Folin-Ciocaileu比色法测定刺槐花中多酚含量

Folin-Ciocaileu比色法测定刺槐花中多酚含量 Folin-Ciocaileu比色法测定刺槐花中多酚含 量 摘要,目的测定刺槐花中的多酚含量。方法以没食子酸为品,用Folin-Ciocaileu比色法测定刺槐花中的多酚含量。结果标准曲线的回归方程为,y=0.005 7 x―O.003 5(R2=0.999 6)。用比色法测定其稳定性、精密度、重现性、加样回收率,RSD在0.20,,4.67,范围内,刺槐花中多酚含量为1.083,,RSD=-3.2I,。结论用Folin-Ciocaileu 比色法测定刺槐花中的多酚含量方法简便、快速、准确可靠。 关键词,刺槐花,总多酚,Folin-Ciocaileu比色法 中图分类号,R282.71 文献标识码,A 文章编号,1672-979X(2010)09-0332-04 刺槐花富含蛋白质、氨基酸、微量元素等营养成分,还含有芦丁、木犀草素、槲皮素、酚酸等多酚类成分。多酚具有清除自由基、抗氧化、抗肿瘤、抗辐射,以及保护心血管系统等重要的生物活性。刺槐花是主要野生食用花之一,已成为当前功能性食品研究的热点。 我们用乙醇提取了刺槐花中的多酚化合物,以没食子酸 1 为标准品,用Folin-Ciocaileu比色法测定了刺槐花中多酚类物质的含量,为开发利用刺槐花提供了科学依据。 1材料与方法 1.1材料与试剂 刺槐花(山东师范大学校园),没食子酸标准品(中国药品生物制品检定所),乙醇、钨酸钠、钼酸钠、硫酸锂、无水碳酸钠、磷酸、溴等均为分析纯。 1.2仪器与设备 UV-17000紫外分光光度计(岛津),恒温水浴锅(上海森信),电子天平(北京赛多利斯),移液器(1 000ul,200ul),JY92-2D超声波细胞粉碎机(宁波新芝) 1.3方法 1.3.1 Folin-Ciocaileu显色剂的配制 参照文献。称取50 g钨酸钠和12.5 g钼酸钠置入1 L磨口圆底烧瓶中,用350 mL蒸馏水溶解,缓慢加A.85,磷酸25 mL,浓盐酸50 mL,充分混匀,放入数粒玻璃珠,连接回流冷凝装置,文火回流10 h(回流不一定连续)。用25 mL蒸馏水冲洗冷凝管上的附着物,拆开冷凝管后加入75 g无水硫酸锂和几滴溴水(边加边振摇),开口继续加热沸腾15 min,直至溴水完全挥发,终点颜色为黄绿色。冷却后定容至500 mL,过滤,储存于棕色瓶中,放入冰箱保存备用。 1.3.2标准贮备液的配制精密称取干燥的没食子酸标准品 2 0.014 g,蒸馏水溶解并定容至100 mL,浓度为140ug,mL。 1.3.3标准曲线的建x,rt61 精密吸取0,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 mL 140~tg,mL没食子酸标准贮备溶液,分别定容于10 mL量瓶内。然后从各溶液中吸取1 mLJJll,N.25 mL量瓶内,先加10 mL蒸馏水摇匀,再加1.5 mL Folin-Ciocaileu试剂,充分摇匀30 s后,加入10,碳酸钠溶液6 mL(前后时间间隔不应超过8 min),混匀,加水定容,再混匀,然后30?下避光放置反应2 h,在765 nm处测吸光度。以吸光度为纵坐标,标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线。刺槐花样品中的多酚含量以没食子酸标准品计。 1.3.4样品溶液的制备取鲜槐花2 g,用60,乙醇40 mL,35?,110w,超声提取30min~,3次,合并提取液,过滤,待测。 1.3.5样品的测定用移液管精确量取样品溶液1.0 mL置入25 mL量瓶中,先加lO mL蒸馏水,摇匀,再加Folin-Ciocaileu试剂1.5 mL,充分摇匀30 s后,加入10,碳酸钠溶液6 mL,混匀,加水定容,继续摇匀,然后30?下避光放置反应2 h,在765 nip.波长处测吸光度,代入回归方程,得多酚浓度(ug,mL)。 1.3.6多酚含量的测定 1.3.7分析方法的评价稳定性实验,取刺槐花酚类提取样品液按上述处理及测定方法,分别在样品液与显色剂反应完 3 全0.5,1,2,3,4 h后测吸光度,以评价该比色分析方法在一定时间内的稳定性。 重现性实验,取刺槐花样品5份,依上述制备及分析方法,分别测定其多酚含量,并计算测定结果的相对标准偏差(RSD),以评价该方法的重现性。 精密度实验,用Folin―Ciocaileu比色法测定同一刺槐酚 类样品液5次,计算测定结果的RSD,以评价该方法的精密度。 加样回收率实验,刺槐酚类样品液中加入不同量的没食子酸标准贮备液,分别测定其多酚含量,并计算回收率和RSD,以评价该方法的准确度和可靠性。 2结果与分析 2.1标准曲线的建立 没食子酸在0,70ug,mL浓度范围内与其吸光度值呈良好的线性关系,在此范围内线性回归方程为 y=0.0057x-0.003 5(R2=0.999 6)。 2.2比色方法的稳定性、重现性和精密度 验证Folin―Ciocaileu比色法测定刺槐花中酚类含量的稳 定性、重现性和精密度,结果见1。 由表1可见,该方法在体系反应完全后放置4 h内测定的吸光度值变化较小,RSD=0.42,,表明方法稳定性较好,重现性实验测得5个不同刺槐样品中多酚含量值较接近, 4 RSD=0.20,,表明该方法重现性较好,精密度实验,同一样品5次测定的多酚含量值相差较小,RSD=0.74,,表明该方法精密度较高,完全能满足样品分析的。 2.3加样回收率实验 按照1.3.6的方法进行加样回收率的测定,结果见表2。 由表2可见,6次加样回收实验的最低回收率为94.2,,最高回收率为107.3,,平均回收率为99.73,,RSD=4.67,。表明此法有很高的准确性和可靠性。 2.4刺槐花中多酚的含量 精密称取2 g鲜槐花6份,按1.3.4方法制备供试品溶液,精密量取1.0 mL,按1.3.5方法操作,并设空白管。为消除供试品溶液本身颜色的干扰,同时制备不加显色剂的对照管。于765 m波长处测定吸光度。结果见表3。 结果表明,本方法测得的刺槐花中多酚含量平均为1.083,,RSD=3.21,。 3 结论 以刺槐花为原料,以没食子酸为标准品,建立了Folin-Ciocaileu比色法测定刺槐花中多酚含量的方法。显色后溶液在4 h内稳定,标准曲线在0,70ug,mL范围内线性关系良好,方法的精密度高,重现性好,加样平均回收率为99.73,,RSD=4.67,。测得刺槐花60,乙醇提取物中多酚平均含量为1.083,,RSD=3.21,。方法操作简便,可 5 用于测定刺槐花中多酚的含量。 6