（5）磷酸盐缓冲液 8gNaC

（5）磷酸盐缓冲液 8gNaC (5)磷酸盐缓冲液 8gNaCl,0.2gKCl, 1.44gNa2HPO4, 0.24g KH2PO4,加水定容到1L，用HCL调节溶液的pH值至7.4，高压灭菌，室温保存。 (6)MTT溶液 MTT用磷酸盐缓冲液配成5.0mg/mL的溶液。过滤除菌，4度避光保存。 (7)裂解液 DMSO。 (8)EGF国家品 EGF样品。 2. 实验材料 (1)96孔培养板 (2)Tip 200μL、20μL 3. 实验仪器 (1)酶标仪 (2)微量移液器 100μL、20μL (3)37?培养箱 【实验步骤】 1.种板 收集对数生长期的BalB/c3T3细胞，悬浮于完全培养液1中，调整细胞浓度为6.0×104/mL左右。 2.将细胞悬液接种于96孔板中，每孔100μL，37度5%CO2条件下培养过夜。 3.饥饿 吸去上清液，加入完全培养液2，每孔100μL，37度5%CO2条件下培养过夜。 4.加样 4(1 标准品预稀释 用完全培养基2将标准品稀释至50U/mL起始。 4(2样品预稀释 用完全培养基2将样品稀释至和标准品相同浓度起始，或按蛋白含量将样品稀释至50U/mL起始。 4(3 将预稀释好的标准品、样品在稀释板上做4倍稀释。 4(4 吸去经饥饿处理细胞板各孔上清液，将稀释板上4倍稀释好的标准品、样品加入细胞板，每稀释度做2孔，每孔100μL，37度5%CO2条件下培养72h。由于边缘效应，一般A排，1、12列不用于检测。 5(每孔加入MTT溶液20μL，37度5%CO2条件下培养5h。 6(每孔吸去80μL上清液，加入裂解液100μL,室温下放置30min后比色，测定波长490nm,记录测定结果。 【实验数据处理】 采用直线回归计算法进行处理。分别计算各试验样品的半效稀释倍数(即从样品溶液至相当于标准品50%最大效应点的稀释倍数)，并按下式计算试验结果: 待检样品预稀释倍数 待检样品半效稀释倍数 待检样品效价=标准品效价 × —————————— × —————————— 标准品预稀释倍数 标准品半效稀释倍数 实验五 促性腺激素类药物的药理学作用观察 促卵泡激素(FSH)和促黄体生成激素(LH)是两种主要的促性腺激素，它们因主要作用于卵巢和睾丸(即性腺)而称为促性腺激素。没有促性腺激素，性腺就会萎缩，如果在儿童期缺乏这些激素，性腺就不能正常发育。 在女性，FSH和LH的作用各不相同，同时又互补，作用于卵泡的生长发育，以及关键卵巢激素如雌激素和黄体酮的合成和分泌。FSH 促进卵泡发育，而 LH 是启动黄体期的主要 激素。FSH和LH激素水平降低或失衡将导致无排卵(停止排卵)和不育。相反，在绝经后或不能产生雌激素的女性， FSH 水平可能会升得很高，因为失去了雌激素对下丘脑的负反馈。在男性， FSH 主要作用于睾丸生精小管的成熟，其靶细胞是支持细胞(Sertoli细胞)，睾丸内雄激素高水平时(是睾丸内LH作用的结果，可刺激睾丸间质细胞(Leydig细胞)发育和分泌睾酮)，FSH可诱导精子生成。 卵巢是女性产生卵子的器官，卵子在卵巢中产生，其形成过程较为复杂。于胎儿期卵巢中已开始减数分裂过程，初级卵母细胞于第一次减数分裂的前期停滞，直到青春期某些初级卵母细胞再继续进行期分裂过程。通常一个月经周期中有一个卵子成熟，于排卵前的片刻卵母细胞完成第一次减数分裂，形成一个次级卵母细胞和一个极体(第一极体)。离开卵巢的次级卵母细胞进入输卵管，若受精则分裂成卵子和第二极体;若未受精，则次级卵母细胞退化和被吸收。另外，第一次减数分裂时形成的第一极体，也可分裂成两个第二极体。因此，一个卵母细胞完成减数分裂后，形成一个卵子和三个极体(极体无生殖功能，一般不参与胚胎形成)。 促性腺激素的特定功能如下表: 激素 在女性的作用 卵泡刺激素 参与卵巢卵泡发育和成熟的关键激素，直至排卵。 刺激卵泡细胞分泌雌激素 黄体生成素 为诱导排卵和黄体形成所必须，需要它分泌激素来支持早孕。 在血液循环中与FSH一起作用于卵泡发育过程 人绒毛膜促性腺激素(hCG) 当卵泡发育到接近成熟时给hCG，可诱发排卵，继续应用可维持黄体功能。