不同制药企业的维C银翘片质量研究比较

不同制药企业的维C银翘片质量研究比较 学生姓名：潘学康 指导老师：黄若干 中级职称 [摘要] 目的：研究不同制药企业生产的维C银翘片质量情况以及对其质量问进行分析，为药监部门正确地评价药品质量和监督药品生产企业的生产过程提供具有指导意义的理论依据。方法：通过建立维C银翘片中绿原酸和甘草苷的HPLC含量测定方法,并测定和比较广西10家制药企业生产的20批产品的片重、绿原酸及甘草苷含量。结果：10家企业生产的产品，片重、绿原酸及甘草苷含量均有较大差异。结论：由于不同的生产环境、生产、生产设备、药材产地及企业诚信度、药监部门监管力度质量标准局限性等因素的影响，使各企业生产的同一产品，其质量存在着较大差异。 [关键词] 维C银翘片；质量研究；维生素C；绿原酸；甘草苷 维c银翘片系由金银花、甘草等中药中加入维生素c、对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏而组成的复方中西结合制剂，具有辛凉解表，清热解毒的功效，临床常用于流行性感冒引起的发热头痛，咳嗽口干，咽喉疼痛等症，因疗效好，价格低廉，深受患者欢迎。现全国生产该品种的厂家有近400家，生产工艺的依据是国家药品标准(WS3一B-4000-98—2003)中的制法，有患者反映，不同制药企业生产的维C银翘片，疗效存在较大差异。而现行版维c银翘片质量标准，对控制该产品的质量，还存在有局限性，不能全面控制本品的质量。参照有关文献[1][2]，本文通过建立绿原酸和甘草苷的含量测定方法，并对广西10家制药企业生产的20批产品进行含量测定和比较，分析维C银翘片的质量差异问题。 1 仪器、样品与试药  日本岛津公司LC—10ATVP高效液相色谱仪，SPD—10AVP紫外检测仪;威玛龙色谱工作站;BP211D十万分之一电子天平;乙腈为一级色谱醇(天津四友);其余试剂均为分析纯。样品从南宁市各药店购买（企业代号为a，b，c，d，e，f，g，h，i，j）。绿原酸和甘草苷对照品均购自中国药品生物制品检定所。 2 方法与结果 2．1绿原酸的含量测定 2.1.1色谱条件 色谱柱：日本岛津公司BDS C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相：乙腈－0.2%磷酸溶液（15：85），流速：1.0ml/min，检测波长：327nm，进样量10μl。 2.1.2线性关系考察 精密吸取绿原酸对照品试液（每1ml含绿原酸0.1015mg）1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、10ml，分别置10ml棕色的量瓶中，加甲醇至刻度，精密吸取上述对照品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。结果表明绿原酸在0.1015～1.015μg之间与峰面积具有良好线性关系，回归方程为Y=96198.1X-101.6，r= 0.9998。 2.1.3专属性试验 对照品溶液的制备    精密称取绿原酸对照品适量，加甲醇配制成每1ml含绿原酸50μg的溶液。 供试品溶液的制备  取本品20片除去包衣，精密称定，研细，取0.3g，精密称定，置50ml棕色量瓶中，加流动相约40ml，超声处理(功率300 W，频率40 kHz)30分钟，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 阴性样品溶液的制备    按处方配制不含金银花的阴性样品，按拟定的方法制备成阴性样品溶液。 测定  取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液分别注入液相色谱仪，得图1。在绿原酸出峰处（保留时间约12.96min）无干扰。说明方法专属性强。           A：绿原酸对照品 B：供试品 C：缺金银花阴性样品 图1： 绿原酸HPLC色谱图 2.1.4精密度试验 精密吸取绿原酸对照品溶液（50.8μg／ml）10μl重复进样6次，测定峰面积值，求得平均峰面积481164，相对标准偏差RSD为1.21% ，表明进样精密度良好。 2.1.5重现性实验 取同一批维C银翘片，分别平行制备6份供试品溶液，进样测定，平均含量为10.1mg/g，RSD为1.52%，说明本法重复性良好。 2.1.6加样回收率试验 精密称取含绿原酸10.1mg／g的维C银翘片0.15g，共9份，置50ml棕色量瓶中，设定为3个浓度（每个浓度3份），低浓度分别加0.2003mg／ml绿原酸对照品溶液各4ml、中浓度分别加0.2003mg／ml绿原酸对照品溶液各5ml、高浓度分别加0.2003mg／ml绿原酸对照品溶液各6ml，并用甲醇稀释至刻度，进样测定，平均回收率为99.0%，RSD为1.0%（见表1）。 表1 绿原酸加样回收率试验结果 编 号 取样量 （ml） 样品 含量 （mg） 加入量 （mg） 测得量 （mg） 回收率 （%） 平  均 回收率 （%） RSD（%） 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0.1503 0.1524 0.1498 0.1517 0.1532 0.1499 0.1489 0.1500 0.1502 1.5180 1.5392 1.5130 1.5322 1.5473 1.5140 1.5039 1.5150 1.5170 0.8012 0.8012 0.8012 1.0015 1.0015 1.0015 1.2018 1.2018 1.2018 2.3064 2.3348 2.2950 2.5117 2.5378 2.5135 2.6781 2.6997 2.7202 98.4 99.3 97.6 97.8 98.9 99.8 97.7 98.6 100.1 98.7 0.9 2.1.7稳定性试验 取同一批号的维C银翘片供试品溶液（保存于室温条件下），于0，1，2，3，4，8，12h分别测定峰面积一次， 计算得平均峰面积为944894，相对标准偏差RSD为0.95%，说明在12小时内完成本实验对测定结果不影响。 2.1.8样品的测定 取本品20片除去包衣，精密称定，研细，取0.3g，精密称定，置50ml棕色量瓶中，加流动相约40ml，超声处理(功率300 W，频率40 kHz)30分钟，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。测定结果见表3。 2．2甘草苷的含量测定 2.2.1色谱条件  色谱柱：日本岛津公司BDS C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相：乙腈－水-冰乙酸（20：80：1），流速：1.0ml/min，检测波长：275nm，进样量10μl。 2.2.2线性关系考察 精密吸取甘草苷对照品试液（每1ml含甘草苷0.1040mg）1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0ml，分别置10ml棕色的量瓶中，加甲醇至刻度，精密吸取上述对照品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。结果表明甘草苷在0.104～0.728μg之间与峰面积具有良好线性关系，回归方程为Y=62066.9X-37.0，r= 0.9997。 2.2.3专属性试验 对照品溶液的制备    精密称取甘草苷对照品适量，加甲醇配制成每1ml含甘草苷40μg的溶液。 供试品溶液的制备  同绿原酸[含量测定]项下。 阴性样品溶液的制备    按处方配制不含甘草的阴性样品，按拟定的方法制备成阴性样品溶液。 测定  取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液分别注入液相色谱仪，得图2。在甘草苷出峰处（保留时间约15.13min）无干扰。说明方法专属性强。       A：甘草苷对照品 B：供试品 C：缺甘草阴性样品 图2： 甘草苷HPLC色谱图 2.2.4精密度试验 精密吸取甘草苷对照品溶液（41.6μg／ml）10μl重复进样6次，测定峰面积值，求得平均峰面积248056，相对标准偏差RSD为1.13% ，表明进样精密度良好。 2.2.5重现性实验 取同一批维C银翘片，分别平行制备6份供试品溶液，进样测定，平均含量为8.3mg/g，RSD为1.34%，说明本法重复性良好。 2.2.6加样回收率试验 精密称取含甘草苷8.3mg／g的维C银翘片0.15g，共9份，置50ml量瓶中，设定为3个浓度（每个浓度3份），低浓度分别加0.1670mg／ml甘草苷对照品溶液各4ml、中浓度分别加0.1670mg／ml甘草苷对照品溶液各5ml、高浓度分别加0.1670mg／ml甘草苷对照品溶液各6ml，并用甲醇稀释至刻度，进样测定，平均回收率为99.0%，RSD为1.0%（见表1）。 表1 甘草苷加样回收率试验结果 编 号 取样量 （ml） 样品 含量 （mg） 加入量 （mg） 测得量 （mg） 回收率 （%） 平  均 回收率 （%） RSD（%） 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0.1511 0.1506 0.1508 0.1520 0.1499 0.1528 0.1532 0.1540 0.1508 1.2541 1.2500 1.2516 1.2616 1.2442 1.2682 1.2716 1.2782 1.2516 0.6680 0.6680 0.6680 0.8350 0.8350 0.8350 1.0020 1.0020 1.0020 1.9210 1.9073 1.9056 2.0908 2.0675 2.0873 2.2486 2.2682 2.2306 99.8 98.4 97.9 99.3 98.6 98.1 97.5 98.8 97.7 98.5 0.8 2.2.7稳定性试验 取同一批号的维C银翘片供试品溶液（保存于室温条件下），于0，1，2，3，4，8，12h分别测定峰面积一次， 计算得平均峰面积为296952，相对标准偏差RSD为1.02%，说明在12小时内完成本实验对测定结果不影响。 2.2.8样品的测定 直接取绿原酸[含量测定]项下的供试品溶液，即得。测定结果见表3。 表3  维C银翘片中绿原酸和甘草苷含量测定结果比较表 企业代号 产品批号 平均重量（g/片） 绿原酸含量（mg/片） 甘草苷（mg/片） a 070604 0.3241 3.42 2.86 071203 0.3356 3.01 2.57 b 070520 0.2102 0.12 0.15 071105 0.2038 0.18 0.17 c 070803 0.2546 0.29 0.10 071004 0.2446 0.22 0.13 d 070908 0.3429 1.11 0.56 071209 0.3398 1.03 0.33 e 070615 0.2114 0.14 0.24 071016 0.2351 0.18 0.19 f 070316 0.2449 0.16 0.13 070412 0.2364 0.25 0.18 g 070706 0.2106 0.34 0.06 071002 0.2461 0.81 0.11 h 070518 0.2308 0.33 0.12 070613 0.2566 0.25 0.24 i 070812 0.3542 0.42 0.15 071115 0.3618 0.39 0.28 j 070428 0.2411 0.26 0.16 070611 0.2283 0.23 0.11 （注：以上片重均为糖衣片除去糖衣层后20片的平均片重） 3.结果与讨论 10个企业的20批维c银翘片中，片芯重量最重为0．3618g／片，最轻为0．2038g／片；绿原酸含量最高的为3.42mg／片，最低为0.12mg／片；甘草苷含量最高的为2.86mg／片，最低为0.11mg／片；各项考察指标均存在非常明显的差异。标准中处方药材总量为1008g，制成1000片，如药材质量均符合规定，并按标准工艺提取，浸膏粉平均收率一般为药材量的15～20％，即每片应含浸膏粉0.15～0.20g，再加上维生素C0.0495g、对乙酰氨基酚0.105g，每片片重至少达0.3g；处方中金银花含量为180g，甘草为90g，每片含金银花和甘草分别为0.18和0.09g，按照中国药典2005年版一部规定，金银花中绿原酸含量不得低于1.5%，甘草苷不得低于1.0%，按50%转移率计算，每片含绿原酸至少为1.35mg/片，含甘草苷至少为0.5mg/片；而20批产品大多数的片重、绿原酸、甘草苷均严重偏低。造成各企业的产品质量差异如此悬殊，笔者认为有如下原因，一是企业诚信度过低，使用质量差的药材投料，有些甚至偷工减料，掺入大量淀粉等辅料充当浸膏粉投料；二是生产工艺及生产设备落后，造成药材有效成分的提取不全，转移率低；三是不同产地的药材，有效成分含量也有差异；四是药监部门监管不力或不熟悉制药企业的整个工艺流程；五是药监部门存在腐败行为，发现违规行为不进行处理；六是药品质量标准存在局限性，给企业有空子可串。本文中的实验数据可反映出各制药企业的生产状况，为药监部门正确地评价药品质量和监督药品生产企业的生产过程提供具有指导意义的理论依据。企业偷工减料的行为严重损害了患者的身心健康，希望药监部门引起重视，另外，在现行质量标准中，所有中药成分均未进行含量测定，因此建议增加多个中药有效成分的含量测定方法或者建立指纹图谱，更好地完善本品质量标准，这样才能有效地保证药品质量，才能保证患者用药安全有效。 [参考文献] [1]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[M]．北京：化学工业出版社，2005．117． [2]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[M]．北京：化学工业出版社，2005．152．