[doc] 止嗽定喘丸(浓缩丸)质量标准研究
止嗽定喘丸(浓缩丸)质量标准研究
第4卷第1期
2008年1月
亚太传统医药
Asia-PacificTraditionaIMedicine
VoI.4NO.1
Jan.2008
止嗽定喘丸(浓缩丸)质量标准研究
汤宏敏,罗国安,王义明,罗永明
(1.江西中医学院,江西南昌330004;2.清华大学中药现代化研究中心,北京100084)
摘要:目的:制定提高止嗽定喘丸(浓缩丸)质量标准的方法.方法:用RP-HPLC法对制剂中的盐酸麻黄碱进行
含量测定,TLC法对止嗽定喘丸(浓缩丸)中苦杏仁进行定性鉴别,化学反应鉴别石膏.色谱柱:AllsphereODS
(4.6mm~250mm,2.5m);流动相:乙腈:水(1mL?LI1磷酸和1mL?LI1三乙胺)(3/97);检测波长:207nrn.结
果:盐酸麻黄碱对照品在0.2246~1.1240gg范围内线性关系良好,平均回收率为98.O3,处方中的药材苦杏仁
能得到很好的专属性定性鉴别.结论:处方中苦杏仁的TLC定性鉴别
专属性好,君药麻黄中盐酸麻黄碱含量测
定方法准确,操作简单,专属性和重现性良好,可以有效用于止嗽定喘丸(浓缩丸)的质量控制.
关键词:止嗽定喘丸(浓缩丸);中药质量标准;RP—HPLC;TLC
中图分类号:R284.1文献标识码:A文章编号:1673-2197(2008)01—023—03
止嗽定喘丸(浓缩丸)来源于《伤寒论?辨太阳病
脉证并治》麻黄杏仁甘草石膏汤,由君药麻黄,苦杏
仁,石膏,甘草四味药材组方而成,具有辛凉宜泄,清
肺平喘之功效.君药麻黄在处方中取其清肺平喘止
咳之功_l2],但是其含有的盐酸麻黄碱作为处方药时不
良反应较多,包括头痛,失眠,肢体震颤和心悸不良反
应,临床有发生变态反应和严重过敏反应的报道l_3].
这些常见的不良反应往往由于剂量过大引起.止嗽
定喘丸原质量标准收载于卫生部药品标准中药成方
制剂第二十册中l_1],只有甘草和麻黄的TLC定性鉴
别,本实验对止嗽定喘丸原质量标准进行了提高,在
原标准基础上,除去麻黄的TLC定性鉴别,增加了君
药麻黄的含量测定和苦杏仁的TLC定性鉴别,以及
石膏的化学鉴别反应.本文研究采用RP-HPLC法
测定止嗽定喘丸中盐酸麻黄碱的含量,TLC定性鉴
别苦杏仁以及石膏的化学鉴别反应,建立了控制止嗽
定喘丸质量的
方法.该法供试品制备操作方便,
方法稳定,可靠,重现性好,可作为止嗽定喘丸质量标
准控制的指标.
1仪器与试剂
Waters2695高效液相色谱仪,Waters2996二
极管阵列检测器,中文版Empower色谱工作站;昆
山KQ-500E型超声提取器(功率500W,工作频率
40KHZ);梅特勒一托利多ExcellenceXP205分析天
平.乙腈:HPLC级别,Fisherscientific公司;磷酸:
分析纯,北京化工厂(批号20060310);甲醇:分析纯,
北京化工厂(批号20051028);水为mili—Q超纯水.
对照品:盐酸麻黄碱(中国药品生物制品检定所购置,
批号:110721—200512,为含量测定用对照品);样品:
市售(第一批,第--~tL,第三批).
2方法与结果
2.1钙盐及硫酸盐的鉴别反应
取本品0.5g,除去包衣,研细,加稀盐酸1mL,加
热使溶解,溶液显钙盐(《中国药典))2005年版附录
IV)和硫酸盐(《中国药典))2005年版一部附录IV)的
鉴别反应l_5].
2.2苦杏仁薄层鉴别
取本品7g,除去糖衣,研细,加甲醇50mL超声
处理15min,滤过,滤液挥干,残渣加水20mL使溶
解,用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次20mL,合
并正丁醇层,蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,作为供
试品溶液;另取苦杏仁苷对照品适量,加甲醇制得每
收稿日期:2007—11—11
基金项目:国家十一五科技支撑计划(2006BAIO8B04—01)
作者简介:~(1982一),男,硕士研究生,研究方向:药物分析;罗~-~r(1946一),男,上海市人,清华大学教授,博士生导师,研
究方向:药物分析,E-mail:luoga@mail.tsinghua.edu.cn.
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亚太传统医药
Asia-PacificTraditionalMedicine
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1.mL含3rag的溶液,作为对照品溶液;按处方配比,
取除杏仁外的其它药材,按制法工艺制成丸剂,再按
上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液;照薄层
色谱法(《中国药典))2O05年版附录?B)试验[5],吸取
上述两种溶液各lOlL,分别点于同一硅胶G薄层板
上,以氯仿,甲醇,水(26:14:1)为展开剂,展开,取出,
晾干,立刻喷以磷钼酸硫酸溶液(磷钼酸2g加入
20mL水,再将30mL浓硫酸缓慢注入水中,摇晃后
显色剂呈深蓝色),在105?烘箱中加热至斑点显色
清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,
显相同颜色的斑点,阴性无干扰.
2.3止嗽定喘丸中盐酸麻黄碱的含量测定
2,3.1色谱条件
参照《中国药典92005年版一部有关含量测定方法
制定[5].用十八烷基硅胶键合硅胶为填充剂;以乙腈一
lmL?L-三乙胺的lmL?L_磷酸水溶液(3:97)为流
动相;检测波长为207rim;柱温:室温;流速:lmL/min.理
论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于3000.
2.3.2溶液的制备
供试品溶液的制备:取本品适量,研细,取约1g,
精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇溶液
25mL,密塞,称定重量,超声30min,冷却至室温,称
定重量,补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤
液5mL,置10mL量瓶中,0.59/6磷酸甲醇溶液定容
置刻度,摇匀,测定各样品中盐酸麻黄碱含量.对照
品溶液的制备:取盐酸麻黄碱对照品适量,精密称定,
加0.59/5磷酸甲醇溶液制成每lmI含56~zg盐酸麻
黄碱的溶液,即得.阴性样品溶液的制备:按处方取
除麻黄的各味药材,按处方制得样品,再按供试品溶
液制备方法,制得阴性样品溶液.
2.3.3专属性考察
阴性样品溶液的制备:按处方取除麻黄的各味药
材,按制得样品,再按供试品溶液制备方法,制得阴性
样品溶液.
分别精密吸取对照品溶液,供试品溶液,阴性样品
溶液各lO,注入高效液相色谱仪,测定结果见图1.
——,.人一.一—_j\——…一0.002.0o4.0o6.008.O010.0012.0014.00
A盐酸麻黄碱对照品溶液色谱图
——
0.002.004.O06.O08.00100012.001400
B止嗽定喘丸(浓缩丸)样品溶液色谱图
一
24一
一——J..八
0002.004.006.008.00100012.0014.00
C止嗽定喘丸(浓缩丸)去麻黄阴性样品溶液色谱图
图1三种样品色谱图
2.3.4标准曲线的考察
精密吸取浓度为56.2~zg/mL的盐酸麻黄碱对照
品溶液4,6,8,10,12和20L,注入液相色谱仪,按色
谱条件分析,测定各自峰面积,以对照品进样量(tLg)
为横坐标,峰面积值为纵坐标,求得回归方程:Y一
2377351.87x一6460.42,r一0.9999.结果
明盐酸
麻黄碱在0.2246,1.1240~g范围内与峰面积呈良
好的线性关系.
2.3.5精密度试验
取同一批号(第一批)样品适量,按照供试品溶液
制备方法操作制得样品溶液,连续进样6次,测定峰面
积,测得峰面积值的RSD为1.61(n一6),符合要求.
2.3.6重现性试验
取同一批号(第一批)样品,研细,取约lg(共6
份),精密称定,按照供试品溶液制备操作,按色谱条
件分析,测定每份样品中盐酸麻黄碱含量.结果样品
中盐酸麻黄碱平均含量为2.885mg/g,RSD为
2.549/6(n一6),符合要求.
2.3.7稳定性试验
取精密度试验项下的供试品溶液分别于0,2,4,
8,10和12h后进样.测定盐酸麻黄碱峰面积,测得
峰面积值的RSD为1.419/6,说明样品在12小时内
稳定性良好.
2.3.8加样回收率试验
取已知含量样品,取一定样品(共6份),精密称
定,分别加入盐酸麻黄碱对照品溶液,按照供试品溶
液制备操作制成样品溶液,各取lOlL,注入高效液相
色谱仪,计算回收率,结果平均回收率为98.03,
RSD为1.299/5(n一6),符合要求.结果见表1.
表1加样回收率试验
2.3.93批样品含量测定结果
取3个批号的样品,按照供试品溶液制备操作,
按色谱条件测定各自样品中盐酸麻黄碱含量.结果
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分别为2.764mg/g,2.779mg/g,2.603mg/g.
3讨论
(1)处方止嗽定喘丸提高的质量标准相比较原方,
对君药麻黄进行了定量质量控制,能够控制全方中盐
酸麻黄碱的含量,减少由于不当剂量盐酸麻黄碱引起
的临床不良反应;并且建立了苦杏仁的TIC定性鉴别
和石膏的化学反应鉴别,能够有效控制全方的质量.
(2)提取方法的优化.本方法简化了2005版中
国药典中麻黄含量测定采用甲醇超声,5O甲醇洗脱
中性氧化铝柱的方法,直接采用甲醇超声方法,结果
平均回收率为98.13;同时本实验考察了不同溶剂
量和不同提取时间对结果的影响,测定各样品中盐酸
麻黄碱含量.结果显示,提取溶剂为50mL的0.5
磷酸甲醇溶液,测得样品含量与25mi0.5磷酸甲
醇溶液基本相同,故采用25mL的0.5磷酸甲醇溶
液为提取溶剂量.同时分别考察3O,45min,各样品
中盐酸麻黄碱含量.结果显示提取时间为30min测
定结果基本等于45min,故将提取时间定为30min.
(3)高效液相色谱法方法学考察优化.考察All—
sphereODS(4.6mm×250mm,2.5Fm)和Agilent
HC—C18(4.6mmX250mm,2.5Fro)不同色谱柱及不
同仪器AgiLent1100和Waters2695含量测定的影
响.结果显示,采用相同仪器,不同色谱柱,与采用相
同色谱柱,不同仪器对测定对检验结果均无影响.
(4)色谱条件的优化.采用2005版中国药典麻
黄药材含量测定的流动相L5],盐酸麻黄碱的色谱峰不
能很好地分离,故将流动相条件更改为乙腈一0.19/6
磷酸的0.1三乙胺水溶液(3:97),盐酸麻黄碱的色
谱峰得到了很好的分离和峰形.另外本实验在调整
流动相比例时发现一现象,样品中盐酸麻黄碱色谱峰
在8min之前出来会是一个完全重叠峰,而且保留时
间和光谱图与盐酸麻黄碱对照品一致,当调整流动相
比例将保留时间推至8min之后,重叠的色谱峰才能
完全分离,提示有必要将色谱峰尽量控制在8min以
后,以保证色谱峰完全分离.而且纯度角度小于纯度
阈值,表明色谱峰纯度好.
参考文献:
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1991.
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[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北
京:化学工业出版社,2000.
(--,I-任编辑:王尚勇)
StudyonImprovingQualityStandardforZhiSouDingChuanPills
TangHongmin,LuoGuoan.,WangYiming.,LuoYongming
(1.JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Nanchang,Jiangxi,330004:
2.ResearchCenterofTraditionalChineseHerbalMedicines;TsinghuaUniversity,Beijing100084)
Abstract:Objective:ToestablishthemethodforimprovingqualitystandardofZhisoudingchuanPills.Methods:Ephedrine
HydrochlorideinpillswasdeterminedbyRP-HPLC,TLCwasusedtoidentifyBitterApricotSeed,chemicalreactionisusedtoi—
dentifygypsum;.ThesampleswereseparatedbyAllsphereODS-2.5gm(4.6×250mm)withthemobilephaseconsistingoface—
tonitrile~water(0.1phosphoricacidand0.1triethylamine)(3:97);Thedetectionwavelengthwasat207nrn..Results:ForE—
phedrineHydrochloride,linearrangewas0.2246~1.1240#g,andtheaveragerecoverywas98.03.BitterApricotSeedinZhi—
soudingchuanPillscouldbeidentifiedbyTLC,Thereactiontoidentifygypsumisevident.Conclusion:Themethodtodetermine
contentofEphedrineispreciseandtheoperationofextractionissimple,Thespecificityofthismethodisreliable,Thespecificityto
identifyBitterApricotSeedusingTLCisgood,Thereactiontoidentifygypsumisacurate,simple,specialized.reproducibleand
suitableforqualitycontrolofZhisoudingchuanPills.
Keywords:Zhisoudingchuanpills;Ephedrinehydrochloride;HPLC;Qualitystandard
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