[doc] 止嗽定喘丸（浓缩丸）质量标准研究

[doc] 止嗽定喘丸（浓缩丸）质量标准研究 止嗽定喘丸(浓缩丸)质量标准研究 第4卷第1期 2008年1月 亚太传统医药 Asia-PacificTraditionaIMedicine VoI.4NO.1 Jan.2008 止嗽定喘丸(浓缩丸)质量标准研究 汤宏敏,罗国安,王义明,罗永明 (1.江西中医学院,江西南昌330004;2.清华大学中药现代化研究中心,北京100084) 摘要:目的:制定提高止嗽定喘丸(浓缩丸)质量标准的方法.方法:用RP-HPLC法对制剂中的盐酸麻黄碱进行 含量测定,TLC法对止嗽定喘丸(浓缩丸)中苦杏仁进行定性鉴别,化学反应鉴别石膏.色谱柱:AllsphereODS (4.6mm~250mm,2.5m);流动相:乙腈:水(1mL?LI1磷酸和1mL?LI1三乙胺)(3/97);检测波长:207nrn.结 果:盐酸麻黄碱对照品在0.2246~1.1240gg范围内线性关系良好,平均回收率为98.O3,处方中的药材苦杏仁 能得到很好的专属性定性鉴别.结论:处方中苦杏仁的TLC定性鉴别 专属性好,君药麻黄中盐酸麻黄碱含量测 定方法准确,操作简单,专属性和重现性良好,可以有效用于止嗽定喘丸(浓缩丸)的质量控制. 关键词:止嗽定喘丸(浓缩丸);中药质量标准;RP—HPLC;TLC 中图分类号:R284.1文献标识码:A文章编号:1673-2197(2008)01—023—03 止嗽定喘丸(浓缩丸)来源于《伤寒论?辨太阳病 脉证并治》麻黄杏仁甘草石膏汤,由君药麻黄,苦杏 仁,石膏,甘草四味药材组方而成,具有辛凉宜泄,清 肺平喘之功效.君药麻黄在处方中取其清肺平喘止 咳之功_l2],但是其含有的盐酸麻黄碱作为处方药时不 良反应较多,包括头痛,失眠,肢体震颤和心悸不良反 应,临床有发生变态反应和严重过敏反应的报道l_3]. 这些常见的不良反应往往由于剂量过大引起.止嗽 定喘丸原质量标准收载于卫生部药品标准中药成方 制剂第二十册中l_1],只有甘草和麻黄的TLC定性鉴 别,本实验对止嗽定喘丸原质量标准进行了提高,在 原标准基础上,除去麻黄的TLC定性鉴别,增加了君 药麻黄的含量测定和苦杏仁的TLC定性鉴别,以及 石膏的化学鉴别反应.本文研究采用RP-HPLC法 测定止嗽定喘丸中盐酸麻黄碱的含量,TLC定性鉴 别苦杏仁以及石膏的化学鉴别反应,建立了控制止嗽 定喘丸质量的方法.该法供试品制备操作方便, 方法稳定,可靠,重现性好,可作为止嗽定喘丸质量标 准控制的指标. 1仪器与试剂 Waters2695高效液相色谱仪,Waters2996二 极管阵列检测器,中文版Empower色谱工作站;昆 山KQ-500E型超声提取器(功率500W,工作频率 40KHZ);梅特勒一托利多ExcellenceXP205分析天 平.乙腈:HPLC级别,Fisherscientific公司;磷酸: 分析纯,北京化工厂(批号20060310);甲醇:分析纯, 北京化工厂(批号20051028);水为mili—Q超纯水. 对照品:盐酸麻黄碱(中国药品生物制品检定所购置, 批号:110721—200512,为含量测定用对照品);样品: 市售(第一批,第--~tL,第三批). 2方法与结果 2.1钙盐及硫酸盐的鉴别反应 取本品0.5g,除去包衣,研细,加稀盐酸1mL,加 热使溶解,溶液显钙盐(《中国药典))2005年版附录 IV)和硫酸盐(《中国药典))2005年版一部附录IV)的 鉴别反应l_5]. 2.2苦杏仁薄层鉴别 取本品7g,除去糖衣,研细,加甲醇50mL超声 处理15min,滤过,滤液挥干,残渣加水20mL使溶 解,用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次20mL,合 并正丁醇层,蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,作为供 试品溶液;另取苦杏仁苷对照品适量,加甲醇制得每 收稿日期:2007—11—11 基金项目:国家十一五科技支撑计划(2006BAIO8B04—01) 作者简介:~(1982一),男,硕士研究生,研究方向:药物分析;罗~-~r(1946一),男,上海市人,清华大学教授,博士生导师,研 究方向:药物分析,E-mail:luoga@mail.tsinghua.edu.cn. 一 23— 第4卷第1期 2008年1月 亚太传统医药 Asia-PacificTraditionalMedicine Vo1.4No.1 Jan.2008 1.mL含3rag的溶液,作为对照品溶液;按处方配比, 取除杏仁外的其它药材,按制法工艺制成丸剂,再按 上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液;照薄层 色谱法(《中国药典))2O05年版附录?B)试验[5],吸取 上述两种溶液各lOlL,分别点于同一硅胶G薄层板 上,以氯仿,甲醇,水(26:14:1)为展开剂,展开,取出, 晾干,立刻喷以磷钼酸硫酸溶液(磷钼酸2g加入 20mL水,再将30mL浓硫酸缓慢注入水中,摇晃后 显色剂呈深蓝色),在105?烘箱中加热至斑点显色 清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上, 显相同颜色的斑点,阴性无干扰. 2.3止嗽定喘丸中盐酸麻黄碱的含量测定 2,3.1色谱条件 参照《中国药典92005年版一部有关含量测定方法 制定[5].用十八烷基硅胶键合硅胶为填充剂;以乙腈一 lmL?L-三乙胺的lmL?L_磷酸水溶液(3:97)为流 动相;检测波长为207rim;柱温:室温;流速:lmL/min.理 论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于3000. 2.3.2溶液的制备 供试品溶液的制备:取本品适量,研细,取约1g, 精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇溶液 25mL,密塞,称定重量,超声30min,冷却至室温,称 定重量,补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤 液5mL,置10mL量瓶中,0.59/6磷酸甲醇溶液定容 置刻度,摇匀,测定各样品中盐酸麻黄碱含量.对照 品溶液的制备:取盐酸麻黄碱对照品适量,精密称定, 加0.59/5磷酸甲醇溶液制成每lmI含56~zg盐酸麻 黄碱的溶液,即得.阴性样品溶液的制备:按处方取 除麻黄的各味药材,按处方制得样品,再按供试品溶 液制备方法,制得阴性样品溶液. 2.3.3专属性考察 阴性样品溶液的制备:按处方取除麻黄的各味药 材,按制得样品,再按供试品溶液制备方法,制得阴性 样品溶液. 分别精密吸取对照品溶液,供试品溶液,阴性样品 溶液各lO,注入高效液相色谱仪,测定结果见图1. ——,.人一.一—_j\——…一0.002.0o4.0o6.008.O010.0012.0014.00 A盐酸麻黄碱对照品溶液色谱图 —— 0.002.004.O06.O08.00100012.001400 B止嗽定喘丸(浓缩丸)样品溶液色谱图 一 24一 一——J..八 0002.004.006.008.00100012.0014.00 C止嗽定喘丸(浓缩丸)去麻黄阴性样品溶液色谱图 图1三种样品色谱图 2.3.4标准曲线的考察 精密吸取浓度为56.2~zg/mL的盐酸麻黄碱对照 品溶液4,6,8,10,12和20L,注入液相色谱仪,按色 谱条件分析,测定各自峰面积,以对照品进样量(tLg) 为横坐标,峰面积值为纵坐标,求得回归方程:Y一 2377351.87x一6460.42,r一0.9999.结果明盐酸 麻黄碱在0.2246,1.1240~g范围内与峰面积呈良 好的线性关系. 2.3.5精密度试验 取同一批号(第一批)样品适量,按照供试品溶液 制备方法操作制得样品溶液,连续进样6次,测定峰面 积,测得峰面积值的RSD为1.61(n一6),符合要求. 2.3.6重现性试验 取同一批号(第一批)样品,研细,取约lg(共6 份),精密称定,按照供试品溶液制备操作,按色谱条 件分析,测定每份样品中盐酸麻黄碱含量.结果样品 中盐酸麻黄碱平均含量为2.885mg/g,RSD为 2.549/6(n一6),符合要求. 2.3.7稳定性试验 取精密度试验项下的供试品溶液分别于0,2,4, 8,10和12h后进样.测定盐酸麻黄碱峰面积,测得 峰面积值的RSD为1.419/6,说明样品在12小时内 稳定性良好. 2.3.8加样回收率试验 取已知含量样品,取一定样品(共6份),精密称 定,分别加入盐酸麻黄碱对照品溶液,按照供试品溶 液制备操作制成样品溶液,各取lOlL,注入高效液相 色谱仪,计算回收率,结果平均回收率为98.03, RSD为1.299/5(n一6),符合要求.结果见表1. 表1加样回收率试验 2.3.93批样品含量测定结果 取3个批号的样品,按照供试品溶液制备操作, 按色谱条件测定各自样品中盐酸麻黄碱含量.结果 第4卷第1期 2008年1月 亚太传统医药 Asia—PacificTraditionalMedicine Vo1.4No.1 Jan.2008 分别为2.764mg/g,2.779mg/g,2.603mg/g. 3讨论 (1)处方止嗽定喘丸提高的质量标准相比较原方, 对君药麻黄进行了定量质量控制,能够控制全方中盐 酸麻黄碱的含量,减少由于不当剂量盐酸麻黄碱引起 的临床不良反应;并且建立了苦杏仁的TIC定性鉴别 和石膏的化学反应鉴别,能够有效控制全方的质量. (2)提取方法的优化.本方法简化了2005版中 国药典中麻黄含量测定采用甲醇超声,5O甲醇洗脱 中性氧化铝柱的方法,直接采用甲醇超声方法,结果 平均回收率为98.13;同时本实验考察了不同溶剂 量和不同提取时间对结果的影响,测定各样品中盐酸 麻黄碱含量.结果显示,提取溶剂为50mL的0.5 磷酸甲醇溶液,测得样品含量与25mi0.5磷酸甲 醇溶液基本相同,故采用25mL的0.5磷酸甲醇溶 液为提取溶剂量.同时分别考察3O,45min,各样品 中盐酸麻黄碱含量.结果显示提取时间为30min测 定结果基本等于45min,故将提取时间定为30min. (3)高效液相色谱法方法学考察优化.考察All— sphereODS(4.6mm×250mm,2.5Fm)和Agilent HC—C18(4.6mmX250mm,2.5Fro)不同色谱柱及不 同仪器AgiLent1100和Waters2695含量测定的影 响.结果显示,采用相同仪器,不同色谱柱,与采用相 同色谱柱,不同仪器对测定对检验结果均无影响. (4)色谱条件的优化.采用2005版中国药典麻 黄药材含量测定的流动相L5],盐酸麻黄碱的色谱峰不 能很好地分离,故将流动相条件更改为乙腈一0.19/6 磷酸的0.1三乙胺水溶液(3:97),盐酸麻黄碱的色 谱峰得到了很好的分离和峰形.另外本实验在调整 流动相比例时发现一现象,样品中盐酸麻黄碱色谱峰 在8min之前出来会是一个完全重叠峰,而且保留时 间和光谱图与盐酸麻黄碱对照品一致,当调整流动相 比例将保留时间推至8min之后,重叠的色谱峰才能 完全分离,提示有必要将色谱峰尽量控制在8min以 后,以保证色谱峰完全分离.而且纯度角度小于纯度 阈值,表明色谱峰纯度好. 参考文献: F1]国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准?中 药成方制剂(第二十册)Es].北京:人民卫生出版社, 1991. [2]严正华.中药学I-M].北京:人民卫生出版社,1991. 1-3]胡珊,何秀国,程义林.呋麻滴鼻液致变态反应1例I-J]. 医药导报,2006,25(12):1334. 1-4]屈淑英,袁何.盐酸麻黄碱致严重过敏2例[J].西北药 学杂志,2006,21(6):289. [5]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北 京:化学工业出版社,2000. (--,I-任编辑:王尚勇) StudyonImprovingQualityStandardforZhiSouDingChuanPills TangHongmin,LuoGuoan.,WangYiming.,LuoYongming (1.JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Nanchang,Jiangxi,330004: 2.ResearchCenterofTraditionalChineseHerbalMedicines;TsinghuaUniversity,Beijing100084) Abstract:Objective:ToestablishthemethodforimprovingqualitystandardofZhisoudingchuanPills.Methods:Ephedrine HydrochlorideinpillswasdeterminedbyRP-HPLC,TLCwasusedtoidentifyBitterApricotSeed,chemicalreactionisusedtoi— dentifygypsum;.ThesampleswereseparatedbyAllsphereODS-2.5gm(4.6×250mm)withthemobilephaseconsistingoface— tonitrile~water(0.1phosphoricacidand0.1triethylamine)(3:97);Thedetectionwavelengthwasat207nrn..Results:ForE— phedrineHydrochloride,linearrangewas0.2246~1.1240#g,andtheaveragerecoverywas98.03.BitterApricotSeedinZhi— soudingchuanPillscouldbeidentifiedbyTLC,Thereactiontoidentifygypsumisevident.Conclusion:Themethodtodetermine contentofEphedrineispreciseandtheoperationofextractionissimple,Thespecificityofthismethodisreliable,Thespecificityto identifyBitterApricotSeedusingTLCisgood,Thereactiontoidentifygypsumisacurate,simple,specialized.reproducibleand suitableforqualitycontrolofZhisoudingchuanPills. Keywords:Zhisoudingchuanpills;Ephedrinehydrochloride;HPLC;Qualitystandard 一 25—