根系活力的测定

植物根系活力的测定  TTC法 一、测定原理 氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原物质，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲腙 （TTF）。 生成的TTF比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化。 二、材料、设备仪器及试剂 （一）材料：水培或砂培小麦、玉米等植物根系。 （二）仪器设备：1. 分光光度计；2. 分析天平（感量0.1mg）；3. 电子顶载天平（感量0.1g）；4. 温箱；5. 研钵；6. 三角瓶50ml；7. 漏斗；8. 量筒100ml；9. 吸量管10ml；10. 刻度试管10ml；11. 试管架；12. 容量瓶10ml；13. 药勺；14. 石英砂适量；15. 烧杯10ml、1000ml。 （三）试剂：1. 乙酸乙酯（分析纯）。2. 次硫酸钠（Na2S2O4），分析纯，粉末。3.1％TTC溶液　准确称取TTC1.0g，溶于少量水中。定容到100ml。用时稀释至各需要的浓度。4. 磷酸缓冲液（1／15mol/L，pH7）。5. 1mol/L硫酸　用量筒取比重1.84的浓硫酸55ml，边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000ml。6. 0.4mol/L琥珀酸　称取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100ml即成。 三、测定步骤 2.1 制作TTC标准曲线 分别吸取0.25ml、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml TTC加入5个10ml容量瓶中，加入少许Na2S2O4，用乙酸乙酯定容，则瓶中TTC的含量分别为25μg、50μg、100μg、150μg、200μg，用乙酸乙酯作参比，测定485nm下的光密度值，绘制标准曲线。 2.2 根系活力测定 称取0.5g根尖样品，充分浸没于0.4％TTC和磷酸缓冲液的等量混合液10ml溶液中，37℃下暗保温1～3h，加入1mol/L硫酸2ml。 与此同时做一空白实验，先加硫酸，再加根样品，其他操作同上。 取出根吸干水分后，与3～4ml乙酸乙酯和少量石英砂在研钵内磨碎，将红色提取液移入试管且用乙酸乙酯定容到10ml，用空白试验作参比测在485nm下测定吸光度值，查标准曲线，求四氮唑还原量。 实验结果及其计算方法 四氮唑还原强度（mg/g(根鲜重)/h）=四氮唑还原量（mg）/ [根重（g）× 时间(h)]。