网织红细胞检测技术的进展及临床应用现状

医学理论与实践 2009年第 22卷第 7期 J Med Theor＆ Prac Vo1．22，No．7，Jul 2009 ·综述与讲座· 网织红细胞检测技术的进展及临床应用现状 王文静 天津宝坻人民医院检验科 301800 关键词 网织红细胞 检测技术 进展及应用 中图分类号：R541．4 文献标识码：A 文章编号：1001—7585(2009)07-0784—03 网织红细胞(reticulocyte Ret)是未完全成熟的 红细胞，是晚幼红细胞脱核后到完全成熟之间的过 渡细胞，由于其胞浆内尚存在有嗜碱性的 RNA物 质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后呈浅蓝或深 蓝色的网状结构，因此得名为网织红细胞(Ret)E¨。 网织红细胞是反映骨髓造血功能的指标之_，国内 外学者在贫血[2]、放化疗方面早有研究。Ret作为 评价骨髓造血功能和 RBC生成活力的重要指标，随 着其计数的不断改进，临床应用价值越来越高。 1 网织红细胞测定技术的进展 目前检测网织红细胞的方法有传统的手工显微 镜计数法、专用网织红细胞计数仪、流式细胞仪、带 有网织红细胞计数的多参数全自动血细胞仪等 方法。手工显微镜计数法一般使用 2 煌焦油兰蓝 染色液，用普通光学显微镜计数 1 000个红细胞中 的网织红细胞，以百分比示，但计数误差较大，正 常参考范围内的网织红细胞计数精密度 (CV)在 2O ～25 的范围，ICSH 推荐的新亚甲蓝染色 Miller窥盘法计数 Ret，被认为是一种较为准确的 手工计数法，其重复性优于普通镜检法。 近年来全自动血细胞分析仪、流式细胞术定量 分析等自动化分析仪器为网织红细胞计数提供了先 进的检测手段和更多的相关参数。运用全自动流式 血细胞分析仪测定网织红细胞 ，可获得网织红细胞 百分比(RET )、网织红细胞绝对数(RET#)、低 荧光强度网织红细胞百分比率(U、R)、中荧光强度 网织红细胞百分比率(MFR)、高荧光强度网织红细 胞百分比率 (HFR)等一系列参数 (根据红细胞 RNA的存在量将细胞的成熟度分为3级)[3]。大量 试验：运用全自动血细胞分析仪检测网织红细 胞及其荧光强度的变化，既可作为某些贫血鉴别诊 断的初筛指标，同时也是判断骨髓造血系统抑制和 恢复较敏感的指标_4]。准确快速检测Ret技术的出 现，推动了Ret计数的临床应用研究。 2 网织红细胞参数的临床应用 网织红细胞的增加或减少直接反映了骨髓红细 胞的生成能力，主要用于对红细胞减少性疾病、溶血 性贫血治疗监测或骨髓移植后骨髓造血功能的恢 复、监测放疗和化疗对骨髓造血功能的影响评估等 方面。 2．1 贫血的诊断、鉴别诊断以及疗效观察 门剑 龙[5]采用 Sysmex SE-2100型血液分析仪测定 67例 自身免疫性溶血性贫血(autoimmune hemolytic a— nemia，AIHA)患者 的 Ret百分 比(Ret )、LFR、 MFR、HFR以及未成熟 Ret指数 (IRF)[IRF一 (MFR+HFR)／(MFR+HFR+LFR)]，结果显 示，AIHA患者外周血 IFR的水平发生显著变化(P <0．01)，早于 WBC和 PLT，与病程发展密切相关， 比Coombs实验更具特异性，也有较高的敏感性。 MarkovicE ]等研究发现，在诊断缺铁性贫血方面 CHr与 MCV及铁蛋白相比有更高的敏感性、特异 性。KrafftE ]等研究 64例铁缺乏孕妇，认为CHr由 于不受炎症反应的影响，有助于孕妇分娩前后铁缺 乏的诊断。Thomasc8]等研究了44例不同原因引起 的贫血以及 154例非贫血患者，发现有急性期反应 的患者，传统指标诊断铁缺乏的价值很低，而 CHr 可以不受急性期反应的影响，准确地反映铁缺乏状 态。CHr也早于其他传统指标反映血液透析患者 用红细胞生成素(rHuEpo)治疗后的铁代谢状态I9]。 吴卫等Do]研究显示 CHr有利于临床早期诊断铁缺 乏，对于成年女性铁缺乏症，尤其是尚未发生贫血、 容易漏诊的单纯缺铁的诊断明显优于TS(转铁蛋白 饱和度)、Hb、MCV。f-I剑龙[11]采用 SysmexXE- 2100型血液分析仪对 52例慢性病贫血(ACD)患者 和 52例缺铁性贫血 (IDA)患者 的 Ret 、LFR、 MFR、HFR、IFR进行测量，结果显示，ACD患者 Ret 水平可以正常或者减低，IRF未发生明显改 变；而 IDA患者无论 Ret 正常还是增高，IRF水 平均明显增高(P<0．01)。采用 IRF鉴别 ACD与 其他贫血有一定参考价值。梁陶等l12]对 38例肝硬 医学理论与实践 2009年第 22卷第7期 J Med Theor& Prac Vo1．22，No．7，Jul 2009 化患者研究发现，肝硬化患者发生贫血导致网织红 细胞参数 RET ，RETg，IRF，HLR 与 HLR# 的值升高，与正常人网织红细胞参数比有显著性差 别。而且随着肝硬化病情的逐渐加重，网织红细胞 参数的改变也更加明显，代偿红系增长也进一步活 跃 。 2．2 骨髓移植后造血功能的监测 造血干细胞移 植是通过大剂量化疗、放疗摧毁患者造血功能，再输 入造血干祖细胞，最终实现造血重建和免疫重建。 骨髓重度抑制后造血重建的观察方法包括绝对中性 粒细胞计数(ANC)、PLT和异基因造血干细胞移植 中的分子技术检测嵌合体的形成等。传统的指标有 ANC、PLT，但血小板在此时是不可靠的，因为大部 分患者需要输注血小板。ANC的缺陷在于患者临 床或亚临床感染时能够引起 ANC受抑，ANC下降 可能导致医生误认为移植尚未成功[1引。国外相关 文献报道，重度骨髓抑制后的造血恢复开始于红细 胞系统[】 ，红细胞植入早于粒系统重建，未成熟网 织红细胞指数是适宜的红细胞再生的指标，是骨髓 重度抑制后的造血恢复的较敏感指标E19,16]。国内 黄再捷等[1 ]也有用未成熟网织红细胞指数监测恶 性肿瘤患者放化疗后骨髓功能恢复的报道。黄 嫒[1。]等对 25例患者研究资料表明中 IRF恢复的天 数比ANC恢复天数早 3d，比RET恢复天数早 4d。 有 75 的患者 IRF是最早 的造血恢复指标。在 BMT(骨髓造血干细胞移植)组和 PBSCT(外周血 造血干细胞移植)组 IRF都是 ANC(绝对中性粒细 胞计数)、IRF(未成熟网织红细胞指数)和 RET(网 织红细胞绝对数)三项指标中最早的造血功能恢复 指标，同时也是大剂量放化疗后造血功能受抑制的 最早指标。 2．3 放、化疗过程中骨髓功能的监测 在目前的肿 瘤化疗治疗中，监测骨髓造血功能状况的主要是检 测外周血细胞 WBC及 PLT数。但临床实践发现： (1)白细胞数易受感染、应激等因素的影响；(2)当白 细胞或血小板数下降时，骨髓已明显受抑，已错过了 采取有效治疗措施来应对骨髓造血低下的最佳时 机E183。本实验也显示在化疗结束第 2天 WBC结果 发现，肿瘤患者化疗后网织红细胞计数降低比白细 胞计数降低大约早 7d。因此网织红细胞计数较敏 感，可作为早期评价肿瘤患者化疗过程中骨髓造血 状态的一个指标。寻求一种更为灵敏、方便的检测 指标监测肿瘤患者化疗后骨髓状况，具有重要的临 床价值。王梅等Dg]研究发现，与化疗前比较，化疗 结束第 7天、LFR、WBC及 MFR+HFR均有不同 程度的下降，但只有 HFR+MFR有显著性差异(P