HPLC法测定赖氨匹林中阿司匹林含量的方法学验证

HPLC法测定赖氨匹林中阿司匹林含量的方法学验证 HPLC法测定赖氨匹林中阿司匹林含量的方法学验证 摘要:目的 对建立的HPLC法测定赖氨匹林中阿司匹林含量方法，进行方法学验证。方法 仪器:Agilent1260，色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱;流动相:甲醇-水-冰醋酸(40:60:1);检测波长:276nm;进样量:10μl。结果 精密度RSD=0.43%，线性和范围0.33540,0.48633mg/ml，回收率99.40%,100.18%，定量限0.2064μg/ml，检测限0.06192μg/ml。结论 建立的方法准确、可靠，能够满足实验室。 关键词:赖氨匹林;HPLC;方法学验证 中图分类号:R9 文献标识码:A 赖氨匹林为阿司匹林和赖氨酸的复盐，为非甾体解热镇痛抗炎药，不仅具有解热、镇痛、抗炎的作用，它还是一种良好的治疗心血管疾病的药物，具有抗血小板聚集、阻止血栓形成的作用[1,3]。适用于发热及轻、中度疼痛。本文针对HPLC法测定赖氨匹林中阿司匹林的含量，进行方法学验证。 分析步骤:按外标法以峰面积计算供试品中阿司匹林C9H8O4的含量。 式中:Au:供试品溶液中主峰响应值;As:对照品溶液中主峰响应值;Cs:对照品溶液浓度mg/ml;Cu:供试品溶液浓度mg/ml。 对该方法进行方法学验证，证明方法是否准确、可靠，能够满足实验室要求。 1 仪器与试剂 天平:梅特勒托利多XS105、高效液相色谱仪:Agilent1260. 1.1仪器 1.2试剂 甲醇(色谱纯、ACS)、冰醋酸(分析纯、天津市科密欧)、乙腈(色谱纯、ACS)。 1.3对照品 阿司匹林(中检院) 2 实验方法 2.1色谱条件 色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱;流动相:甲醇-水-冰醋酸(40:60:1);检测波长:276nm;进样量:10μl;流速:1.0ml/min。理论板数按阿司匹林峰计算不低于2000。 2.2进样精密度验证 取阿司匹林对照品适量，加2ml冰醋酸溶解，并用乙腈稀释成约0.4mg/ml的溶液，精密量取10μl注入液相色谱仪，连续进样5次，计算其峰面积测量值的相对标准偏差。 2.3回收率验证 精密称取对照品9份，分别加冰醋酸2ml使溶解，加乙腈稀释至刻度，精密量取10ml至20ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度。配制成含阿司匹林80%、100%、120%的溶液，每个浓度各三份，分别精密量取各溶液10μl进液相色谱仪，计算回收率。 2.4线性验证 取阿司匹林对照品33.54mg，精密称定，加冰醋酸2ml，超声使溶解，用乙腈稀释至每1ml约含阿司匹林3.2mg的溶液，分别精密量取2.0ml、2.2ml、2.4ml、2.5ml、2.9ml，用乙腈稀释成10ml，摇匀。分别取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标进行线性回归。 2.5定量限 精密称取对照品10.32mg，加2ml冰醋酸使溶解，加乙腈制成含阿司匹林0.4128μg/ml的溶液，作为溶液(1)。取溶液(1)10ml加乙腈稀释至20ml，摇匀，作为定量限溶液。 2.6检测限 取上述溶液(1)3ml，加乙腈稀释至20ml，作为检测限溶液。 3 实验结果 3.1进样精密度验证结果 主峰峰面积相对标准偏差不大于2.0%，主峰保留时间的相对标准偏差不大于1.0%，主峰的理论板数符合规定(见表1)。 3.2回收率验证结果 9份样品的回收率RSD小于2.0%，且回收率在99.40%,100.18%，说明该方法测定样品中阿司匹林含量回收率较好(见表2)。 3.3线性验证结果 阿司匹林在浓度0.33540,0.48633mg/ml范围内与峰面积线性关系较好(见表3，图1)。 图1 阿司匹林含量线性曲线图 3.4定量限 取定量限溶液10μl，注入液相色谱仪，结果:信噪比为10.1，大于10?1。 3.5检测限 取检测限溶液10μl，注入液相色谱仪，结果:信噪比为3.6，大于3?1。 4 试验结论 综合以上数据，含量进样精密度RSD=0.43%;阿司匹林浓度在0.33540,0.48633mg/ml内线性关系较好;回收率试验结果RSD为0.28%，小于2.0%，且回收率均在99.40%,100.18%，说明该方法测定赖氨匹林中阿司匹林含量回收率较好;定量限为0.2064μg/ml;检测限为0.06192μg/ml。得出以下结论:此方法准确、可靠，能够满足实验室要求[4,8]。 参考文献: [1]国家药典委员会.中国药典(二部)[S].北京:化学工业出版社，2010. 高效液相色谱法测定注射用赖氨匹林中的阿司 [2]董煜，赵远征，张怡娜. 匹林及游离水杨酸[J].色谱，2002，20(3):277-278. [3]刘放，孙洁胤，周芝芳.HPLC同时测定注射用赖氨匹林中阿司匹林和水杨酸的含量[J].西北药学杂志，2008，23(2):69-70. [4]陈叶平，阚家义.高效液相色谱法测定赖氨匹林肠溶胶囊的含量[J].北方药学，2014，11(2):15-15. [5]谢公元，俞国瑞，陈曙霞，等.肠溶阿司匹林生物利用度和副作用的研究[J].中国新药与临床杂志，1983，03. [6]王晓良，仪明光，刘忠敏，等.联苯双酯的吸收、分布、代谢和排泄[J].药学学报，1983，12. [7]刘家良，沈渔?.高压液相色谱法测定血液中氟哌啶醇含量[J].北京大学学报(医学版)，1984，03. [8]李汉蕴，李丰文，刘国杰，等.毛果芸香碱眼用控释膜剂的贮存期预测[J].中国药科大学学报，1984，03. 编辑/成森