新建文件夹免疫新作业指导书夜班乙肝核心抗体-IgM检测作业指导书

广州金域医学检验中心 KM-SOP0301.56 GuangZhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 1.0 《文件已阅声明表》 《Procedure circulation form》 已阅声明：本人承诺已了解此文件中的相关,今后的工作中将严格按照此文件执行,不随意对外传阅此文件,如有因与文件不相符的操作,责任由本人承担。 （I have understood the relevant content of the document。I will keep the document secret and be responsible to properly perform procedure） 阅读人签名表 姓名（NAME） 职务（POSITION） 签名（SIGNATURE） 签名日期（DATE） 周炜 主任助理 张坤波 授权签字人 徐葵英 授权签字人 李慧源 授权签字人 周先军 授权签字人 高咏梅 技术员 贾红艳 技术员 张根生 技术员 何晓英 技术员 朱国强 技术员 刘红梅 技术员 文件名称: 乙肝核心抗体IgM检测作业指导书 表号:KM-MP03.02.02 《文件修改记录页》 《Procedure amendment form》 表号:KM-MP03.02.03 序号 NO. 页码(Page) 内容更改说明(Description of Modified contents) 审批人 (Approved by) 批准生效日期 (Approved date) 1 3 文件信息表内容变更 《文件信息表》 《Procedure information form》 表号:KM-MP03.02.04 文件名(Title of document) 乙肝核心抗体IgM检测作业指导书(KM-SOP0301.56) 版本号(Edition No.) Edition 1.0 生效日期 (Operative date) 2007-03-08 文控部门 (Doc. Control Dept.) 实验室文控室 回顾人员签名/日期(Reviewed by : Signature/ Review date) 回顾人(reviewed by : Signature) 回顾日期(Review date) 替代文件(Replaces) 存放地点(Location)/持有人（Holder） Copy No. 地点(Location) 持有人(Holder) 1 诊断部文控室 科研开发部 实验诊断部 陈彬 2 免疫室 周炜 作者签名/日期(Author signature/Date) 周炜 审批人签名/日期(Authorized by : Signature/Date) 陈美才 接收人签名/日期 （Receiptor/Date） 副本号 (Copy No./ Copy Num) 本文件是第 1 个文件拷贝 / 共发放 2个文件拷贝。 乙肝核心抗体IgM检测作业指导书 (SOP for HBC-Ig,M ) 1、试验原理（Test Principle）： 本试剂盒采用ELISA技术，用兔抗-人IgMμ链包被反应板，加入待测标本孵育后，再同时加入HBcAg和抗HBc-HRP。如果标本中含有抗HBc-HRP，则能与包被在反应板上的免抗-人IgMμ链结合，并与HBcAg和抗HBc-HRP形成复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。本品主要用于急性乙型肝炎的临床辅助诊断。 2、收集和贮存（Specimen Collection and Storage）： 血清或血浆1ml，标本应无溶血，无脂血，无微生物污染；不满足上述要求的标本拒收，标本的采集应使用清洁，无菌的一次性的干燥管。不要使用热灭活后的标本。 标本用量最少5ul，七天内检测的标本应在2-8℃保存，贮存在-20℃可保存4W，同时避免反复冻融血清。 3、安全防范（Safety Precautions）：。 3．1此试剂盒内含人血成分。尽管所有的对照及定点对照都已经过试验验证并且发现对于乙型肝炎表面抗原，丙型肝炎抗体，HIV抗体均为阴性；但仍认为它们具有潜在的感染性。 3．2移液过程禁止用口。 3．3 在处理试剂和标本的地方禁止吸烟，饮食。 3．4使用试剂盒和标本时，必须戴一次性手套，穿试验服。使用后请彻底洗手清洁。 3．5患者样本及其他潜在感染材料试验后应放入医用垃圾桶内。 3．6 终止液含有2M H2SO2..这是强酸需要小心,为避免灼伤应戴手套,眼罩及防护衣.避免吸入.如有溢出,先用水冲,再擦干。 3．7试剂含有叠氮钠作为防腐剂,叠氮钠可以和铅铜反应形成爆炸的金属叠氮化合物.为防止金属叠氮化合物的形成,应用大量的水冲洗以免其堆积. 4、试剂（Reagents）： 4．1 储存与稳定性： 试剂应在2-8℃保存，未用的包被板应放置防潮剂密封保存。 洗涤液（已稀释）在室温可保存5天，2-8℃可保存7天。 4．2 试剂盒组成：（上海科华生物实业有限公司生产） 抗μ包被反应板： 12孔×4孔 酶结合物 3.2ml×1瓶 HBcAg 3.2ml×1瓶 阴性对照 1.0ml×1瓶 阳性对照 1.0ml×1瓶 洗涤液(用前以蒸馏水做25倍稀释) 30ml×1瓶 显色剂A液 4.0ml×1瓶 显色剂B液 4.0ml×1瓶 终止液(2M H2SO4) 3.5ml×1瓶 封口膜 3张 自封袋 1个 说明书 1份 5、操作步骤（Procedure）The Procedure Steps are followed the manufacturers. 5．1试剂实验前的准备：将试剂从冰箱中取出并平衡至室温；所用试剂使用前应充分混匀；不同的试剂瓶盖、不同批号的试剂不能混用。 5． 2配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按25倍释后使用。 5． 3编号：两个阴性对照孔（例如B1，C1）。2个阳性对照孔（例如E1，F1），一个空白对照孔（A1，不加样品和酶），按照标本数量选择板条。 5． 4稀释：待测标本用生理盐水1:1000稀释。 5． 5 加样：分别在相应孔加入100μl阴、阳性对照或已稀释的待测样品，用振荡器混匀。 5． 6温育：置37±10C温育20分钟。 5． 7 洗涤：温育后，将封板膜揭掉，吸干孔内液体，用洗涤液洗涤5遍，每次浸泡30-60秒。 5． 8 加酶：每孔加HbcAg50μ、酶结合物50μl，空白孔除外。 5． 9 温育：置37±10C温育20分钟。 5． 10洗涤：温育后，将封板膜揭掉，吸干孔内液体，用洗涤液洗涤5遍，每次浸泡30-60秒。 5．11显色：每孔加显色剂A、B各50μl，轻拍混匀，置37±10C避光显色10分钟。 5．12 终止：每孔加入终止液50μl，混匀。 5．13 测定：设定酶标仪波长于450nm（建议用双波长450/630nm检测），测定各孔OD值。注意：在终止反应10分钟内读数。 5．14当使用单波长时，校准空白孔，设定酶标仪波长于450nm，测定各孔OD值。当使用双波长450/630nm检测时，可以不设置空白孔，直接测定各孔OD值。 6、结果判定： 临界值 = 阴性对照孔OD值 × 4 6．1 孔OD值小于0.05按0.05计算，若阴性对照孔OD值大于0.05按实际OD值计算。 6． 2当阳性对照OD值低于1.3或阴性对照OD值高于0.1，检测结果无效。 7、正常参考范围（Reference intervals）： 阴性(与年龄，性别，种族无关) 8、结果解释（Interpretation of Results） 8．1计算待测标本的OD值与cut-off的比值：X测 / cut-off。 8．2样品OD值S/ C.O. ＜4为HBC-IgM抗体反应阴性,代表该标本中尚未检测出HBC-IgM体。 8． 3样品OD值S/ C.O. ≥4者为HBC-IgM抗体反应阳性，代表该标本中可以检测出HBC-IgM抗体。建议双孔复查。 8． 4任何阳性结果需要与临床诊断相联系来判定。 8．5检验结果报告范围：阴性，阳性（可疑结果报阴性接近临界值）。 9、质量控制（Quality Control）： 9．1只有全部使用本试剂盒内的试剂才能保证检测效果，因为所有试剂都是有关联的，不能混用其他制造商的产品。尤其是标准血清，对照血清以及酶标记物，必须使用试剂盒配备的，不要使用其它批号产品。 9．2 未开封的情况下，如果保存于2-8℃，ELISA 试剂盒内所有试剂均在标定的有效期内有效。 9．3每一种试剂都是经过校准以保证最佳的检测结果。这些试剂如果经过稀释或改动都会导致检测的敏感度的降低。 9．4 在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染，试剂避免受到微生物的污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。 9．5 如果包装袋破损或者已开启装有干燥剂的包装袋而未以夹子封紧的，则不要继续使用微孔条。 9．6开始试验前，将所有试剂置于室温。 9．7从试剂管中吸取试剂的时候，应注意使用无菌技术以防污染。为避免假阳性结果，吸加酶结合物时，吸嘴应确保不接触或喷洒于小孔的顶避，注意不要盖错瓶盖或管盖。 9．8 试验结果的可重复性依赖于充分混合试剂。使用前振荡装有对照血清的小管和所有稀释过的溶液。 9．9 小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。请注意在吸取标本 / 对照血清，酶结合物或底物时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预孵育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。 9．10洗涤不充分将影响试验结果，应该小心进行洗涤，所有的孔内均应加入相同体积的洗涤缓冲液。洗涤结束时，应将微孔板倒扣于纸巾上并轻轻敲打，以确保所有孔内均无洗涤缓冲液。避免产生泡沫！如果使用自动洗板机，注意正确操作。 9．11为避免干扰结果，高血脂的，溶血的，或污染的血清不要用于检测，样品不应加热灭活。 9．12 每次要做临界质控品。 9．13每次实验均要做阴性，阳性对照。 9、方法特性（Method Characteristic）： 10．1精密度（Precision）: 10．2敏感性（Sensitivity）： 10．3特异性（Specificity）： 11、临床意义（Clinical Significance）： 核心抗体是乙型肝炎核心抗体的简称，可简写为抗-HBc核心抗原。虽然在血清中查不出来（它在血中很快被裂解），但是它具有抗原性，能刺激身体的免疫系统产生出特异性抗体，即核心抗体，故检测抗-HBc可以了解人体是否有过核心抗原的刺激，也就是说是否有过乙肝病毒的感染。所以抗-HBc是一项病毒感染的标志。 抗HBC检查 在乙型肝炎病毒感染过程中，于急性期即可测到很高的抗-HBc，而在急性期过后，核心抗体水平仍保持一定高度，并持续若干年。在慢性感染状态的携带者或病人，核心抗体也常保持高水平。另外，表面抗原已呈阴性的病人，还可查出抗-HBc阳性。因此单项抗-HBc阳性，难以确定病人是近期感染，还是以前有过感染。为了确定病人是近期内感染还是以前有过感染，常需要检测抗-HBcIgM和抗-HBcIgG。也就是说，核心抗体有两种的成分，一种是免疫球蛋白M，另一种是免疫球蛋白G，即抗-HBcIgM和抗-HBcIgG。这两种成分分别由不同的B淋巴细胞产生。当人体受到核心抗原刺激后，先产生出抗-HBcIgM，它持续时间比较短，过一段时间才逐渐产生出抗-HBcIgG，后者能在体内保持较长时间。有时乙肝病毒已经清除，而抗-HBcIgG在体内仍然存在，这时检测其他乙肝感染指标已是阴性，而仅有抗-HBcIgG阳性。因此，当抗-HBcIgM阳性时，常表示是近期感染，即乙型肝炎病毒仍在复制；当抗-HBcIgM阴性而抗-HBcIgG或抗-HBc阳性时，则表示既往有过乙肝病毒感染，但现在已不复制或已不存在了。 检测抗-HBcIgM及IgG对于急性乙型肝炎的诊断有重要意义。急性乙型肝炎可能有两种情况，一种是真正的急性乙肝，也就是说病人第一次受乙肝病毒感染，另一种是病人原来是表面抗原携带者，现在又急性发病，表面上好像和急性肝炎一样。但这两种病人血中核心抗体的情况不一样；慢性携带者急性发病的病人，血清中抗-HBcIgG或抗-HBc的水平比较高，而抗-HBcIgM比较低或是稍高；而真正急性乙型肝炎病人，则血清中抗-HBcIgG往往阴性或低水平。因此，作这项检查有助于将两种情况区分开。 鉴于它们的预后不相同，真正的急性肝炎常可彻底治愈，而慢性携带者急性发病则常易转为慢性。因此，可以看出检测抗-HBcIgM及IgG的重要。 12、参考文献（References）：N/A STANDARD operation procedure page 5/9