小鼠细小病毒rv株抗体（krv）酶联免疫分析

小鼠细小病毒rv株抗体（krv）酶联免疫分析 小鼠细小病毒rv株抗体(KRV)酶联免疫分析 试剂盒使用 本试剂盒仅供研究使用。 96T 使用目的: 本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中细小病毒rv株抗体(KRV-Ab)表达。 实验原理 本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中小鼠细小病毒rv株抗体(KRV-Ab)表达。用纯化的小鼠细小病毒rv株抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中细小病毒rv株抗体(KRV-Ab)相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的细小病毒rv株抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，与CUTOFF值相比较，从而判定标本中小鼠细小病毒rv株抗体 的存在与否。 (KRV-Ab) 试剂盒组成 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 终止液 6ml×1瓶 1 7 酶标试剂 6ml×1瓶 阳性对照 0.5ml×1瓶 2 8 酶标包被板 12孔×8条 阴性对照 0.5ml×1瓶 3 9 样品稀释液 6ml×1瓶 说明书 1份 4 10 显色剂A液 6ml×1瓶 封板膜 2张 5 11 显色剂B液 6ml×1/瓶 密封袋 1个 6 12 标本要求 1(标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20?保存，但应避免反复冻融 2(不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤 1. 编号:将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1 孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同) 2. 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先 加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不 触及孔壁，轻轻晃动混匀， 3. 温育:用封板膜封板后置37?温育30分钟。 4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5. 洗涤:小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。 6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育:操作同3。 8. 洗涤:操作同5。 9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37?避光显色 15分钟. 10. 终止:每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。 50nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止11. 测定:以空白空调零，4 液后15分钟以内进行。 操作程序: 计算和结果判定: 试验有效性:阳性对照孔平均值?1.00; 阴性对照平均值?0.10 临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15 阴性判定:样品OD值< 临界值(CUT OFF)者为细小病毒rv株抗体(KRV-Ab)阴性 阳性判定:样品OD值? 临界值(CUT OFF)者为细小病毒rv株抗体(KRV-Ab)阳性 。 注意事项 1(操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。 2(试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。 3(浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 4( 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 (底物请避光保存。 5 6(试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm 7(所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须 注意安全。 保存条件及有效期 1(试剂盒保存:;2-8?。 2(有效期:6个月