薄层扫描法测定黄芪颗粒中黄芪甲苷含量

薄层扫描法测定黄芪颗粒中黄芪甲苷含量 2006年第l5卷第l4期 薄层扫描法测定黄芪颗粒中黄芪甲苷含量 药物鉴定 刘丰丰,王海宁,李明,青磊 (1.贵阳医学院附属医院,贵州贵阳550004;2.贵州省药品检验所,贵州贵阳550004; 3.中国人民解放军四十四医院,贵州贵阳550009) 摘要:目的建立薄层扫描法测定黄芪颗粒中黄芪甲苷的含量.使用硅胶G薄层 板,展开剂为氯仿一甲醇一水(13:6:2)10~C以下放 置过夜的下层液,喷以10%硫酸乙醇溶液显色,于105oC加热至斑点显色清晰,双 波长锯齿扫描,检测波长为530nm,参比波长为700nm. 结果取样量与峰面积线性关系良好,平均回收率为98.72%,RSD=3.5%.结论该方法 简便,快速,可靠,可用于检测黄芪颗粒成品质量. 关键词:薄层扫描法;黄芪甲苷;含量测定 中图分类号:11284.1;11286.0文献标识码:A文章编号:1006—4931(2006)14—0017 —02 DeterminationofAstragalininAstragalusGrainbyTLC L/uFenl,WangHaininf,LiMtngl,QtngLei| f』.TheAffiliatedHo~hMofGuiyangMedicalCollege,Guiyang,Guizhou,China550004; 2.GuizhouProvincialInstituteforDrugControl,Guiyang,Guizhou,China550004;3.The44thHospitalofPLA,Guiyang,Guizhou,China550009) Abstract:ObjectiveToestablishaTLCmethodfordeterminationofastragalininastragalusgr ain.MethodsThesilicagelGthinboard wasused.DeveloperWaschloroform—methylalcohol— water(13:6:2).Thebottomlayerliquidwasplacedtostayovernightin10~C. sprayingwith10%sulfuric—ethanolacid.at105? heatingtothespottoshowacolorclear.Toscanwithdualwavelengthsawteeth.The detectivewavelengthWasat530nm,thereferencewavelengthwasat700nm.ResultsTheline arrelationshipofastragalincurveswas good.Theaveragerecoveryratewas98.72%withRSD=3.5%.ConclusionThemethodissim ple.rapidandreliable. Keywords:TLC;astragalin;contentdetermination 黄芪颗粒收载于《中华人民共和国卫生部药品?中药成方 制剂(第11册)》(1991年,第45页),但原质量标准仅有鉴别项,无 含量测定项,无法控制产品的质量.笔者采用薄层扫描法测定方中 黄芪甲苷的含量,提高了药品质量标准,可用于控制成品的质量. 1仪器与试药 CS一930l型双波长飞点薄层扫描仪(日本岛津公司);CX一 250型超声波清洗机(中国北京医疗设备二厂);硅胶G薄层板(中 国青岛海洋化工厂).硅胶G薄层板(中国青岛海洋化工厂);黄芪 颗粒及缺苦参药材的阴性样品(青岛海化药业有限公司);黄芪甲 苷对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用,批号为 110781—200512);氯仿,甲醇均为分析纯. 2方法与结果"I 2.1溶液制备 取黄芪甲苷对照品适量,用甲醇稀释成每1mL含1mg的溶 液,即得对照品溶液.取本品装量差异项下的内容物,研细,取约2g, 精密称定,置具塞锥形瓶中,加甲醇适量,回流提取4h,提取液浓 缩至干,残渣加水10mL使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取3次, 每次10mL,合并提取液,正丁醇液用氨试液洗涤2次,每次20mL, 正丁醇蒸干,残渣再次加水5mL使溶解,通过D型大孔吸附树 脂柱(内径1.5am,长12am),以水50mL洗脱,弃去水液,再用 40%乙醇30mL洗脱,弃去40%乙醇洗脱液,继续用70%乙醇50mL 洗脱,收集洗脱液,蒸干,用甲醇溶解并转移至2mL量瓶中,加甲 醇至刻度,摇匀,作为供试品溶液. 2.2薄层色谱分析条件 硅胶G薄层板(100mmx100mm),点状点样,点样量为供试 品溶液3,对照品溶液2L与6L,展开剂为氯仿一甲醇一水 It,11,11,II,IIII,IIIIIIII,IIII,IIII,IIIIIIII,IIII,IIII,,III,IIIIIIII,IIII,I,I,,IIIIIIII,III,,II,I,I1IIIII,I II (二部)》溶出度测定的要求及普卢利沙星在0.1mol/L盐酸溶液中 的溶解度情况,将溶出介质体积选为1000mL,采用转篮法,转速 为100r/min. 2.2.2测定方法:采用2.1项下含量测定方法进行测定. 2.2.3溶出曲线及其均一性:取本品(批号为030201)6粒,采用转 篮法,以0.1mol/L盐酸溶液1000mL为溶出介质,转速100r/min, 分别于5,10,15,20.30,45,60min时取样5mL,滤过,即刻补加同 温度介质5mL.分别精密量取续滤液2mL,置50mL量瓶中,加 0.1mol/L盐酸稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液.另精密称取普卢 利沙星对照品12.5mg,用0.1mol/L盐酸溶解制成浓度为5I.rg/mL 的对照品溶液.分别取上述两种溶液,于274nm波长处测定吸收度, 计算不同时间的累积溶出百分率,结果本品在30min时溶出已 基本达到平衡. 2.2.4溶出度测定:取本品,采用转篮法,以0.1mol/L盐酸溶液 1000mL为溶出介质,转速100r/min,45min时,取溶液滤过,精 密量取续滤液2mL,置50mL量瓶中,加0.1mol/L盐酸溶液稀释 至刻度,摇匀,作为供试品溶液;另精密称取普卢利沙星对照品适 量,用0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1mL中含5g的溶 液,作为对照品溶液;取上述两种溶液在274nm波长处测定吸收 度,计算出每粒胶囊的溶出量.共测定3批样品,结果见2. 3讨论 3.1溶出度检查一般要求溶出介质选择水或0.1mol/L盐酸溶 液.为使溶出度检查尽可能接近体内环境,降低试验成本,简便样 品测定操作,故含量测定和溶出度检查均选用0.1mol/L盐酸溶液 作为溶剂. 3.2由溶出曲线看,虽然在30min时样品溶出已基本达到平衡 点,但由于普卢利沙星溶解性稍差,加上研究用样品尚处于研究阶 段,缺乏大生产样品数据,故溶出时间暂定为45min. 参考文献: 【1】程春生,张宝砚,李鹏,等.普卢利沙星的合成【J】.中国医药工业杂 志,2005.36(2):67—69. (收稿日期:20o5一l2—09;修回日期:2006—02—27) ? l7? 药物鉴定 (13:6:2)IO~C以下放置过夜的下层液,展开,晾干后喷以10%硫 酸乙醇溶液,在105~C下加热至斑点显色清晰,在薄层板上覆盖同 样大小的玻璃板,周围用胶布固定.用反射法双波长锯齿扫描, As=530nm,AR=700nm. 2.3方法学考察 线性关系考察:分别精密吸取浓度为1.012mg/mL的黄芪甲 苷对照品溶液1,2,3,4,5,6,8IxL,按上述条件进行薄层扫描测定. 求得黄芪甲苷的回归方程C(1ag)=6.4327×10.A+0.1754,r= 0.997,线性范围为1.012,8.096Ixg.结果表明各对照品取样量与 峰面积均呈良好线性关系,但直线不通过原点,因此采用外标两点 法计算含量. 同板及异板精密度试验:取同一硅胶G板,分别精密吸取供试 品溶液3L,重复点样5次,并以对照品溶液2,6L同时点样,依 法测定,结果的RSD=2.03%.取硅胶G薄层板5块,分别点5个 点,每个点点样3,并以对照品溶液2,6IxL同时点样,依法测 定,结果的RSD=2.31%. 重现性试验:取同一样品,按供试品溶液制备方法制备5份供 试品溶液,分别精密吸取3点样,并以对照品溶液2,6IxL同时 点样,依法测定,结果的RSD为2.33%. 加样回收试验:精密称取已知含量的样品1g(0.8321mg/g), 再加入黄芪甲苷对照品适量,依法测定,计算回收率,结果见表1. 表1黄芪甲苷加样回收试验(n=5) 2006年第15卷第14期 空白干扰试验:按处方比例及生产制备 方法制备阴性样品,按供试品溶液制备方法 制备阴性样品溶液,点样3IxL,按上述条件 展开.结果在与对照品溶液色谱相应位置上 阴性样品溶液无斑点出现,表明阴性样品对 测定无干扰(图1). 2.4样品含量测定 依法测定了4批样品,结果批号为 200502l3.20050215,20050216,20050218 1.对照品溶液 2.供试品溶液 3.阴性样品溶液 图1薄层色谱图 的4批样品中黄芪甲苷含量分别为0.8460,0.7899,0.7836, 0.8894mg/g(n=2). 3讨论 本方法简便,重现性较好,稳定性可靠,斑点清晰,阴性样品无 干扰,专属性强.黄芪甲苷为皂苷类成分,故采用水提取后正丁醇 萃取.在试验中,曾采用正丁醇提取浓缩后点样,但杂质较多,展开 显色后黄芪甲苷斑点处有干扰,为达到纯化要求,取正丁醇提取后 采用文中洗脱方法,样品斑点清晰.显色后应立即覆盖同样大小的 玻璃板,周围用胶布固定,否则时间过长,斑点色会渐渐变淡.选择 展开剂时,曾采用氯仿一乙酸乙酯一甲醇一水(15:22:40:10)l0? 以下放置过夜的下层液为展开剂,展开后斑点分离不理想,又用氯 仿一甲醇一水(13:10:10)10%以下放置过夜的下层液为展开剂, 展开后斑点R值较大,再用氯仿一甲醇一水(13:6:2)l0?以下 放置过夜的下层液为展开剂,展开后,斑点分离良好且无干扰,见 值好,故采用后者为展开剂. 参考文献: 【11国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)【M1.北京:化学工业 出版社.2000:125—251. (收稿日期:2006—03—14;修回日期:2006—05—15) 口服甲钴胺片致严重周围神经性水肿1例 庞家莲 (广西医科大学第六附属医院,广西玉林537000) 中图分类号:11969.3;R977.2文献标识码:D文章编号:1006—4931(2006)14— 111118—01 患者男,38岁.因反复腰腿疼痛伴双下肢放射痛2月余,加重 1个月于2006年3月27日至4月13日在我院脊柱骨科住院治 疗.人院时生命体征均正常,根据腰椎CT检查,诊断为L],k椎间 盘突出并椎管狭窄.次日行k,L椎间盘突出后路切开髓核摘除, 椎管扩大术,术中及术后患者无特殊不适,术后予抗炎,脱水及止 血等对症支持治疗,同时于3月30日至4月13日给予口服甲钴 胺片(商品名弥诺,沈阳万隆药业有限公司,批号为060201)1.0mg, 3次/d,治疗期间无不良反应发生.4月15日晚和16日早晨分别 服用甲钴胺片0.5mg,16日下午4时许患者出现呕吐,腹泻,VI 唇,面部及四肢水肿,咽部有异物感,吞咽困难,心跳加快等不适症 状,立即静脉注射肾上腺素1mg,地塞米松5mg,肌肉注射异丙嗪 25mg,5min后咽部异物感消失,口唇,面部及四肢水肿消退,吞咽, 心跳恢复正常.因未确诊为甲钴胺所致过敏反应,患者次日晨再次 VI服甲钴胺片0.5nag,约30rain后又出现上述不适症状,可确诊为 甲钴胺所致. 讨论:甲钴胺对神经元的传导功能有良好的改善作用,不良反 ? l8? 应发生率较低,主要表现为食欲不振,恶心,呕吐,腹泻等症状,偶 见皮疹I.我院将其广泛用于糖尿病周围神经病变及骨科患者,多 年来未发生过不良反应,此为首例因口服甲钴胺片致严重周围神 经性水肿的患者.该患者住院期间连续服用甲钴胺两周未出现任 何不适,停药ld后再服用甲钴胺2次才出现严重的不良反应,确 实罕见.中国医院知识库CDKI期刊全文库(1994—2005年)中关 于甲钴胺不良反应的文献报道仅2例_2I3】,故患者首次出现不良反 应时未引起重视,致使再次用药而又发生不良反应. 作者简介:庞家莲(1968一),广西玉林人,副主任药师,从事临 床药学工作. 参考文献: 【1】张象麟.药物临床信息参考【M】.成都:四川科学技术出版社,2004: 727. 【2】刁雨辉.甲钴胺片致面部红肿1例【J】.中国药师,2005,8(2):176. 【3】赵泉,赖总善.甲钴胺致过敏反应1例【J1.医药导报,2002,21(1):51. (收稿日期:2Oo6—05一O8)