传染病诊断标准及处理原则（国标）动物鼠疫监测标准GB 16882

动物鼠疫监测标准GB 16882—1997 　 ^~`前 言 鼠疫是典型的自然疫源性疾病。至1995年底，已判定的自然疫源地分布于我国17省(区)234个县(市、旗)。为贯彻执行《中华人民共和国传染病防治法》，通过对鼠疫动物病的监测，掌握疫情动态，考核控制效果，为疫情预测预报及制定防治对策提供科学依据，特制定本标准。 本标准在研制过程中，充分运用了我国在鼠疫监测方面的理论研究成果和现场实践经验，使其在有关章节中得到达。 本标准由中华人民共和国卫生部提出。 本标准负责起草单位：全国鼠疫布氏菌病防治基地；参加起草单位：内蒙古自治区流行病防治研究所、青海省地方病防治研究所、云南省流行病防治研究所。 本标准起草人：李宝、刘纪有、李铁华、李超、马永康。 本标准由卫生部委托技术归口单位中国预防科学院负责解释。 1 范围 本标准了我国各类鼠疫疫源地主要宿主、媒介、病原体及血清学各项监测标准，监测的质量控制及其技术方法。 本标准适用于喜马拉雅旱獭、灰旱獭、长尾旱獭、蒙古旱獭，达乌尔黄鼠、阿拉善黄鼠、长尾黄鼠，长爪沙鼠，布氏田鼠，大绒鼠及家鼠(黄胸鼠)鼠疫疫源地的监测。监测以县(市、旗)为单位。 2 引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 GB 15978—1995 人间鼠疫疫区处理标准及原则 GB 15991—1995 鼠疫诊断标准 3 定义 本标准采用下列定义。 3.1 鼠疫自然疫源地：在动物鼠疫流行过程中，鼠疫菌寄生于特定的宿主，主要通过媒介蚤在宿主和其他动物间传播，不依赖于人类，长期在自然界循环延续，并能酿成人间鼠疫流行，这种现象称之鼠疫自然疫源性。有自然疫源性的地方称为鼠疫自然疫源地。 3.2 动物鼠疫监测：在鼠疫疫源地内定期定量地监测动物鼠疫流行动态，观察宿主动物及媒介昆虫生态，研究动物鼠疫感染、传播、保存规律及地理分布特征。 3.3 主要宿主：能保证鼠疫菌在特定的生态系中长期延续的物种。 3.4 疫区：鼠疫在人群或动物间发生或流行的地区。 3.5 疫点：发生人或动物鼠疫的局部地区。 3.6 疫鼠：自然感染并从其体内分离出鼠疫菌的啮齿动物称为疫鼠。 3.7 聚集性：动物鼠疫在时间、空间或同时在时间与空间上成簇出现。 3.8 最适生境：最适合宿主动物栖息生存的自然环境。 3.9 流动监测点：监测范围不小于2500ha，主要开展自死鼠检菌及血清流行病学监测，并重点掌握主要宿主及媒介昆虫数量，监测时间一般为20天。 3.10 固定监测点：监测范围为10000ha，对地理生境的变化、宿主动物、媒介昆虫的数量及鼠疫菌进行长期的系统的观察，掌握动态，研究鼠疫动物病流行及保存规律。每点监测时间为3～5年。 4 动物鼠疫监测标准 4.1 黄鼠(含达乌尔、阿拉善、长尾黄鼠，下同)疫源地监测时间4～9月；流动监测点范围2500ha，固定监测点范围10000ha；以地貌、植被、黄鼠数量三项指标划分生境，绘制1∶10000比例尺生境分布图。按各类生境面积0.5％比例分层抽样，4月与7月以，日一公顷弓形夹法各监测一次黄鼠数量；体蚤抽样每旬至少检活黄鼠体20只；动物检菌固定点检300～500只，蚤类检菌90组以上；血清学检测血清占预测鼠数不少于8％。 4.2 旱獭(含喜马拉雅、灰、长尾、蒙古早獭，下同)疫源地 监测时间4～10月初；流动点5000ha，固定点22500ha；以地貌、植被、旱獭数量三项指标划分地理生境，并绘制1∶10000比例尺生境图。按各类生境面积0.5％比例分层抽样监测旱獭数量。流动监测点用路线法：选有代表性的路线5条，每条路线长5km，视野宽50m，步行每小时3km，骑马每小时5km，以路线长度乘视野宽度求调查面积，最后计算出一公顷旱獭密度，每月或5、7月各调查一次。旱獭体蚤抽样每旬至少梳检旱獭30只；早獭检菌以病、死獭为主，旱獭密度在0.1只/ha，抽检旱獭数量的10％，密度在0.2只/ha以上抽检早獭数量的5％；蚤类检菌不少于250组，血清学检测以自然村牧点为基础，牧区抽犬血清的5％，农区抽犬血清的20％。 蒙古旱獭疫源地主要以旱獭数量及血清学监测为重点。 4.3 长爪沙鼠疫源地 监测时间：4～5月，10～11月。流动监测点2500ha，固定监测点10000ha，以地貌、植被、土壤、长爪沙鼠数量4项指标划分生境，绘制1：10000比例尺地形图。流动点按0.5％比例，固定点按0.2％～0.5％比例分层抽样，以一公顷为单元昼夜弓形夹法调查长爪沙鼠数量。体蚤抽样每点每旬至少检活体20只，全年100只以上；宿主检菌重点寻找自死鼠。捕获鼠检菌全年每点不少于500只，所获蚤类全部检菌；每点检测鼠类血清200～500份。 4.4 布氏田鼠疫源地 监测时间：4～5月，8～9月。监测范围不少于10000ha，检索控制范围100000ha。生境划分参照长爪沙土鼠。按各类生境面积0.2％比例分层抽样，以一日一公顷布夹法监测布氏田鼠数量。体蚤抽样每点梳检布氏田鼠100只；宿主检菌应以寻找自死鼠为主，每点全年检验鼠类300只以上，所获蚤全部检菌；每点检测布氏田鼠血清100份以上。 4.5 大绒鼠疫源地 监测时间：1～12月，以3～8月、12月为重点。固定、流动监测点范围2000ha，以县为单位每年搞固定点一个，流动点2～4个。宿主数量监测固定点每月抽样一次，流动点每季抽样一次，每次用笼夜法布放鼠笼100个，连下三夜，计算扑获率。体蚤抽样每种生境抽取大绒鼠、齐氏姬鼠20只以上；宿主检菌每个固定点全年不少于500只，全年蚤类检菌100组以上；注意搜集疫源地猎、牧狗血清和野生动物(狐、獾、鼬类等)血清，检测各种鼠类和指示动物血清150份以上。 4.6 家鼠(黄胸鼠)疫源地 监测时间：1～12月。广东3～5月，福建4～10月，滇西5～9月为重点。固定点监测范围2000ha，流动点监测范围500～1000ha，在此范围内固定点选100～200户村屯(寨)，流动点选50～100户村屯(寨)进行监测。每县搞一个固定点、2～4个流动点；家栖鼠类调查每月选代表性房间100间，每间布放鼠夹(笼)一个，连下三天；野外夜行鼠以5m夹线法布夹100个，连下二夜，分别计算室内及室外捕获率。体蚤抽样每月扑活家鼠(黄胸鼠)20只；固定点动物检菌300～500只，蚤检菌不少于100组；血清学每月检测血清50～100份，全年500～1000份。 附录A (标准的附录) 主要宿主动物密度调查方法 A1 黄鼠密度调查方法 A1.1 调查时间：每年4月和7月分别进行两次调查。 A1.2 抽样方法：按监测区各生境面积0.5％比例分层抽取样方，样方间距大于200m。 A1.3 样方测量：每一样方以一公顷为单位(100m×100m)，四角做出标志。 A1.4 查洞：在样方内5m间距查洞，发现洞后作好标记。 A1.5 布夹：在黄鼠日出洞前，用坑式布夹法，在布夹时间内每2h巡视一次。 A1.6 计算：按式(A1)计算。 A2 旱獭密度调查方法 A2.1 调查时间：每年5月和7月各调查一次。 A2.2 抽样方法：按监测区各生境面积0.5％比例分层抽取样地与路线。 A2.3 调查方法： A2.3.1 目测法 在监测区内选择有代表性的生境样地5～10个，每个样地5～10ha。首先在样地周围作好标志，确定样地范围，选择距样地100～200m处，借地理屏障或掩体做掩护，在旱獭日活动频繁时间，用望远镜观察样地内的旱獭数，连续观察2天，每天2次。以一次的最高值计算密度。 A2.3.2 路线法 在监测区内，选择有代表性的监测路线5～10条，每条线10ha。路线视野宽度50～100m，路线距离按步行3km/h，骑马5km/h。 A3 长爪沙鼠和布氏田鼠密度调查 A3.1 调查时间：长爪沙鼠和布氏田鼠在春秋两季各监测一次。 A3.2 抽样面积：在监测区内按生境面积0.5％比例分层抽样，样方以1ha(100m×100m)为单元。 A3.3 样方测量与查洞：同黄鼠(A1.3，A1.4)。 A3.4 布夹查洞时发现的鼠洞，全部堵塞，翌日早7～8时，对盗开的洞口，每个洞口布夹一盘，布夹时间为24h。白天每2h巡视一次，黄昏与拂晓各巡视一次，巡视时取下扑到的鼠并将鼠夹在原洞口重新布夹，连续扑打。 A3.5 鼠密度：按式(A4)计算。 A4 野外夜行鼠密度调查 A4.1 调查的夹(笼)次数：以月为单位，选择有代表性的1～3种生境，每种生境布夹(笼)100盘(个)/次，其中大绒鼠疫源地每次连续布放3天，家鼠疫源地连续布放2天。 A4.2 扑鼠工具：夹(笼)型号要统一。 A4.3 诱饵：板夹统一用白面(植物食用油)油饼，鼠笼用油条或红薯，每块3～5mg。 A4.4 布放方法：采用5m夹(笼)线法布放，夹(笼)行间距要超过200m，夹嘴和笼口方向要一致。 A4.5 布放时间：日落后布夹，日出前收回，在布夹和笼的时间内遇到风雨大，不能计算扑获率。 A4.6 扑获率：按式(A5)计算。 A5 家栖鼠类密度调查 A5.1 调查数量：在监测区内，每月选择一个有代表性的村(寨)，在村(寨)选择100间房子(包括仓房)，每间房子布放夹(笼)一盘(个)。 A5.2 扑鼠工具：同野外夜行鼠。 A5.3 诱饵：同野外夜行鼠。 A5.4 布放时间及方法：连续布放48～72h/次，每天早晚各巡视一次，取下扑获鼠，更换诱饵。 A5.5 扑获率：按式(A6)计算。 附录B (标准的附录) 鼠体蚤指数调查方法 B1 调查数量 各类鼠疫自然疫源地在监测期间内，每旬随机抽取20只活体主要宿主动物进行检蚤。 B2 调查方法 扑获的活体主要宿主动物，单只装袋，在检蚤室用乙醚麻醉后，用篦子或毛刷梳蚤，获得蚤进行鉴定分类，以同一宿主，同一方向，同一种类分组送检。 B3 计算 附录C (标准的附录) 间接血凝试验方法 C1 操作方法 将小试管排列在试管架上，标明管号，向第一管加入0.9mL稀释剂，以后每管各加0.5mL。取被检血清0.1mL，加入第一管中，混匀后行倍比稀释，最后一管取0.5mL弃去。再用1mL刻度吸管，向各管滴加2.5％F(下标始)1(下标终)抗原致敏血球一滴(0.05mL)，振荡混匀血球，置37℃温箱或室温2～3h观察结果，疑似做6管，每批试验应投稀释剂0.5mL＋2.5％F(下标始)1(下标终)抗原致敏血球一滴作对照。 C2 结果判定 红血球在管底呈不均匀分布，边缘呈翻伞状或不整齐的粗糙型，为阳性结果。阳性结果又按红血球在管底部分及边缘粗糙程度划分为： C2.1 ＋＋＋＋：凝集紧密，凝集物布满管底，有明显的折边，当抗体过量时，则凝集成疏散的花团状。 C2.2 ＋＋＋：凝集比较紧密，凝集物布满管底，呈圆盘状无折边出现。 C2.3 ＋＋：血球不完全凝集，管底呈整齐的圆圈，圈内外均有明显的血球凝集。 C2.4 ＋：不凝集的血球较多，沉于管底，呈现整齐的圆圈，圈外有很少的凝集血球。 C2.5 －：血球不凝集，沉于管底，呈整齐的圆圈。 试管法以“＋＋”为间接血凝试验阳性界限。 红血球在管底呈致密的纽扣状，边缘光滑整齐，或呈现一个狭小的圆圈，为阴性结果。 附录D (标准的附录) 鼠疫间接血凝试验质控标准 D1 检验材料标准 所用玻璃器材清洗干燥灭菌，量器标定合格，诊断用F(下标始)1(下标终)抗原，F(下标始)1(下标终)致敏血球、稀释剂(pH6.9～7.1)，离子浓度0.15mol/L NaCl和鼠疫诊断血清等统一方法制备，质量检定合格，于4℃保存。 D2 血清样本的采集和保存标准 采血及分离血清注意无菌，防止溶血及污染，血清不少于0.5mL，初筛试验被试血清可不灭活和吸收，血清应尽快用于试验，不能立即检验时需加叠氮化钠或硫柳汞(最终浓度前者0.1％，后者0.01％)或冷冻保存，但不能超过半个月。 D3 质控血清(内控样)的制备标准 以微量注射器取10μL鼠疫诊断血清加入9.9mL同源的正常血清，充分混匀，然后以微量注射器准确取其100μL，各分注于安瓿中，深冻或冷冻真空干燥保存。 D4 质控血清“真值”测定标准 将质控血清安瓿中加入1mL稀释剂混匀，取其0.5mL放入第二管中连续倍比稀释，安瓿中全量放人第一管中，视为1∶10，振荡混匀后，以1mL吸管逐管加入2.5％F(下标始)1(下标终)血球1滴，混匀于室温2～3h观察结果。每天检测质控血清一次，连续20天，以出现频率最多的滴度(至少17次)视为“真值”，其结果与“真值”滴度比不超过±1个稀释度时，视为此批检验合格。在实际工作中每批检样检测1份内控样。 D5 参与室间质控标准 室间质控标准：检测质控参考实验室发放的外控样血清，与其标准士1滴度为合格，实际工作中的检样应与控样一样对待。被检血清出现1∶20以上阳性反应时，须灭活和吸收，进行三排复试，确定滴度。鼠疫血凝阳性反应标准和诊断标准按“鼠疫血清学诊断标准”执行。