RP-HPLC法测定钙佳锌口服液中维生素D2含量

RP-HPLC法测定钙佳锌口服液中维生素D2含量 RP-HPLC法测定钙佳锌口服液中维生素 D2含量 2010年5月第7卷第13期?药品鉴定? RP—HPLC法测定钙佳锌口服液中维生素D2含量 范世德,廖晓君,邱正霞,张艳,李平,蒋巧梅 (四川升和制药有限公司,四川成都611130) [摘要】目的:建立RP-HPLC测定钙佳锌口服液中维生素D2含量的方法.方法:采用Agilent-C18(4.6mmxl50mm,5Ixm) 色谱柱;流动相:甲醇一0.02mol/L乙酸铵溶液(95:5);检测波长:265nm;流速:1.0ml/min,柱温:30cc.结果:维生素D2 在0.0101~0.4040I,zg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=1.0000),平均回收率为99.70%,RSD=3.11%(n=9).结论: 本方法具有快速,简便,准确,检验成本低的优点,可用于钙佳锌口服液中维生素D的质量控制. 【关键词】钙佳锌口服液;维生素D2;含量测定;反相高效液相色谱法 【中图分类号】R927.2【文献标识码】B【文章编号】1673-7210(2010)05(a)-059 —03 Contentdetermination0f,,itaminD2inGaijiaxinOralLiquidbyRPiHPLC FANShide,LIA0Xiaojun,QIUZhengxia,ZHANGYon,LIPing,JIANGQiaomei (SichuanSunnyhopePharmaceuticalCo..Ltd..ChengdU611130.China) 『Abstract]Ob2一.iective:Toesta — bli l8 sh f4 a . methodforthe , conte ) ntdeterminationo . fvitaminDinGaiiiaxin0ralLiquidbyRP HPLC.Methods:TheAgilentC6mmxl50mm5IxmcolumnwasusedThemobilephasescons istedofmethanoland 0.02mol/L— ammoniumacetatef95:5),theflowratewas1.0ml/minandthedetectionwavelengthWasat2 65nm,thecolumn temperatureat30oC.Results:ThelinearrangesofvitaminD2wasat0.0101-0.4040g(r=1.00 00),theaveragerecovery was99.70%withaRSDof3.11%fn=9).Conclusion:Themethodissimple,accurate.low— costandcanbefordeter- minationofthecontentsofvitaminD2inGaiiiaxinOralLiquid. [Keywords]GaijiaxinOralLiquid;VitaminD2;Determination;RP-HPLC 钙佳锌口服液是以葡萄糖酸钙,乳酸钙,乳酸锌,维生素D: 为主要原料,加入乳酸,安赛蜜,甜橙油,苯甲酸钠辅料制成 的保健食品,具有补钙的保健功能.其中的维生素D具有促 进人体对钙的吸收功能,其含量少.遇光或空气容易变质,热 稳定性差.钙佳锌口服液现有质量标准中维生素D的含量 测定方法按GB/T5413.9—1997《婴幼儿配方食品和乳粉维 生素A,D,E的测定》规定的检测方法,采用正相HPLC法测 定…,该方法具有分析成本高,供试品溶液制备过程繁琐的不 利因素.并可能在配制供试品溶液过程中因温度过高导致维 生素D的损失,使其测定值较实际含量值低.此外,使用该 方法所得HPLC色谱图中维生素D:的保留时间差异较大, 或无法检测出维生素D2.采用《中国药典}2005年版二部中 维生素D原料的含量测定方法检测本制剂中维生素D含 量亦同样存在上述问题12].近年来文献报道的有关维生素D: 含量测定方法p,用于本品中维生素D:的测定时分离效果 仍不理想,无法满足本品制剂质量控制的需要.本文对钙佳锌 口服液中维生素D的含量测定方法进行了研究,提出对本品 原质量标准中维生素D2的含量测定方法(GB7I'5413.9—1997 《婴幼儿配方食品和乳粉维生素A,D,E的测定》)进行改进, 使用RP—HPLC法测定本品溶液中维生素D:的含量. 1仪器与试药 l200高效液相色谱仪和色谱工作站(美国Agilent); pHS一3C精密pH计(上海精密科学仪器有限公司).维生素D 对照品(中国药品生物制品检定所,批号:100155—200505); 【通讯作者】范世德,男,工程师,执业药师,主要从事药品生产质量管理 工作 钙佳锌口服液(四川升和制药有限公司,批号:090603,090604, 090605,090701,090702,090703);甲醇为色谱纯;水为超纯 水;其余试剂为分析纯. 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱:Agilent—C18(4.6mmxl50mm,5m)色谱柱;流 动相:甲醇一0.02mollL乙酸铵溶液(95:5);检测波长:265nm; 柱温:30oC;流速:1.0ml/min;进样量:2Ol;理论板数以维生 素D:峰计算应不低于1500,维生素D峰与其他杂质峰均 能得到良好分离,分离度符合要求(R>2.0). 2.2溶液的制备 2.2.1对照品溶液的制备精密称取维生素D对照品适量, 置棕色量瓶中,加乙醇溶解制成20~g/ml的溶液,并充氮气 保护,作为对照品贮备液.精密量取对照品贮备液适量,置棕 色量瓶中,加乙醇稀释制成1p~g/ml的溶液,并充氮气保护, 作为对照品溶液. 2.2.2供试品溶液的制备精密量取钙佳锌口服液25rnl,置 分液漏斗中,加入饱和NaC1溶液25ml,分别以50IIll乙醚 萃取3次,合并乙醚层,以5g无水硫酸钠干燥除尽乙醚层 中的水,过滤,以10ml乙醚洗涤无水硫酸钠2次,合并乙醚 至棕色圆底烧瓶中,置旋转蒸发仪在3O?水浴中蒸干除尽乙 醚,残渣用少量乙醇溶解,转移至5ml棕色量瓶中,用乙醇 洗涤滤器,定容,并充氮气保护,即得供试品溶液. 2.2.3空白辅料溶液的制备取不含维生素D的全处方其他 成分的辅料制备溶液.按"2.2.2"项下方法制备空白辅料溶 液,即得维生素D:的空白辅料溶液. CHINAMEDICALHERALD巾国医药写掘59 ? 药品鉴定? 2.3干扰试验 分别吸取维生素D:对照品,供试品,空白辅料溶液,溶 剂乙醇各20,进样.结果表明空白辅料溶液和溶剂乙醇不 干扰维生素D:的含量测定,见图l. , 图1HPLC色谱图 (A.空白辅料溶液;B_对照品;C.供试品;D.乙醇) Fig.1HPLCchromatography (&Blankexcipientsolution;B.Referencesubstance;CSample;D.Ethanol solution) 2.4线性范围考察 分别精密吸取维生素D:对照品贮备液适量,置棕色量瓶 中.以乙醇稀释并定容制得0.505,1.01,2.02,3.03,6.06,10.10, 20.20V~vgml的系列维生素D2对照品溶液.分别精密吸取上 述溶液各20,进样,记录峰面积积分值.以维生素D.含量 为横坐标.峰面积为纵坐标进行线性回归,回归方程:A= 65.369Dn4103(r=-I.000O).维生素D2在0.0101-0.4040/xg 范围内与峰面积呈良好的线性关系. 60巾?暖药暑曩CHINAMEDICALHERALD 2010年5月第7卷第l3期 2.5精密度试验 精密吸取20的维生素D:对照品溶液(浓度:1p~n1), 连续进样6次.峰面积的RSD=0.18%(n:6),结果表明仪器 精密度良好. 2.6稳定性试验 因本品中维生素D:对光,热,氧均不稳定,故考察样品 溶液的稳定性情况.将"2.2.2"项下供试品溶液室温放置0, 0.5,1.0…203.0…408.0h后,分别进样20,峰面积的RSD= 0.42%(n=7),结果表明室温放置8h内样品基本稳定. 2.7重复性试验 取同一批样品,按"2.2.2"项下方法制备6份供试品,分 别测定色谱峰面积,平均含量占标示量的百分率为100.3%, RSD=I.60%(n=6).结果表明本法重复性良好. 2.8回收率试验 按13服液处方量称取空白辅料.并按标示量的80%, 100%及120%加入维生素D:对照品贮备液,混匀后,按"2.22" 项下方法制备溶液,按上述色谱方法测定维生素D2含量,其 平均回收率为99.7%,RSD=3.11%,测定值接近真实值,方法 准确可靠,见表1. 表1回收率试验 Tab.1Recoverytest 2.9样品含量测定 取6批钙佳锌I:1服液样品.分别按"2.2.2"项下方法制成 样品溶液,分别精密吸取对照品溶液,样品溶液,各20,进 样,记录色谱峰面积,外标法计算维生素D含量,见表2. 表2样品含量测定(%.~--61 Tab.2Contentdeterminationofsamples(%,,I= 3讨论 维生素D(vitaminD)为固醇类衍生物,是一种脂溶性维 生素,主要包括维生素D和维生素D,.主要功能是调节体内 钙,磷代谢,维持血钙和血磷的水平,从而维持牙齿和骨骼的 正常生长就发育.儿童缺乏维生素D易发生佝偻病.因此, (下转第62页) ? 药品鉴定? (附录?K)测定fI】.结果见表1. 2.3浸出物测定 取不同产地何首乌药材(过2号筛)约4.0g,按照《中国 药典》2005年版一部醇溶性浸出物测定法项下冷浸法(附录 XA)测定【l1,用稀乙醇作溶剂.结果见表1. 2.4结果 水分含量最高值为10.77%,最低值为4.54%,平均值为 7.6O%,样品中水分含量最高值和最低值相差6.23%.相差 1倍以上. 总灰分量最高值为6.o4%,最低值为2.52%,平均值为 3.41%,样品中总灰分含量最高值和最低值相差3.52%,相差 1倍以上. 酸不溶性灰分量最高值为0.71%,最低值为0.22%,平均 值为0.43%.样品中酸不溶性灰分含量最高值和最低值相差 . O.49%,相差l倍以上 浸出物含量最高值为40.24%,最低值为20.03%,平均值 为28.6%,样品浸出物含量最高值和最低值相差20.21%,相 差1倍以上. 3讨论 实验过程对何首乌浸出物测定方法进行了研究.选择水 及不同浓度乙醇作为浸出溶剂,结合热浸,冷浸等方法进行 考查.结果:冷浸法50%乙醇浸出物含量最高,所以本文何首 乌浸出物测定法采用醇溶性浸出物测定法项下冷浸法,用稀 乙醇作溶剂. 16批何首乌样本水分,总灰分,酸不溶性灰分及浸出物 201O年5月第7卷第l3期 含量最高值和最低值均相差1倍以上.说明不同产地何首乌 质量存在较大的差异.有必要在控制标准中增加这些检查项 目,以便更好地控制其质量.笔者建议:水分不得过l0.0%. 总灰分为不超过6.0%,酸不溶性灰分不超过1.0%,浸出物含 量不得少于20.0% 笔者在实验中还对这l6批何首乌样本的重金属,砷盐 进行了实验研究,结果显示,l6批何首乌样本重金属限量 均>10/100万且<20/100万.砷盐限量均<2/100万. 【参考文献1 【1]国家药典委员会.中华人民共和国药典【s卜一部.北京:化学工业出版 社.2005. [2】彭晓波.何首乌的研究与应用田.中国现代药物应用,2008,2(19):117. 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(收稿日期:2010—01—27) (上接第60页) 在婴幼儿配方食品中大多添加维生素D.近年来国内外学者 对维生素D的作用进行了广泛的研究,周文娣等191综述了近 年来维生素D受体及维生素D作用进展,表明维生素D可 预防骨质疏松症,心脏病,1型糖尿病,自身免疫性疾病和一 些肿瘤等.因此,维生素D在临床中的应用将更加广泛.但过 多服用维生素D将引起急性中毒,长期摄入过多的维生素D (5000IU),将引起高血钙和高尿钙.特征为食欲减退,过度 口渴,恶心,呕吐,烦躁,体弱,便泌,腹泻交替出现,严重者将 因肾钙化,心脏和大动脉钙化而死亡.因此准确控制婴幼儿 配方食品中维生素D的含量尤为重要.以便为临床提供可靠 的用量参考. 维生素D:原料为无色针状结晶或白色结晶性粉末,无 臭,无味,不溶于水,易溶于乙醇,乙醚,氯仿,丙酮,遇光或空 气容易变质,热稳定性差.在各种制剂中维生素D的含量均 比较低,建立制剂中维生素D含量测定方法时其提取与分离 是关键技术,应充分考虑维生素D的理化性质,防止维生素 D2在提取过程中因氧气,光,热的影响而降解,尽量避免测定 结果低于实际值.该方法中供试品溶液与对照品溶液的制备 充分考虑了维生素D:的理化性质,采用乙醚萃取样品中的 维生素D,3次后萃取完全,而后用无水硫酸钠除去乙醚层 中少量的水,置旋转蒸发仪在低于30?水浴中快速除去乙 醚.该制备方法避免了氧气,光,热的影响,并缩短了样品溶 液制备过程中的受热时间,有利于样品稳定.该含量测定方 62巾蕾医药暑攉CHINAMEDICALHERALD 法快速,简便,准确,检验成本低,明显优于本品原质量标准 中维生素D2含量测定方法(GBfI'5413.9—1997(婴幼儿配方 食品和乳粉维生素A,D,E的测定》),可用于钙佳锌口服液 中维生素D的质量控制. 【参考文献】 [1]中华人民共和国国家质检总局.婴幼儿配方食品和乳粉维生素A,D, E的测定GB厂r5413.9—1997中华人民共和国国家标准『S1.北京:中华 人民共和国国家标准出版社,1997. [2】国家药典委员会.中华人民共和国药典『S】.二部.北京:化学工业出版 社.2005:672. 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