血库表面抗原测定SOP6

宁波市北仑区 柴桥医院血库 操作程序 文件名 乙肝表面抗原测定 文件编号 CQXK-006 版本号 2006版 1. 适用仪器：ELX-800型酶标仪 2. 方法原理：采用单克隆抗HBs包被反应板，加入待测标本，同时加入多克隆抗HBs-HRP，当标本中存在HBsAg时，该HBsAg先包被的单克隆抗HBs结合再与多克隆抗HBs-HRP结合，形成固相单克隆抗体-抗原-表记多克隆抗体复合物，加入底物产生显色反应，若标本中无乙肝表面抗原则经洗涤后无显色反应。 3. 试剂来源及组成：试剂由上海科华公司产生，有三证；质控品由卫生部临检中心生产。 4. 操作步骤：每孔加入50ul标本,前三孔分别设空白，阴性，阳性对照，空白孔不加，阴阳性对照孔各加入阴性及阳性对照液50ul，从第四孔起各加入待测样本或质控品→每孔加入酶结合物1滴充分混匀（空白孔不加，混匀亦可用微量振荡器混匀）放入有盖合子中放于37度水浴箱中孵育30分钟→用洗板机洗板5次（或用手工洗板5次）→洗完后在卫生纸上拍干→每孔加入显色剂A 1滴后再加显色剂B 1滴混匀→放入合子中再在37度水浴箱中孵育15分钟→每孔加入终止液1滴后混匀→用酶标仪测定（取波长450nm读取各孔的吸光度值）。 5. 结果判断：样品OD值/阴性对照OD值大于或等于2.1则判为阳性，否则为阴性。阴性对照OD值低于0.05作0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。 6. 注意事项： 1．判断结果须与肉眼判断结合起来，否则易引起假阴性或假阳性。对低值阳性标本应作双份标本再复检。 2．从冰箱取出试剂合后应恢复室温后再操作。 3．结果判断须在加终止液10分钟内完成。 4．不同批号试剂不能混用。 7. 参考范围：正常人阴性 8. 临床意义：表面抗原在乙肝感染早期出现于患者血特循环中，可持续数月、数年甚至终生。是诊断乙肝感染最常用的指标，但在乙肝感染的窗口期表面抗原可以阴性，而核心抗体等其它HBV血清标志物则可阳性。 9. 引用文件：《上海科华公司乙肝表面抗原酶联免疫法试剂使用说明书》、《ELX-800型全自动酶标仪定性操作程序》、《MULTIWASH全自动洗板机操作程序》 编写人 审核人 批准人 生效日期 李永新 史苗年 史苗年 2006年6月1日