 撇 � � � , � � � � , � ��� � � � � � � � � � � � �� 」 � �� � � � , � � �� , � �� ! ∀# , et a z . L 一t yl) e Ca Z 十 c h an n el b lo e k e r s i n 瓦b it th e d e v el op m e n t b u t n o t th e ex p r esslo n o f se ns it流tion to morphi二 访 m iee [J ] .肠rJ 于叭a ~ col , 2 0 0 3 , 4 6 7 ( 1 一 3 ) : 1 4 5 一 1 5 0 . [ 9 J J a e k SO n H C , G r i f f i n U , N u t t DJ . B u p r e no 印坛n e一 e oc a i n e 谊terac - [1 0〕 [11] [12〕 〔13〕 【14〕 中国新药杂志 2004 年第 13 卷第 12 期 tions in 而ee:effe et on loc om otor ac tivity an d ho le- di pping be - havio ur[J」.J f场‘ r二 Ph a r , a co l , 1 9 9 3 , 4 5 ( 7 ) : 6 3 6 一 6 4 0 . SP a n a g el R M od 己a tion of dl ug 一 i n d u e e d s en si t i za t i o n p roc esses b y en d o g e no u s o p i o i d s 邓te m 〔J〕. B刁注口 v 刀ra in 尺es , 2 9 9 5 , 7 0 ( l ) : 3 7 一 4 9 . R Ob i nson T E .Be rr id g e K C . T h e n e u ral b a s is o f d r u g e ra vi 昭:An ineen tivo sen sitiza tion theo 叮 of addietion 〔J] .B ra ￡, Re : R ev , 1 9 9 3 , 1 8 ( 3 ) : 2 4 7 一 2 9 1 . R o w le tt J K , G i b so n l 、 R , 且汀d o M T . D is以犯 Iatio n of b uP reno r- p h in e-- in d u eed loc o rno to r se n sitiza to n an d eon d itio n ed p laee p re f - e ren ee in rats [ J」.Ph arm aco l B艺och em 玉触h a v , 1 9 9 4 , 4 9 ( 1 ) : 2 4 1 一 2 4 5 . S u lz e r D , C h en T K , L a u Y Y , e t a l . A r l l p h e t ~ n e re di s t r i b u t es do p a而ne fro m syna ptie ves ieles to the eyto so l and promo tes re- verse tra ns即rt 〔J〕.J Ne u rosc ￡ , 1 9 9 5 , 1 5 ( 5 P t Z ) : 4 1 0 2 一 4 1 0 8 . K in g G R , X i o n g Z , D o u g l as s S , e t a l 几。 n g 一t e rm b lOC k a d e o f t h e e x p r ess i on o f coc a in e s en si t助tion by ondan setro n , a s 一 H T 3 re - e e p t o r an t a g o ru s t〔J ].E ur J 段arm aco z , 2 0 0 0 , 3 9 4 ( l ) : 9 7 - 1 0 1 . ( 收稿 日期:2004 一 0 5 一 2 5 ) 天然产物 T 12 抗真菌作用及其机制研究 ‘ 张军东‘ , 陈海生2 , 曹永兵‘ ,徐 铮‘ , 高平辉 ‘ , 阎 澜‘ ,贾鑫明‘ , 姜远英1 (中国人民解放军第二 军医大学药学院 , 1 药理学教研室 ;2 植物化学教研 室 , 上海 20043 3) 〔摘要」 目的 :研究从刺羡幕(Tr 话ul u , te r res t ri : L . ) 分离的一 种皂普类化合物 T 12 的抗真菌作用及机制 。 方 法 :采用微量液基稀释法测定 T 12 体外 M l场。值 ;透射电镜观 察 T 12 对白色念珠菌超微结构的影 响 ;薄层色谱法 、 气质联用色谱法分别研究 T 12 对细胞膜麦角凿醇生物合成通路 的影响 。 结 果 :T 12 具有强的抗真菌活性 , 对 白色 念珠菌的体 外 M ICs 。值为 0 .87拜m 0 1 .L 一 ‘;透射电镜观察 , 可见 T 12 作用后 , 细胞膜多处破裂 , 细胞壁未见明显改变 ; T 12 对细袍膜麦 角凿醇生物合成通路有明显影响。 结论 :结构新型 、具有强抗菌 活性的 T 12 , 通过影响白色念珠菌 细胞膜麦角凿醇的生物合成发挥抗真菌作用 。 〔关键词 l 杭真菌剂;作用机制;刺羡攀;白色念珠菌 ;皂普类 [中圈分类号] R2 85 .5 ;R2 86 .85 [文献标识码〕A [文章编号 ] 100 3 一 3 7 3 4 ( 2 0 0 4 ) 1 2 一 1 2 1 0 一 0 5 T h e e x P e r i m e n t a l s t u d y o f T 1 2 o n a n t i fu n g a l a e t i v i t y a n d m e c h a n i s m Z H A N G J u n 一 d o n g , , e 甩N Hai一 s h e n 扩, C A O Y o n g 一b i n g , , x u z h e n g ‘ , G A O P i n g 一 h u i l , Y A N L a n l , J I A x i n 一 m i n g l , J I A N G Y u a n 一 y i n g l ( 1 De P a r t 饥en t of Ph a r, a eol。助, ; 2 De P a r t m e n r of Ph yt o c h e m 艺st砂 , Co l l罗 of Ph arma卿 , S e e o n d M i l i ta 砂 几及J iea l Un ive rs ity , Sh a n gh a i 2 0 0 4 3 3 , Ch i n a ) [ A b s t r ac t 〕 o bj ec tive:TO study ￡n v itro an tifu n g al ae tio n of T 1 2 ex tra ete d fro m Tr i西u lu : ter - res tri s L . , a n d i t s m e e h a n i s m a g a i n s t 反ndida albica ns.M ethod s:T he in vitro antifungal aetion of T 12 to fo ur elinica lfungim etfr叫ue ntly , w a s s t u d i e d w i t h m i e o b r o t h d i l u t io n a ss a y . T h e u l t r a s t r u e - , 基金项目:上海市科技发展基础研究基金(02 DJ 14016) ;上海市科技攻关基金 (02 D zl 91 2 0) 一 1110 一 中国新药杂志 2004 年第 13 卷第 12 期 tru e o f 山ndida albica ns treated by T 12 w as observed thro ugh tra nsm ission eleetro n m ieros co pe (T E M ).In addition , t h e i n h i b i t i o n o f n a t u r a l p ro d u e t T 1 2 t o e r g o s t e ro l b i o s y n t h e s i s i n e e l l m e m b ra n e w a s r e p o r t e d . R e s u l t s : T 1 2 d i s P l a y e d s t ron g a n t i f u n g a l a e t i v i t y t o 山nd泛d a a lb ica n : w ith a M ICs 。 va lu e o f 0 . 8 7 “m ol · L 一 1 . T h e r e s u l t s o f T E M i n d ie a t e d t h a t t h e e e l l m e m b r a n e o f 肠njija az占iea n s w a s d e - stro y e d b y T 1 2 .T 1 2 in h ib ited th e erg o stero l b io sy n th es is in ee ll m em b ra n e o f C a n d id a a lb iea n s , a n d a no v e l e o m p o n e n t g , 1 9 一 e y e l o l anos t a n 一 3 一0 1 w a s d e t e e t e d t h ro u g h G C ~ M S . C o n e l us i o n : T 1 2 h a v i n g d i f f e r - e n t e h e m i e al s t r u e t u r e f ro m o t h e r a n t i f u n g a l a g e n t s , h a s o b v i o u s a n t i f u n g a l a e t i v i t y , a n d e a n k i l l f u n g i t h r o u g h i n h i b i t i n g t h e e r 即stero lbiosynthesis in eellm em brane of fungi. [K ey w ordsJ antifungal;m eehani sm ;T ribulu: terres tri: L .;众nd艺da a l吞iea n : ; , a p o n i n s 在最近的 20 年 中 , 随着癌症放疗 、化疗和器官 移植患者人数的增加 , 免疫抑制剂和广谱抗生素 的 大量使用 , 以及艾滋病的广泛流行 , 深部真菌感染率 上升了 40 倍〔‘」, 尤其念珠 菌病的发病率 大幅度上 升 ,使抗真菌药物研究工作面临更 紧迫的局面 。 在 过去的近 10 0 年中 , 抗真菌药物研究取得 了一些成 绩 ,但是 ,在经历了近一个世纪的努力后 , 抗真菌药 物研究仍存在许多问题巫待解决 , 如抗菌谱窄 , 不良 反应 严 重 , 尤 其 临 床 检 出 了 大量 的耐 药 真 菌 菌 株 [“】, 因此各国科学家开始致力 于寻找新型 、高效 、 安全的抗真菌新药 。 从天然产物中寻找具有抗真菌活性的天然有效 成分 , 并进一步开发应用成为非常重要 的研究方 向 。 T 1 2 是从刺羡黎 (T ri bulu: terre stri: L .)中分离出 的一种新型抗真菌皂昔类化合物 , 本实验研究 了其 抗真菌作用及作用机制 。 和 1 试剂 、菌株和仪器 R P M I 1640 培养 液 , 沙堡 葡萄糖琼 脂培 养基 (SDA ) , Y E P D 培养液按文献「3] 配制 ;麦角街醇 、羊 毛街醇和角鳖烯对照品(Si gm a) , 分别用环己烷配成 0.25 m g · m L 一 ‘溶液 , 一 2 0 ℃ 保存 ;o .lm ol· L 一 ‘磷酸 盐缓冲液 (P B S , p H 二 7 . 4 ) ;皂化剂 :为新鲜配制的含 15 % N a0 H 的 90 % 乙醇溶液 ;衍生化试剂 1一三 甲基 甲硅烷咪哩 (T M S I , Al d r i e h 公司 );氟康哇 、酮康哩 、 特 比蔡芬由本院有机化学教研室提供 ;两性霉素 B (si gm a 产 品) , 均用 D M so 配成所需浓度 。 A T C C 株 :白色念珠菌(反ndi da al bi ca n:)A TCC7 6615、 新 生 隐 球 菌 ( Cry PtocOC cu : ne侧肠r- m a n : )A T C C 3 2 6 0 9 , 由长征医院菌种保存中心赠送 ; 热带 念 珠菌 (山ndi da tro Pica li: )、 近 平 滑念 珠 菌 (山nd ida Pa ra Ps ilos i:)由长海 医院真菌室提供 , 采 自长海医院临床样本 , 并经形态学和生化学鉴定 ;所 有实验用菌株均于沙堡葡萄糖琼脂培养基 (SD A )划 板活化 , 于 35 ℃ 培养 1 周 , 分别挑取单克 隆再次划 板活化 , 取第 2 次所得单克 隆置 SD A 斜面 , 用上述 方法培养后于 4℃保存备用 。 透射电镜 (日立 H 一 5 0 0 型 ) , He w l e t t 一 p a e k ar d 6 8 9 0 气 一质 联用 仪 (惠普 ) , 高 速冷 冻 离心 机 (H er - ae us) , M J X 型智能霉菌培养箱 (宁波江南仪器厂 ) , T H Z 一 8 2 A 台式恒 温振荡 器 (上 海跃进 医疗器 械 厂 ) , 51 1 型酶标仪 (上 海第三分析仪器 厂 ) , 紫 外分光光度计 (布鲁克公 司 , Ca ry 1 00 ) 。 2 受试物及分离 T 12 为羡 黎 科羡黎 属 植 物刺茨黎 (T ri bulus te rre st ri : L .)中提取的皂昔类化合物 , 系刺痰黎全 草粉碎后 , 先用 95 % 乙醇冷浸 3 次 , 将提取液 回收 溶剂得浸膏 I; 再将药材用 60 % 一 70 % 乙醇热 回流 提取 5 次 , 回收溶剂得浸膏 11 ;浸膏 I 、浸膏 n 分别 配成水悬液 , 先用石油醚脱叶绿素和油脂 , 再用氯仿 和水饱和的正丁醇萃取 , 后经大孔树脂 、正反向硅胶 层析 、薄层层析 、 H P L C 等步骤 分离得到 了 T 12 , 结 构为替告皂昔元 一3 一。 一日一 D 一毗喃木糖 (1 ~ 2) 一「p一 D - 毗喃木糖(1 ~ 3)] 一 p 一 D 一毗喃葡萄糖 (1 ~ 4) 一〔。一L 一毗 喃鼠李糖 (1 ~ 2 )] 一 p 一 D 一毗喃半乳糖昔[3] , 见图 1 , 用 D M SO 配成所需浓度 。 R 二 一 p 一企gal- Q一上 rh a 图 1 T 12 , _份p一企l u一 p 一企xyl xy l Fi g l 的化学结构 stru etur e of T 12 3 方法 一 1111 一 , v o l . 1 3 N o . 1 2 3 . 1 测定 T 12 的最低抑菌浓度 (M IC )值 微量液 基稀释法〔4J测定 M ICs 。值 。 实验前 , 用接种圈从 4℃ 保存的 SD A 培养基上 挑取 白色念珠菌不 同菌株少量 , 接种至 lm L Y E P D 培养液 , 于 35℃ , 2 5 0 r · m i n 一 ’振荡培养 , 活化 16h , 使 真菌 处 于 指 数 生 长 期 后 期 。 取 该 菌 液 至 lm L Y E P D 培养液中 , 用上述方 法再次活化 , 16 h 后 , 用 血细胞计数板计数 , 以 R P M I 1640 培养液调整菌液 浓度至 (l x 103一 5 x lo 3 )个 · m L 一 ’。 结果判定时 , 与对照孔 比 , 以吸收度值下降至对 照孔 80 % 以 上 的 最 低 浓 度孔 中 的药 物 浓 度 为 M ICs 。( 即真菌生 长 80 % 被抑 制 时的药 物 浓度 ) 。 M I Cs 。值高于最高浓 度 222拌m ol · L 一 ‘时 , 计为 “ > 2 2 2 拌m o l · L 一 ‘” ; M I CS 。值为最低浓度 0 .43拜m o l · L 一 ‘ 或在 最低 浓度 以下时 , 不作区别 , 均计为 “镇0 .43 拌m ol. L 一 ‘” 。 上 述 实 验 均 平 行 操作 2 一 3 次 , 当 M ICs 。值能准确重复或只差 1 个浓度梯度时才被接 受 , 并 以较高浓度作为 M l场。值〔’〕;当 M l场。值相差 2 个浓度梯度以上时 , 则需重新实验 , 直到符合要求 为止 。 3 . 2 透射 电镜观察 T 12 对 白色念珠菌超微结构 的 影响 [’] 10 0 m L 白色念珠菌细胞培养液与 T 12 共 培养 16 h 后 , 加戊二醛 , 使戊二 醛终浓度为 2 .5 % , 然后用 0 .45拼m 滤器过滤 , 滤液弃 去 , 以含有 2.5 % 戊二 醛 的 BB S 溶液 (0 .ogmo l · L 一 ‘K e l , 0 . o l m o l · L 一 ’醋酸镁 , 0 . 0 5 mo l · L 一 ‘磷酸缓冲液 , p H 6 . 2) 覆盖 白色念珠菌细胞 20m in , 随后重悬细胞 , 8 0 00 X g 离 心 Zm in , 连续 4 次 ;随后用 1% 饿 酸 固定 , 脱水 , 包 埋 ,切片 , 染色 , 日立 H 一 8 00 型透射电镜观察 。 3 . 3 薄层色谱法 (T L C )研究 T12 对真菌麦角留醇 生物合成的影响 色谱和扫描条件:展开剂 为环 己 烷一乙 酸乙醋(4 :1) , 蒸汽饱和 30 m in ,展开 scm ;显色 剂为 10 % 硫酸乙醇溶液喷雾 , 1 10 ℃显色 60 m in 。 取白色念珠菌 (A T CC 766 15) 接种于 SD A 斜面 , 3 5 ℃活化 1 周后再接种于 Y E P D 培养液 中 , 35 ℃ , 2 5 0 r · m in 一 ’振荡培养 16 h , 活化 2 次 , 使其处于指 数生长期后期 , 用 Y E P D 培 养液 调整真菌浓度 至 5 x 108 · m L 一 l , 取 菌液 Zm L 于 250m L 锥形 瓶 , 加 Y E P D 培养 液 98 m L , 不 同浓 度 D M SO 药 物溶液 10 0拜L , 使 反 应 液 中 D M SO 浓 度 不 超 过 0. 1 % 。 35 ℃ , 20 0 r · m in 一 ‘振荡培养 24 h 后用血细胞计数板 计数 。 2 0 0 0 丫 g 离心 sm in , P B s 洗涤 2 次至上清液 无色 ,去上清 , 称各菌湿重 。 精密称取湿菌约 0.59 , 加 PB S 2.sm L 和皂化剂 6m L , 混 匀 , 80 ℃水浴皂化 一 1112 一 中国新药杂志 2004 年第 13 卷第 12 期 6 0而n 。 加石油醚 (沸程 30 一60℃ )6n 1L 提取 3 次 , 合 并提取液 ,加水 61nL 洗涤 , 醚层于 60 ℃ 水浴挥干 , 得 未皂化脂(non‘a po nl f i a b l e h p此 ,邓此)[7] , 加环己烷使 溶液体积为 IlnL .g 一 ’湿菌 ,点板 , 展开 ,显色。 3 . 4 气质联用 (G c 一M S) 研究 T 12 对真菌麦角凿醇 生物合成的影响 色谱条件 二H P 5 0 ( 50 % 苯基 一50 % 甲基 聚硅氧烷 交联 柱 , 3 o m X 0 . 2 5 m m , 0 . 2 5 拌m ) 。 柱温 :程序升温 150 一 2 90 ℃ , 起 始 温度 150℃ , 按 巧℃ · mi n 一 ‘升至 290 ℃ 恒定 ;检测器温度 280 ℃ ;进 样口 温度 270 ℃ ;柱头压 35 kPa; 载气 :氦气 , 流速 lm L. m in 一 ‘;进样量 :0 .5拌L; 分流 比为 100 :1 。 利用 气 一质联用仪计算机 的 N B S 谱库自动检索各组分的 质谱数据 , 确定结构 。 将上述 (3 .3 项 )得到的未皂化脂环 己烷溶液各 取 200拜L 于 1.sm L 离心管 中 , 于氮气下吹干后 , 加 硅烷化试剂 T M SI 30产L 混 匀后置于 30 ℃保温箱中 反应 24h 后 , 用氮气吹去残余衍生化试剂 ,再精密加 人氯仿 100拌L , 充分混匀溶解 , 直接进样 0 .5产L , GC - M S 分析测定[“] 。 结 果 1 T iZ 的 M l场。值 科2具 有 强抗 真 菌活 性 , 对 白色 念珠 菌 体 外 M l蝙值为 0 .87 拼mo l.L 一 ‘;对新生隐球菌也有强的抗 真菌活性 , 体外 M l偏。值为 1.74 拜mol · L 一 ‘;对热带念 珠菌 、近平滑念珠菌未见抗菌活性 。 结果见 1。 表 1 T 12 对 4 种真 菌的 M l公。值 T ab 1 M IC :. value of T 12 aga ins t the dif众re n t fun g i tested 样 品 白色念珠菌 新生 隐球菌 热带念珠菌 拜n 10 1 · L 一 l 近平滑念珠菌 T 12 氟康哇 酮康哇 特比蔡酚 两性霉素 B 0.87 1.74 3.27 1.63 0 .12 0 .23 54 .98 13.74 0.54 0.27 > 222 .00 1.63 0 .23 109 .96 1.08 > 222.00 13.07 0 .47 54 .98 2.16 2 透射电镜观察 n Z 对白色念珠菌超微结构的影响 白色念珠菌对照菌的超微结构中 , 细胞膜 、细胞 壁光滑完整 , 核区清晰 ;氟康哇作用后细胞壁仍然完 整 , 但部分细胞膜皱缩 ;T 12 作用后细胞壁完整 , 但 细胞膜多处明显皱缩 。 3 T L C 研究 T 12 对真菌麦角留醇生物合成的影响 薄层展开图中 , 对照菌株的角鳖烯 、麦角街醇展 开点较大 , 羊毛街醇几乎未见 ;氟康哩作用后麦角街 醇含量减少 , 麦角 街醇生物合成通路的上游成 分羊 毛街醇 、角鳖烯含量积累 ;T 12 作用后麦角街醇含量 显著下降 , 羊毛街醇累积 , 特别在 Rf 二 0 . 87 位 置出 , VO I · 1 3 No · 1 2 现一个新 的展开点 , 结果提示 T 12 影响了麦角幽醇 的生物合成 。 4 G G M S 研究 n Z 对真菌麦角街醉生物合成的影响 白色念珠菌对照菌色谱图 中 , 麦角 菌醇含量较 多 ,羊毛街醇含量较少 , 见 图 2;T 12 色谱图见 图 3 , 麦角菌醇含量明显减少 , 羊毛菌醇含量增加 , 同时在 R t二 19 . 53 7 m in 处 出现一个新的展开点 , 经检索知 该化合物为 9 , 1 9 一 e y e l o l a no s t a n 一3 一0 1 , 结构式见图 4 , 未见文献报道该化合物出现在 白色念珠菌细胞膜成 分中 。 a :麦角幽醉 , b : 羊毛 幽醇 图 2 白色念珠菌气相色谱图 Fig 2 G C analysis of co ntrOI 山耐i由 alb ica ns }’尹 。:麦角街醇 , b: 羊毛菌醉 , 。 :9 , 1 9 一 c yc lo la ~ ~ 3 一 ol 图 3 T 12 作用后的白色念珠菌气相色谱图 Fi g 3 G C an alysis of 山nd 诬内 al bi ca ns trea ted 妙 T 12 图 4 9 , 1 9 一e y e lo l anos t a n 一 3 一 0 1 的化学结构 Fi g 4 C he 而cal st ruc tu re of g , 1 9 一c yc lol ~ st 阴 一 3 一 ol 中国新药杂志 20 04 年第 13 卷第 12 期 效 、低毒 的抗真菌新药仍然是摆在科学家面前的一 大难题 。 目前 , 从天然产物中寻找新的抗真菌药物已成 为重要的研究方向 , 皂昔类化合物在植物中存在广 泛 , 在临床上应用也较多 。 文献[’o 一 ‘3] 报 道很多皂 昔类化合物具有抗真菌作用 , 皂昔类化合物已成为 抗真菌天然产物研究 的一个方向 , 但目前仍未找到 作用理想的化合物 , 对其作用机制 的研究更少 。 从微量液基稀释法结果可知 , T 12 对临床最常 见的白色念珠菌具有很 强的抗菌作用 , M I Cs 。值为 0 .87 拌mo l · L 一 ‘;透射电镜结果提示 T 12 对 白色念珠 菌细胞膜有明显影响 ;T L C 和 G C 结果说明 T 12 主 要作用于白色念珠菌细胞膜麦角 幽醇合成通路 , 抑 制麦角街醇的生物合成 , 而麦角苗醇对于维持真菌 细胞膜的流动性和通透性有重要作用 , 同时在 T 12 作用下麦角街醇生物合成通路上游成分羊毛幽醇累 积 , 菌醇生物合成通路的反应也发生变化 , 产生一个 新的化合物 9 , 1 9 一 。y e l o l a no s t a n 一 3 一0 1 , 从而使真菌细 胞膜破坏 , 通透性增加 , 内容物外泄 , 发挥其抗真菌 作用 。 有意义的是 T 12 是皂昔类化合物 , 而现在研究 较多的抗真菌药是哇类 、烯丙胺类化合物 ,但由于临 床上对哇类 、烯丙胺类化合物耐药真菌的不断检 出 , 越来越多的科研和临床工作者意识到寻找具有新结 构类型的抗真菌药的重要性 , 我们研究的 T 12 与现 在所研究的抗真菌药有截然不同的化学结构 , 研究 结果提示应该继续研究这类化合物的抗真菌活性及 机制 , 为结构改造和进一步的化学合成奠定基础 , 以 期开发 出高效低毒 、适于临床的新药 , 解决困扰临床 的真菌耐药问题 。 [ 作者简介1 张军东(19 71 一 ) , 男 , 讲师 , 主要从事抗真菌药 物药理学研究 。 [ 通讯作者」 姜远英(1% 3 一 ) , 男 , 教授 , 博士 生导师 , 主要 从事化疗药物药理 学研 究 。 联系电话 :(0 21 )2 50 70 37 1 , D m ail : j ia n gy yc n @ ya h oo . ~ . cn 。 陈海生(1951 一 ) , 男 , 教授 , 博士 生 导师 , 主 要 从事植物化学研 究 。 联系 电话 :( 02 1 ) 2 50 70 387 , E 一 m a i l : hai s h en 罗@ ho tm ail.eom 。 讨 论 近年来 , 白色念珠 菌感染率急剧上升川 , 白色 念珠菌感染正 日益成为一种常见病 、多发病 , 并已成 为引起这类疾病患者死亡 的主要 原因[9] , 但临床可 选择的抗真菌药很少 , 且抗菌谱窄 , 不 良反应严重 , 特别临床检 出了大量耐药菌株 , 因此寻找广谱 、高 参 考 文 献 廖万清 , 吴绍熙 .真菌病研究进展【M ].上海 :第二军 医大学出 版社 , 1 9 9 8 . 1 1 一 1 2 . W hi te T C , M a rr K A . C l i n i cal , e e ll ul a r 声n d m o leeu la r fac tors th at co n tri b u te to an tifu ng al d rU g res istan ee〔J].Cl in Mi ero bio lR ev , 1 9 9 8 , 1 1 ( 2 ) : 3 8 2 一 4 0 2 . X u Y X , C h e n H S , L i a n g H Q , e t a l . T h ree ne w Sa P 0 n m s f r o m 一 1113 一 , V o l . 1 3 N o . 1 2 丁犷泛b u l , : te r re s t ri : [ J ] . 尸勿 , ta M 七d , 2 0 0 0 , 6 6 ( 6 ) : 5 4 5 一 5 5 0 . [ 4 ] P fal l er M A , G r an t C , M o rt hi an d V , 。t a l . Co m p ar a t iv e e v a lu a tio n o f al te rn a tiv e m et ho d s fo r b ro th d ilu tio n s u s e即tibility tes ti叱 of fi uco nazo le against 及 , d ￡da a lbica n s 〔J 〕.J Cl in 旅crob云〕l , 1 9 9 4 , 3 2 ( 2 ) : 5 0 6 一 5 1 1 . 【5] 曹永兵 , 姜远英 , 王宁 ,等 , 微量液基稀释法测定化合物特节康 噢的体外抗 真菌活性【J」.中国抗生 素杂志 , 加oo , 25 ( 3 ) : 1 8 3 一 1 8 7 . [ 6 〕 E de lstein E M , R o se nz w e i g M S , D a n , Moo re L, e t a l . u 垃t 。e ll h y po t h es is fo r S t理P tOC O‘c u s fa e ca l￡:〔J〕.J 及cre痴l, 1 9 5 0 , 1 4 3 ( l ) : 4 9 9 一 5 0 5 . 〔7〕 v er正at es w ar 】u K 江地1们jl lg D W , M 巨川i呢 NJ , 以 以 .(b 叫脚i图n of 印870 , a ~ t ri azo l e an t i fi 四刻 昭即t, to n uco 盆四】e for i址五h tion of Gz n d id 匕以灰伍二 c界仪肠旧m e R 45 0 场 此u艰 in 饭的 a女泊 y s 〔J」. An 蕊二泛‘叹泊八罗时‘以召刀幻忿丙君r , 1 9 9 6 , 4 0 ( 6 ) : 1 3 8 2 一 1 3 8 6 . 1 8 〕 G leispaeh H .T he use of diffe rent silyla ting 昭ents fo r 。t ru e tur e an 滋y sis o f ste roi d s [J」.J Ch ro ma tog r , 1 9 7 4 , 9 1 ( 4 ) : 4 0 7 一 4 1 2 . 中国新药杂志 2004 年第 13 卷第 12 期 [9〕 C hiou C C .N ew dr 吧s an d nov el target: for treatmen t of invas ive fungal infeetion。 in p at ien ts w it h can e e r〔J] , O n co 友吸￡st , 2 0 0 0 , 5 ( 2 ) : 1 2 0 一 1 3 5 . [ 1 0 」 L alitha T , ve n k a t aram a n L v . An t i fu n g al a e t i v i t y a n d n l od e o f ac t io n o f sa 因山n s fro m M d幽uca but, 叨cea M ac b [J ] . I nd 诬a 二 J 及户B 艺01 , 1 9 9 1 , 2 9 ( 6 ) : 5 5 8 一 5 6 2 . [ 1 1」 M ouli o T raffortJ , F a v e l A , E l ia s R , 。t a l . S tud y of th e ac t ion o f alP h 二 h ed e r in o n t h e ul tras t r u e tu r e o f 反刀己泛d 口 a lb ica n : [ J 〕. 人卜印义5 , 1 9 9 8 , 4 1 ( 9 一 1 0 ) : 4 1 1 一 4 1 6 . [ 1 2 〕 Po laehec k x , L e v y M , G o i e M , 。r a z . M od e o f a e t i on o f t h e an - t im y co t i c sg e n t GZ i so l a t e d f ro m al fal fa roo t s [ J ] .及ntra zbl压乏- ter 衍l , 1 9 9 1 , 2 7 5 ( 4 ) : 5 0 4 一 5 1 2 . [ 1 3 ] R e na ul t S , D e L u e e a 月 , E 匕u e s , et a z . C A Y 一 l , a n o v el a n t if u n g al e o m po u n d f ro m e sy e nn e p e p p er [ J ] . 加介己叼少。 z , 2 0 0 3 , 4 1 ( 1 ) : 7 5 一 8 1 . (收稿 日期:2004 一 0 7 一 2 0 ) 司氟沙星 C H L 细胞体外染色体畸变试验 刘 尚裕 , 宋坤改 ,林赴 田 , 郭惠元 (中国医学科学院 中国协和医科大学医药生物技术研究所 , 北京 100050) 〔摘要1 目的:检测 司 氟沙星 对 CH L 细胞染色体致畸变作 用 。 方 法 :用 体外方法检测 司氟沙星在23.63 一 189 .00 阳 · m L 一 ‘浓度范围内 , 代谢活化组 (含 场m ix) 及 非活化组 (不含 易m ix) CHL 细胞 的染色体畸变率 。 结果 :司 氟沙星的代谢 活化组 (含肠mi x) 及非活化组 (不含氏m ix) 的染色体畸变率均低于 5 % 。 结论 :司氟沙 星对 CH L 细胞 染色体畸变实验结果为阴性 。 〔关键词』 司氟沙星 ;中国仓鼠肺细胞;染色体畸变 [中图分类号〕R 965 .3 ;R 978 [文献标识码〕A [文章编号〕1003 一 3 7 3 4 ( 2 0 0 4 ) 1 2 一 1 1 1 4 一 0 3 E f f e e t s o f s P a r fl o x a c i n o n o f C H L C e l l C h r o m 0 S 0 m e a b e r r a t i o ll i n v i t ro L I U S h a n g 一 y u , S O N G K u n 一 g a i , L I N F u 一t i a n , G U O H u i 一 y u a n ( I n s t i t o t e of 几介d icin a l B iotech n ol雌协 l, Ch i n ese A c a d e m 夕 of 卉介d ica l S cien ces & 了飞爱in g Un 艺o n A 介d ica l 肠llege , B e ij i n g 1 0 0 0 5 0 , Ch i n a ) [ A b s t ra c t J O bj ec t i v e : T o a s s es s w h e t h e r s p a r f l o x a e i n e a u s es t h e C h ro m o so m e a b e r r a t i o n . M e t 卜 ods:A t th e eon een trations of 2 3 .63 一 15 9 . 0 0拌g · m L 一 1 , t h e m u t 眼enieity of spa川oxaein on e hinese ham ster lung 。e l l in t h e p r e s e n e e a n d a b s e n e e of t h e l ive r h o mo g e n a t e f r a e t i o n ( Sg m i x ) i n v i t ro w a s e - v al u a t e d . R e su l t s : S p ar fl o x a e i n a e h ie v e d a e h r o mo s o m e ab e r r a t i o n o f l e s s t h a n s % i n t h e p r e s e n e e a n d a b s e n e e o f 易m ix .C onclusion :Sparfloxaein h as not demo nstra ted effeets on 。h r o m os o m e a b e r r a t i o n . [ K e y w o 川s] sparflox aein ;ehinese h am ster lun g eell;ehrom oso m e aberr ation 司氟沙星 (sP 耐lo xac in , S P L X ) 化学名为 5一氨 基 一1 一环丙基 一6 , 8 一二 氟一 1 , 4 一二 氢一7 一 ( 顺一 3 , 5 一二 甲基 呢嗓基一 1) 一 4 一氧哇琳一 3 一竣酸〔‘〕, 是新 唆诺酮类合成 抗生素 。 本药抗菌谱广 , 抗菌活性强 , 对 G + , G 一 及 一 1114 一 厌氧菌均有很强的抗菌作用 , 对现有新喳诺酮类药 物作用弱的肺炎链球菌 、支原体 、衣原体 、军团菌 、结 核杆菌及非典型抗酸菌等也显示 出强大 的抗 菌活 性[2j ;其消化道 吸收及 组织分布 良好 , 消 除半衰期