新建文件夹免疫新作业指导书夜班乙肝核心抗体检测作业指导书

广州金域医学检验中心 KM-SOP0301•61 GuangZhou Kingmed Center for Clinical Labrotory Edition 1.0 《文件已阅声明》 《Procedure circulation form》 已阅声明：本人承诺已了解此文件中的相关内容,今后的工作中将严格按照此文件执行,不随意对外传阅此文件,如有因与文件不相符的操作,责任由本人承担。 （I have understood the relevant content of the document。I will keep the document secret and be responsible to properly perform procedure） 阅读人签名表 姓名（NAME） 职务（POSITION） 签名（SIGNATURE） 签名日期（DATE） 周炜 主任助理 张坤波 授权签字人 陈彬 授权签字人 徐葵英 授权签字人 李慧源 授权签字人 周先军 授权签字人 高咏梅 技术员 贾红艳 技术员 闫兵 技术员 何晓英 技术员 朱国强 技术员 刘红梅 技术员 文件名称: 乙肝核心抗体检测作业指导书 表号:KM-MP03•02•02 《文件修改记录页》 《Procedure amendment form》 表号:KM-MP03.02.03 序号 NO. 页码(Page) 内容更改说明(Description of Modified contents) 审批人 (Approved by) 批准生效日期 (Approved date) 《文件信息表》 《Procedure information form》 表号:KM-MP03•02•04 文件名(Title of document) 乙肝核心抗体检测作业指导书 版本号(Edition No.) Edition 1.0 生效日期(Operative date) 2006-11-30 回顾人员签名/日期(Reviewed by : Signature/ Review date) 回顾人(reviewed by : Signature) 回顾日期(Review date) 替代文件(Replaces) 存放地点(Location)/持有人（Holder） Copy No. 地点(Location) 持有人(Holder) 1 诊断部文控室 徐立顺 2 诊断部办公室 胡朝晖 3 免疫室 周炜 作者签名/日期(Author signature/Date) 周炜 审批人签名/日期(Authorized by : Signature/Date) 陈美才 接收人签名/日期 （Receiptor/Date） 副本数(Copy No.) 乙肝核心抗体检测作业指导书 (SOP for HBc-Ab) 1、试验原理（Test Principle）： 本试剂盒在微孔条上包被纯化乙肝核心抗原(HBcAg),配以酶标记特异抗体(HBcAb-HRP)及TMB等其它试剂,采用竞争抑制法原理检测人血清(或血浆)中的乙肝核心抗体(HBcAb)。 2、样本收集和贮存（Specimen Collection and Storage）： 2．1采集：标本用量最少50ul ，3-5ml不抗凝血。使用无菌的一次性的干燥管，采集过程中应尽量避免直接接触血液 2．2 运输 ：请尽量分离血清或血浆并保存在2-8℃送检。 2．3 拒收条件：送检血清或血浆低于最少用量；蛋白变性标本；标本中含有颗粒物质；柠檬酸盐抗凝全血；严重溶血、脂血标本，无微生物污染；待检标本不可用叠氮钠防腐。 2．4稳定性：常温：最长七天；冷藏：7天；冷冻：保存4W，同时避免反复冻融血清。 3、安全防范（Safety Precautions）： 3．1此试剂盒内含人血成分。尽管所有的对照及定点对照都已经过试验验证并且发现对于乙型肝炎表面抗原，丙型肝炎抗体，HIV抗体均为阴性；但仍认为它们具有潜在的感染性。 3．2移液过程禁止用口。 3．3 在处理试剂和标本的地方禁止吸烟，饮食。 3．4使用试剂盒和标本时，必须戴一次性手套，穿试验服。使用后请彻底洗手清洁。 3．5患者样本及其他潜在感染材料试验后应放入医用垃圾桶内。 3．6 终止液含有2M H2SO2..这是强酸需要小心,为避免灼伤应戴手套,眼罩及防护衣.避免吸入.如有溢2M H2SO2出,先用水冲,再擦干。 3．7试剂含有叠氮钠作为防腐剂,叠氮钠可以和铅铜反应形成爆炸的金属叠氮化合物.为防止金属叠氮化合物的形成,应用大量的水冲洗以免其堆积. 4、试剂（Reagents）： 4．1 储存与稳定性： 试剂应在2-8℃保存，未用的包被板应放置防潮剂密封保存。 洗涤液（已稀释）在室温可保存5天，2-8℃可保存7天。 4．2 试剂盒组成：（由厦门新创公司出产，国药准字S10910148 ） （1）包被反应板条 （2）HBcAb阴性对照血清 （3）HBcAb阳性对照血清 （4） 酶结合物 （5）底物液A （6） 底物液 B （7）终止液(2M H2SO4) （8） 浓缩洗涤液 （ 蒸馏水1：20稀释） 试剂实验前的准备： 将试剂从冰箱中取出并平衡至室温；所用试剂使用前应充分混匀；不同的试剂瓶帽、不同批号的试剂不能混用。 5、仪器（Instrument if Applicable）： 酶标仪：BIO-TEK ELX-800 洗板机：anthos fluido 6、操作步骤（Procedure）The Procedure Steps are followed the manufacturers. 6．1试剂实验前的准备：将试剂从冰箱中取出并平衡至室温；所用试剂使用前应充分混匀；不同的试剂瓶帽、不同批号的试剂不能混用。微孔板开封后,余者即时以自封袋封存。 6．2 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。 6． 3 编号: 将微孔条固定于支架,按序编号。 6．4原倍血清样品按照1:30稀释后再检验，稀释液应采用生理盐水或10mMPBS;作为流行病学调查依据，使用原倍血清检验。 6． 5加样: 分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50 ul或待测血清样品50 ul于相应孔中. 6． 6加酶: 分别在每孔中加入酶标记抗体50 ul； 轻拍混匀。 6． 7温育: 置37℃温育60分钟,室温平衡5分钟。 6．8洗涤: 用洗涤液充分洗涤5次,洗涤完后扣干(每次应保持30-60秒的浸泡时间)。 6． 9显色: 每孔加底物A、B各50 ul,轻拍混匀,置37℃暗置15分钟。 6． 10 终止: 每孔加终止液50ul，混匀。 6． 11 测定： 用酶标仪单波长450nm或双波长450nm/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。 7、计算（Calculations ）： 带测样品为原倍血清时，cut-off=阴性对照OD值×0.2 带测样品为非原倍血清时，cut-off=阴性对照OD值×0.5 (非原倍血清指稀释血清﹑质控血清等) 8、正常参考范围（Normal Reference Range）： 阴性(与年龄，性别，种族无关) 9、结果解释（Result Explanation） 9．1计算待测标本的OD值与cut-off的比值：X测 / cut-off。 9．2若比值≤1为阳性。 9．3若比值＞1为阴性。 10、质量控制（Quality Control）： 10．1只有全部使用本试剂盒内的试剂才能保证检测效果，因为所有试剂都是有关联的，不能混用其他制造商的产品。尤其是血清，对照血清以及酶标记物，必须使用试剂盒配备的，不要使用其它批号产品。 10．2 未开封的情况下，如果保存于2-8℃，ELISA 试剂盒内所有试剂均在标定的有效期内有效。 10．3每一种试剂都是经过校准以保证最佳的检测结果。这些试剂如果经过稀释或改动都会导致检测的敏感度的降低。 10．4 在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染，试剂避免受到微生物的污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。 10．5 如果包装袋破损或者已开启装有干燥剂的包装袋而未以夹子封紧的，则不要继续使用微孔条。 10．6开始试验前，将所有试剂置于室温。 10．7从试剂管中吸取试剂的时候，应注意使用无菌技术以防污染。为避免假阳性结果，吸加酶结合物时，吸嘴应确保不接触或喷洒于小孔的顶避，注意不要盖错瓶盖或管盖。 10．8 试验结果的可重复性依赖于充分混合试剂。使用前振荡装有对照血清的小管和所有稀释过的溶液。 10．9 小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。请注意在吸取标本 / 对照血清，酶结合物或底物时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预孵育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。 10．10洗涤不充分将影响试验结果，应该小心进行洗涤，所有的孔内均应加入相同体积的洗涤缓冲液。洗涤结束时，应将微孔板倒扣于纸巾上并轻轻敲打，以确保所有孔内均无洗涤缓冲液。避免产生泡沫！如果使用自动洗板机，注意正确操作。 10．11为避免干扰结果，高血脂的，溶血的，或污染的血清不要用于检测，样品不应加热灭活。 10．12 每次要做临界质控品。 10．13每次实验均要做阴性，阳性对照。 11、方法特性（Method Characteristic）： 11.1 精密度（Precision）: 11.2 敏感性（Sensitivity）： 11．3重复性（Reproduction）: 12、临床意义（Clinical Significance）： 检测乙肝核心抗体可以了解人体是否有过核心抗原的刺激，也就是说是否有过乙肝病毒的既往感染，是一项病毒感染的标志。 13、参考文献（References）：N/A STANDARD operation procedure page 5/7