【doc】HPLC法测定健步强身丸中芍药苷的含量

【doc】HPLC法测定健步强身丸中芍药苷的含量 HPLC法测定健步强身丸中芍药苷的含量 ? 414?中国中医药信息杂志2004年5月第11卷第5期 HPLC法测定健步强身丸中芍药苷的含量 杜小伟,赵惠萍,张小茜 (北京市药品检验所,北京100035) 摘要:目的制订健步强身丸中芍药苷的含量测定方法.方法采用高效液相色谱法,色谱柱为 C18Phenomenex(5m,4.6mm×150mm);流动相为水一四氢呋喃一乙腈(90:3.4:6.6);检测波长:230nm;流速为 0.8mL/min.结果芍药苷在0.184,0.920g(r=0.9999,/7=5)范围内线性关系良好,平均回收率为97.73%,RSD 为0.64%.结论该方法简便易行,重复性好,可用于健步强身丸的定量分析. 关键词:高效液相色谱法;健步强身丸;芍药苷:含量测定 中图分类号:R289.12文献标识码:A文章编号:1005—5304(2004)05—0414—02 Sl~lles蚰~tlonoftheCo~tsPaeon~1orlnin.~lulbuQil瞰lW_蛐by吼CDUXiao- wei,ZHAOHui?ping,ZHANGXiao—qian(BeijingInstituteforDrugControl,Beijing10003~China) Ab—_d:ObjectiveToestablishaHPLCmethodtodeterminethecontentsofpeaoniflorinin JanbuQiangshenWan.MethodsStationaryphasewasphenomenesCl8(4.6mmx150mm,5I xm), mobilephasewaswater-tetrahydrofaran—acetonitrile(90:3.4:6.6),detectionwavelength230nm, flowrate0.8mL/min.R棚Therewasgoodlinearityinrangeof0.184—0.920g(r=0.9999,n=5) forpaeoniflorin,theaveragerecoveryofpaeoniflorinwas97.73%,RSDwas0.64%.C啊_cI—n Themethodissimple,reliable.ItcanbeusedinqualitycontrolofdianbuQiangshenWan. Key_s:HPLC.JianbuQiangshenWan:peaoniflorin;quantitativede~rmination 健步强身丸[1:是由知母,黄柏,龟甲,熟地黄,白芍等摇匀,滤过,精密量取10mL,置已处理好的中性氧化铝柱 24味药材制成的水蜜丸,具有补肾健骨,宣痹止痛的功能.(1o0,200目,内径lcm)上,用80%甲醇60mL洗脱.收集洗脱 芍药苷是方中主药白芍的主要成分.为了有效地控制药品质液,蒸干,残渣加甲醇适量使溶解,并定量转移至5mL量瓶中, 量,本实验采用高效液相色谱法测定芍药苷的含量,并取得加甲醇稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45m)滤过,取续滤 了满意的结果.液,即得. 1实验材料3方法学考察 仪器:高效液相色谱仪HP1100.试剂:乙腈为优级纯;31检测波长的选择 四氢呋喃为色谱纯.对照品:芍药苷由中国药品生物制品检芍药苷对照品溶液在200~400nm波长范围内进行扫描, 定所提供(批号0763—9913,纯度98.86%);健步强身丸样品结果在230nm波长处有最大吸收,故选择230rim作为检测波 由北京中药五厂提供(批号为20010010,20010020,长. 20010030). 2实验方法 2.1色谱分析条件 色谱柱:C1RPhenomenex(5m,4.6mmX150ram);流动 相:水一四氢呋喃一乙腈(90:3.4:6.6);流速:0.8mL/min: 检测波长:23Onto;层析柱的理论板数按芍药苷峰计算应不 低于4000. 2.2对照品溶液的制备 精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥36h的芍药 苷对照品适量,加甲醇制成每lmL含70g的溶液. 2.3供试品溶液的制备 取重量差异项下的本品,研细,取3g,精密称定,置具塞 锥形瓶中,精密加入甲醇20mL,密塞,称定重量,置水浴上加 热回流1h,取出,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量, 3.2提取方法及时间的选择 取本品,用甲醇加热回流提取,提取液通过中性氧化铝柱, 用80%甲醇洗脱,除去样品中的大量杂质,以利于液相分离, 并可保护色谱柱.试验中分别考察了用甲醇回流3O,6O, 90min的芍药苷含量,结果表明,用甲醇加热回流提取60rain 可将芍药苷提取完全. 3.3洗脱剂用量的确定 精密量取甲醇溶液10mL,置已处理好的中性氧化铝柱 (1o0,200目,内径1cm)上,依次用80%甲醇5O,60,70mL 洗脱,分别收集洗脱液.按上述色谱条件依法测定,结果表明, 用80%甲醇6Oral洗脱即可洗脱完全. 3.4空白试验 空白溶液的制备是按处方中药味的比例,自配不含白芍 的群药,按其工艺制成阴性对照,再按供试品溶液制备方法制 2004年5月第11卷第5期中国中医药信息杂志?415? 备并测定.结果空白溶液在与芍药苷对照品相同保留时间处未显明显色谱峰,故认 为无干扰(见图1). AB 注:^.芍药苷对照品:B.样品;c.空白溶液 图1健步强身丸HPLC色谱图 3.5线性关系的考察表1回收率试验结果 精密量取芍药苷对照品溶液(0,368mg/mL)1.0,2.0, 3.0,4.0,5.OmL,分别置lOmL量瓶中,加甲醇稀释至刻度, 摇匀,分别精密吸取5uL,注入液相色谱仪,记录峰面积.以 芍药苷对照品进样量(ug)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制 标准曲线,其回归方程为Y=1619X一1,r=O.9999.结果表明, 芍药苷在0.184~0.920ug范围内线性关系良好. 3,6稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液5uL,分别于配制后0,2,4, 6,8,12h依法测定,结果RSD:I.13%,表明供试品溶液在12h 内基本稳定. 3.7精密度试验 精密吸取同一供试品溶液5uL,重复进样5次,求得相 对标准偏差RSD=O.38%. 3.8重复性试验 精密称取同一批号的样品5份,依法进行测定,结果芍药 苷的含量分别为0.514,0.512,0.505,0.491,0.512mg/g, 求得相对标准偏差RSD=I.87%. 3.9回收率试验 采用加样回收法,精密称取已知含量的同一批号的样品 (批号20010010,含量0.507mg/g)1.5g,置具塞锥形瓶中,分 别精密加入芍药苷对照品溶液(0.03876mg/mL)各20mL,按供 试品溶液的制备方法制备及上述色谱条件测定,计算回收率 (见表1). 3.10样品测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10uL,注入 液相色谱仪,依上述色谱条件测定,以外标法计算含量,测定 3批样品的结果见表2. 4讨论 C 中性氧化铝柱对芍药苷的吸附将影响含量测定结果,实 验中曾试用多个厂家不同批号的中性氧化铝,含量结果均有 变化,后采用105"C活化1h,在干燥器中放置30rain后使用, 含量测定结果较稳定. 由于本品为24味中药组成的复方制剂,成分复杂,为使色 谱图中芍药苷与其它杂质峰能获得满意的分离,曾试用流动 相:?水一四氢呋喃一乙腈(90:3.4:6.6);?甲醇一0.05mol/L 磷酸二氢钾溶液一醋酸一异丙醇(67:173:4:4):?乙腈一水 (10:90).结果采用流动相?时,样品中芍药苷峰可与其它 杂质峰完全分离. 参考文献: [1]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国卫生部药 )[S].1998.260. 品标准中药成方制剂(第18册 [2]中华人民共和国药典委员会.中国药典(一部)[s].北京: 化学工业出版社,2000.78. (收稿日期:2O03-10-31) (修回日期:2O03-12-17) 江苏有了地产冬虫夏草 江苏省食用菌研究中心已经成为长江以南最大的冬虫夏 草生产基地,年产虫草35000瓶,销往江苏,上海等华东地区. 冬虫夏草其实并不神秘,属于食用菌的一种,全世界共有 380多种,其特有成分虫草菌素可以抗菌,抗病毒,常服可以 调节免疫力,增强心脑血管功能.江苏省食用菌研究中心将 原产地为长白山的一种被称为北冬虫夏草的品种进行培育, 经过3年的研制试种,目前已开始批量生产.这种虫草中所 含的虫草菌素是普通虫草的35倍,其它几种有益成分含量也 远远高于野生虫草.其价格为每公斤5000元,仅为野生虫 草的1/10.(本刊讯)