花青素测定

花青素测定 花青素的测定 目的 花青素是类黄酮类色素中最重要的一种，广泛存在于植物花、果实、茎叶中，对这些器官的观赏价值和商品形状有重要价值。本实验学习花青素的提取及测定方法。 一、 实验原理 花青素在酸性溶液中呈红色，其颜色的深浅与花青素的浓度成正比。花青素酸性溶液的吸收高峰波长 4是530nm，摩尔消光系数为4.62×10，故可用分光光度法测定其含量。但是一些提取液中常有叶绿素存在，干扰测定。因此，需同时测定提取液在620nm(可溶性糖)和650nm(叶绿素的吸收值)波长下的光密度值，并用Greey公式准确计算出花青素的光密度值，才能计算花青素的含量。 二、 材料、设备及试剂 1. 材料 茶叶 2. 2. 设备 分光光度计、电子天平、水果刀、50ml具塞三角瓶、25ml容量瓶。 -13. 试剂 0.1 mol?L的盐酸乙醇溶液(8.3ml浓盐酸用95%乙醇稀释成1L)。 三、操作方法 1. 花青素的提取 取0.100g一串红和0.116g红花继木分别放在编号为1、2的三角瓶中，加10ml盐酸乙醇溶液，在60?水浴中加10ml提取液浸提30min，把溶液倒入25ml容量瓶中，再加5ml提取液浸提15min, 把溶液倒入25ml容量瓶中，再加5ml提取液浸提15min, 把溶液倒入25ml容量瓶中，共浸提1h，最后定溶到25ml。 -12. 测定 以0.1 mol?L的盐酸乙醇溶液做参比液，在分光光度计测定提取液在530nm、620nm、650nm波长下的光密度值。 四、实验结果 实验结果如下表 依据公式 1( 计算花青素的光密度值 OD=(OD-OD)-0.1(OD-OD) λ530620650620 2. 计算花青素含量 ODλV×1000000花青素含量(nmol/g)×=mε OD:花青素在530nm波长下的光密度 λ 6ε:花青素摩尔消光系数4.62×10 v:提取液总体积(ml) m:取样质量(g) 1000000: 计算结果换算成nmol的倍数 由一串红测得结果则有:OD=(1.360-0.024)-0.1(0.043-0.024)=1.3341 λ 46所以，花青素含量(nmol/g)=1.3341/4.62/10×25/0.100×10=7219.156 由红花继木测得结果则有:OD=(0.370-0.062)-0.1(0.183-0.062)=0.2959 λ 46所以，花青素含量(nmol/g)=0.2959/4.62/10×25/0.116×10=1380.337 五、结果分析与讨论 从实验实验可以看出，一串红的花青素含量比红花继木的花青素含量高很多。一串红为红色，而红花继木为蓝色，这表明花青素含量的多少在极大程度上反应了花的红色程度。说明，花青素含量越多，花呈现的红色就越深。 本实验严格按照实验要求操作，在提取过程中谨慎小心，未造成液滴溅出的现象，且用盐酸乙醇反复清洗三角瓶并转移至容量瓶中，保证了实验的准确性。使用分光光度计时，也提前半小时开启预热，排气，提高实验结果的准确性。 本实验让我们学习和掌握花青素的提取和测定方法，进一步巩固了分光光度计的使用方法。但由于材料只做了单一的比较，不能说明一串红的花青素含量一定高于红花继木，若要对其进行全面分析，还需大量收集材料，进一步深入研究。