【doc】 伤痛宁胶囊质量标准研究

【doc】 伤痛宁胶囊质量研究 伤痛宁胶囊质量标准研究 第21卷第4期湖南中医杂志Vok21 ? 72?2005年7月HUNANJOURNALOFTRADITIONALCHINESEMEDICINEJul No.4 20o5 伤痛宁胶囊质量标准研究 湖南国华制药有限公司(410013)肖德华 摘要目的:建立伤痛宁胶囊的质量标准.方法:用TLC法鉴别制剂中的延胡索,香附,山柰,白芷,用HPLC测定制剂中 欧前胡素的含量.结果:在TLC色谱中均能检出延胡索,香附,山柰,白芷;欧前胡素在0.10,0.51g范围内呈良好的线性关 系(r=0.9999),平均回收率为99.67%,RSD=1.54%.结论:所建鉴别方法专属性强,定量方法简便,准确,可用于伤痛宁胶 囊的质量标准控制. 主题词延胡索/分析香附/分析山奈/分析白芷/分析@欧前胡素/分析色谱法,薄层色谱法,高压液相 @伤痛宁 伤痛宁胶囊由延胡索,白芷,山柰,细辛,香附,甘松等药 物组成,具有散瘀止痛之功效,用于跌打损伤,闪腰挫气.为 了有效控制其质量,采用HPLC对白芷进行含量测定,并对 延胡索,香附,山柰,白芷进行薄层定性鉴别,为伤痛宁胶囊 的质量标准提供了定性和定量的检测方法. 1仪器与材料 Waters510高效液相色谱仪;延胡索乙素对照品,Q一香 附酮对照品,对甲氧基桂皮酸乙酯对照品,欧前胡素,异欧 前胡素对照品,欧前胡素对照品(供含量测定用0826— 200206,中国药品生物制品检定所);硅胶G,硅胶GF254(青 岛海洋化工厂生产);伤痛宁胶囊(湖南国华制药有限公司 提供);甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水,其它试剂均为分析 纯. 2定性鉴别.】 2.1延胡索的TLC鉴别取本品内容物3g,加乙醚20ml, 浸渍1h,倾去乙醚液,加浓氨试液3ml使湿润,加乙醚20IIll 浸渍3h,滤过,滤液蒸干,残渣加无水乙醇lml使溶解,作为 供试品溶液.另取延胡索乙素对照品,加无水乙醇制成每 1ml中含0.1mg的溶液,作为对照品溶液.再取除延胡索外 的其他处方量药材,按制备制成缺延胡索的阴性样品, 再同法制成阴性溶液.照薄层色谱法(中国药典2000年版 一 部附录?B)试验,吸取上述3种溶液各5,分别点于同 一 硅胶G薄层板上,以苯一丙酮(17:3)为展开剂,展开,取 出,晾干,置碘蒸气中熏至斑点显色清晰,挥去碘后,置紫外 光灯(365nm)下检视.供试品色谱中,在与对照品色谱相应 的位置上,显相同颜色的斑点.而阴性对照溶液在相应的 位置上无此斑点(见图1). 2.2香附的TIE鉴别取本品内容物5g,加石油醚(30, 60?)30ml,超声处理10min,放冷,滤过,滤液挥干,残渣加 醋酸乙酯lml使溶解,作为供试品溶液.另取一香附酮对照 品,加醋酸乙酯制成每lml含5ul的溶液,作为对照品溶液, 再取除香附外的其它处方量药材,按制备工艺制成缺香附 的阴性样品,再同法制成阴性溶液.照薄层色谱法(中国药 典2000年版一部附录VIB)试验,吸取上述3种溶液各5ul, 分别点于同一硅胶GF薄层板上,以正已烷一醋酸乙酯(17 :3)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(254nm)下检 视.供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同 颜色的斑点.而阴性对照溶液在相应的位置上无此斑点 (见图2). 2.3山柰的TLC鉴别取本品内容物2g,加石油醚(60, 90?)50ml,超声处理15min,放冷,滤过,滤液浓缩至lml,作 为供试品溶液.另取对甲氧基桂皮酸乙酯对照品,加甲醇制 成每lml含5mg的溶液,作为对照品溶液.再取除山柰外的 其它处方量药材,按制备工艺制成缺山柰的阴性样品,再同 法制成阴性溶液.照薄层色谱法(中国药典2000年版一部 附录?B)试验,吸取上述3种溶液各5ul,分别点于同一硅 胶G薄层板上,以正已烷一醋酸乙酯(8:2)为展开剂,展 开,取出,晾干,置紫外光灯(254nm)下检视.供试品色谱 中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点.而 阴性对照溶液在相应的位置上无此斑点(见图3). 2.4白芷的TLC鉴别取本品内容物5g,加乙醚50ml,浸 渍1h,时时振摇,滤过,滤液挥干,残渣加醋酸乙酯lml使溶 解,作为供试品溶液.另取欧前胡素,异欧前胡素对照品,加 醋酸乙酯制成每lml中各含lmg的溶液,作为对照品溶液. 再取除白芷外的其它处方量药材,按制备工艺制成缺白芷 的阴性的样品,再同法制成阴性溶液.照薄层色谱法(中国 药曲2000年版一部附录VIB)试验,吸取上述3种溶液各 5”l,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(30,60?)一 乙醚(3:2)为展开剂,在25?以下展开,取出,晾干,置紫外 光灯(365nm)下检视.供试晶色谱中,在与对照晶色谱相应 的位置上,显相同颜色的荧光斑点.而阴性对照溶液在相应 的位置上无此斑点(见图4). 第4期肖德华:伤痛宁胶囊质量标准研究?73? 12345 图1延胡索TLC图谱 1一延胡索乙素对照品 2,3,4一供试品 5一阴性对照 12345 图2香附的TLC图谱 1,2,4—供试品 3—Q一香附酮对照品 5一阴性对照 l234512345 图3山柰的TLC图谱图4白芷TIE图谱 1,2,4一供试品1,2,3一供试品 3一对甲氧基桂皮酸乙酸乙酯对照品4一欧前胡索,异欧前胡索对照品 5__阴性对照5__阴性对照 3含量测定 3.1色谱条件Cl8柱(Kron~l150x4.6ram,5um);流动相:甲 醇:水(4o:60);流速:1.0ml/nfin;检测波长248nm;理论塔板数按欧 前胡素计算应不低于20O0. 3.2供试品溶液的制备取本品10粒的内容物,混匀,取约lg, 精密称定,置索氏提取器中,加乙醚提取6h,乙醚液置水浴上蒸 干,残渣加甲醇使溶解,置10ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀, 滤过,取续滤液,即得. 3.3对照品溶液的制备精密称取欧前胡素对照晶5.1ing,置 10Oml容量瓶中,加甲醇溶解,并稀释至刻度,摇匀,精密量取5ml, 置10ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得(每h中含欧前 胡瓤(P_55mg). 3.4阴性对照溶液试验按处方比例和工艺,同法制成全方缺白 芷的阴性对照液,按样品供试液的制备方法制备,测定.结果表 明,在与欧前胡素对照品色谱相应的位置上无干扰峰出现,说明 方中其它成份对测定结果无影响.对照品,供试品和阴性对照品 的HPLC图谱见图5. 12.3 ? 图5伤痛宁胶囊HPLC图 1一欧前胡素对照品2一供试品溶液3一缺白芷阴性样品溶液 3.5线陆关系考察精密吸取浓度为0.051ng/ml的欧前胡素 对照品溶液2,4,6,8,10ml,分别置10ml量瓶中,加甲醇稀释至刻 度,摇匀,精密吸取10ul进样,测定其峰面积积分值,以浓度为横坐 标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线,其回归方程为:A= 16(I3316.85×C一25O3.69,r=O.9999.结果表明欧前胡素在0.1一 O.51g范围内具有良好的线性关系. 3.6精密度试验精密吸取同—份斌品溶液10ml,按色谱条件 重复进样5次,测定其峰面积,结果RSD为0.43%,表明精密度良 好. 3.7稳幽文验分别精密吸取同—份供试品溶液10ul,于0,3, 6,9,12h进样,测定峰面积,结果RSD为0.59%,表明供试品溶液 在12h内稳定性良好. 3.8重现l生试验取同—批样品(批号为axmzos)5份,按供试 品溶液制备方法平行处理并测定,计算含量,测得平均值为0. 085mg/粒,RSD为1.22%,表明重现性良好. 3.9回收率试验精密称取已知含量为0.2553mg/g(批号 20Q21206)样品0.5g,分别精密加入欧前胡素对照品溶液(0. 0510mg/m1)2.5ml,gpo.1275mg,低温干燥挥去甲醇后,按上述含量 测定项下的方法测定含量,并计算回收率(结果见表1). 表1加样回收率试验结果 注:平均回收率为99.67%,RSD为1.54% 3.10样品的测定取10批样品按含量测定项下方法测定并计 算含量(结果见表2). 表2伤痛宁胶囊中欧前胡素含量测定结果(n=3) 注:平均值o.o~3mr,/粒 ? 74? 第21卷第4期湖南中医杂志Vo1.21N4 2005年7月 HUNANJOURNALOFTRADITIONALCHINESEMEDICINEJu1加晒 桃红四物汤治疗运动损伤性血瘀证机理研究 广少~lhtg学院(510o75)王大安肖雅?周小青?罗尧岳? 摘要目的:探讨挟红四物汤治疗运动损伤性血瘀证机理,观察桃红四物汤对急性缺血组织病理改变及细胞凋亡干预作用.方法: 采用结扎冠状动脉左前降支的方法复制急性组织缺血模型,15条犬随机分为对照组,模型组,挟红四物汤组,每组5务.采用HE染色及 DNA末端标记法(TI1J)分别观r{慰日织病理变化和细胞凋亡的变化.结果:对照纽组织无明显变性与坏死等改变,仅见少量凋亡阳性细 胞;模型纽有明显组织坏死,细胞凋亡增多;桃红四物汤组示细胞坏死及细胞凋亡均较摸型纽显着减轻.结论:桃缸四物汤可有效却制细 胞坏死及凋亡,减轻组织损伤,对缺血纽织有保护作用. 主题词运动损伤/中医药疗法血瘀桃红四物汤/治疗应用 祖国医学认为血瘀证应包括两个方面.—是血不循经,溢出 脉外,不能及时消散的—类瘀血.二是运行于脉中之运行不畅的 瘀血.由此可见目前运动损伤造成的血瘀证均可以用此种理论 加以分析,并且可以以此为据指导治疗.目前,临床上多用桃红 四物汤为基础方进行加减配伍治疗运动损伤性血瘀证,并目取得 了很好的疗效.为了了解桃红四物汤治疗运动损伤性血瘀证的 具体机理,笔者就桃红四物汤对急性gtgn,~织病理改变及细胞凋 亡的干预作用进行了实验研究. 1实验材料 1.1实验运动和药物健康成年杂种犬,体重11-I-3kg,雌雄不 拘;桃红四物汤按文献剂量购买中药材,浸泡,煎煮,浓缩,灭菌, 4~C冷藏保存备用;戊巴比妥钠由上海化学试剂厂进口分装. 1.2实验器材DH一1动物人工呼吸机(型号:DH一1,浙江医科 大学医疗仪器实验厂制造,流量:10ml/kg,呼吸频率20次/分,呼 吸比1:2);1t3双目摄影生物显微镜(麦克奥迪实业集团公司);体 视显微镜图象系统SNZ一143(麦克奥迪实业集团公司);61—1海 鸥照相机(上海光耀电影照相厂);Finesse325(印mShanDon lirmtedAs嘶吣r.al,llicorn,shI妯,WATIPRIJK);气管插管及相 应的手术器械. 2实验方法 2.1动物模型复制参考文献用戊巴比妥钠(3kg?iv)麻 醉犬,固定,铺巾单,行气管插管并连接动物呼吸机.分离股静脉, 插管予0.9%生理盐水补液.取胸骨正中切口暴露心脏,剪开心 包并缝至胸壁呈摇篮状,于冠状动脉左前降支第二角支处穿线, 对照组仅穿线不结扎,余各组行完全结扎. 2.2动物分组与给药实验分组:先按体重分层,再用随机数字 表达随机分为3组:对照组廷组四物汤组,每组5条.造 模前灌胃给药,每天1次,给药剂量20/kg,连续5天,对照组及 模型组: 蒸t留水;桃红四物汤(含生药14.Og/lO~,,.d).连续灌胃5d, 并于第5d灌胃后2h行完全结扎术,对照组仅穿线不结扎. 2.3心肌组织切片的制备实验结束后处死动物,摘取动物心 脏于4%多聚甲醛中固定,常规石蜡包埋,每隔lmm横断面切 数张4um厚的切片,分别做HE染色及细胞凋亡检测. 2.4心肌细胞凋亡原位标记检测及计算机图象分析每张 切片取3个不同部位的切片各2张,以脱氧核苷酸转移酶 (TdT酶)介导的荧光的dUTP缺口末端标记法(TdT—medi- atedfluoreseein—dUTPniekendlabeling,TUNEL)标记凋亡细 4讨论 中药复方制剂成分复杂,薄层鉴别是有效的方法,本实 验所得的TIC条件能检出伤痛宁胶囊中所含延胡索,香附, 山柰,白芷;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上, 显相同颜色的斑点,而阴性样品无干扰,所建鉴别方法专属 性强. 方中自芷中含香豆精类成分,以欧前胡素含量较高. 据文献报道,欧前胡索的含量测定方法可采用薄层扫描法 及高效液相色谱法【3等,因此采用高效液相色谱法测定本 品中欧前胡素的含量.试验结果表明,缺白芷的阴性溶液 无干扰,且样品分离效果好.测定10批样品中欧前胡素含 量,其平均值为0.0803rag/粒.考虑大生产时的损耗等问 题,现按平均含量的75%折算,暂定本品限度为每粒中含欧 前胡素不得少于0.06rag. 参考文献 [1]中华人民共和国药典2000年版(一部)[s].北京:化学工业 出版社,2O00.23. 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