呼吸道肿瘤中的人乳头瘤病毒感染

呼吸道肿瘤中的人乳头瘤病毒感染 呼吸道肿瘤中的人乳头瘤病毒感染 '' 第7卷第3期 1998年9月 河南医学研究 ANNEI)ICALRESEARCH ?.7?o3 Se口?也1998 呼吸道肿瘤中的人乳头瘤病毒感染 邢鲁奇冯里且张怀玉刘鸿瑞邢群智杨平邢军 (洛阳医学高等专科学校附属医院洛阳471003)/5一 /\/,. 摘要目的:探索国内成人呼吸系统上皮性肿瘤中人乳头瘤病毒(1狂,,『)的感染状况及其 间的相互关系.:用多重PCR法和原位杂交法检测踮例呼吸道良,恶性肿瘤标本中的 HPVDNA并结合病理组织学研究.结果:共检测出HPVDNA阳性13倒(153%),包括36例 咽喉肿瘤中的6倒(16.7%)和49倒肺鳞癌中的7例(14.2%).在上,下呼吸道肿瘤中检出的 HPV基因型均以HPV6/11型为主结论:国内成人呼吸道上皮性肿瘤中存在HPV感染并有 其特点,HPV感染可能在呼吸道肿瘤的发生中起一定的作用. 关键词竺堡堕;癌;鳞状细胞 中圈分类号M34 现有研究已证实人乳头瘤病毒(HPV)与 生殖道某些肿瘤的发生密切相关….近年, 国外少数学者分别注意到了咽喉肿瘤和肺鳞 癌中的HPV感染L2.3j,但国内外均未见把呼 吸道上皮性肿瘤作为一个整体来研究与HPV 感染关系的报道.本研究旨在探索国内成人 呼吸道上皮性肿瘤的HPV感染状况及其间 的相互关系. 1材料和方法 1.1材料85例石蜡包埋的肿瘤组织标本 来自北京协和医院病理科外检材料.分别含 PBR322}玎W11,HziP}玎W16K重组质粒的 HB101大肠杆菌由中国医科院基础医学研究 所生物物理室提供.HPV6/Il,l6,l8型3对 PCR引物由山东医科院合成.生物素缺口平 移法标记DNA试剂盒和生物素碱性磷酸酶 显色体系购自北京医科大学实验药厂. l,2方法 1.2.1多重PCR法:扩增液含3对引物, ragCh,dNTP和标本消化液,一次扩增可检测 出4型HPVDNA.阳性对照扩增液含 乳头瘤病毒;聚合酶链反应;原位杂交 ————— HPV6/1l,l6,I8型病毒质粒A,阴性对照 由无离子水取代标本消化液.扩增程序: 95?变性308,43?复性90s,72?延伸60s, 累计35个循环.最后经琼脂糖凝胶电泳分 离,紫外灯下观察结果. 1.2.2原位杂交法:对重组质粒扩增,提 取,纯化和鉴定后,按生物素缺口平移法标记 DNA说明步骤制备生物素标记的}?wl】 和l6型DNA探针.切5厚组织切片,经 处理后杂交过夜.杂交后SCC洗,再按生物 素碱性磷酸酶体系说明书进行显色,15rain 至4h后终止,封片观察结果.阴性对照用 已知不含}玎WDNA的人肝组织和未加探针 的原位杂交,阳性对照用经P(和同位素标 记原位杂交已证实含HPVDNA的官颈癌组 织和人官颈癌细胞系. l,2.3病理组织学观察:观察肿瘤组织形 态与HP~感染的关系,比较呼吸道HP~感染 与生殖道HPV感染在组织学上的异同.根 据肺鳞癌的生长方式将其分为管内乳头状, 浸润性和浸润性伴向支气管内突出的斑块状 病变三个类型,各种生长方式与HPV感 染的关系. ,2 河南医学研究第7卷 2结果 2.1经多重PCR法在85例呼吸道肿瘤标本 中共检测到HPVDNA阳性13例(15.2%). 结果见表1,2. 表1多重PCR法检测36例咽喉肿瘤组织中[-ff~/-感染 肿瘤n!竺 HPV6/IlHPv16IflW6/ll+l6 咽乳头状瘤1l1 堆乳头状瘸42 堠乳头楠鲜吐皮 高度不典型增生2l 喉鳞状上皮高度 不典型增生ll 咽部鳞癌4 喉鳞癌14 台计365 表2多重I:V:R法检测49例肺鳞癌组织中的Hlv感染 肿瘤!堡 lff'V6/11I~V16lff'V6/ll+16 合计 肺鳞癌494l2 2.2经PCR检测阳性的13例标本进行原位 杂交检测,8例显示?DNA阳性,包括2 例喉乳头状瘤,1例喉鳞癌和5例肺鳞癌. 在喉乳头状瘤中,部分乳头表层和中层肿瘤 细胞的核内见较强的杂交信号,许多杂交阳 喉鳞癌标本中杂交 性细胞具有凹空样胞浆, 阳性的细胞数量少但信号强,同一标本连续 切片多次杂交后,阳性信号总是固定在几个 相同的部位,提示病毒分布并非弥漫而是多 灶性的. 5例肺鳞癌杂交阳性,其中3例HPVll 型阳性,1例HPV16型阳性,1例HPV11和16 型双重阳性. 肺鳞癌呈管内乳头状生长5例,HPV均 为阴性,浸润性生长28例,HPV阳性2例 (7%),浸润性生长伴向管腔内突出的斑块状 病变16例,HPV阳性5例(31%). 11例肺鳞癌的癌细胞大小较一致,与基 底细胞相似,细胞呈巢状或宽带状排列,其中 原位杂交阳性2例;有大量凹空样肿瘤细胞 的中分化鳞癌19例,其中杂交阳性3例;其 他鳞癌19例,均杂交阴性. 3讨论 本研究证实了国内成人呼吸道上皮性肿 瘤中存在HPV感染,HPV感染可能在这些肿 瘤的发生中起一定的作用. 咽喉部良性乳头状瘤中HPV感染率 (23.5%)高于鳞癌中感染率(5.5%),喉部5 例}阳性例中,声带乳头状瘤占了3例, 表明喉部声带区是咽喉部}感染的主要 发生部位.原位杂交显示病毒为多灶性分 布,与文献报道生殖道尖锐湿疣中}?,v分布 特点一致,符合多细胞起源学说L4J. 本研究结果提示向支气管腔内生长的斑 块状病变和凹空样肿瘤细胞可能是与肺鳞癌 中}?,v感染关系较密切的形态学改变,乳头 状生长方式和肺HPV感染关系不大.Kur. n?n等L5-6J在分析外阴鳞癌与}?,v感染关系 时将外阴癌分为三个亚型,本组参考Kun'nan 的,将肺鳞癌进行了组织学分型并结合 HPV检测分析.结果与Kurman等的研究结 果相似,即基底细胞样鳞癌和伴有凹空样肿 瘤细胞的疣状癌HPV检出率较高. 85例肿瘤总的HPV检出率(15.2%)和 咽喉部(16.7%)及肺部(14.2%)的检出率相 近,检出的HPV基因型均以HPV6/11型为 主.上下呼吸道肿瘤中相近且由高渐低的检 出率和检出的}?,v基因型相同是呼吸道肿 瘤中}?感染的特点之一,表明上,下呼吸 道}?,v感染关系密切,感染途径相同. 本组肺癌中以HPV6/11型居多的结果 与国外肺癌中的以HPV16型为主的报道差 距较大.本组标本均经过重复检测和pcR 与原位杂交两种方法的对照,检测结果是客 第3期呼吸道舯辔中的人乳头瘤病毒感染 观和真实的.国外研究已证实生殖道以外的 部位包括呼吸道的HPV感染大多由生殖道 ?感染的传播引起ll,,主要有4个途径:? 分娩过程中胎儿的感染;?妊娠期官内胎儿的 感染;?后天的口一生殖器接触,?经污染的 手或其他物品的传播.生殖道癌主要发生在 生育期后的中老年妇女,其?感染多为l6, 18等型,妊娠生育期妇女的?感染多为与 HPV6和11型有关的生殖道尖锐湿疣,因此经 上述传播途径由生殖道传播到呼吸道的HPV 大多应是ItPV6和l1型,即呼吸道ItPV感染 可能主要由生殖道湿疣病变中的HPV6和l1 型传播引起.且如前所述,肺部?感染与 咽喉HPV感染关系密切,感染途径相同.因 此,我们认为肺癌中感染HPV6/11型为主是 客观存在的事实,有其理论依据,以?/1l 型为主很可能就是我国呼吸道肿瘤包括肺鳞 癌中HPV感染的另一特点. 在咽喉部,肺部检测出和生殖道病变中 相同基因型的HPV,原位杂交显示的病毒分 布和组织学改变也都具有许多相似之处,这 些都提示三个部位之间在ttPV感染的传播 上有着密切的联系. 参考文献 ICmmCP,?~lovoGJGenltalPaoilk,mavln,~sandllelnted H哪口I删.FirstEd曲H州york:R??1P瑚.1991:l拍 2Ka,F,?A,o/AB_帅0fr 懈一呻s畦a【d吐血一?I州印 p日.n出s.厶If)瑚叩,1992;102:9 3Y伽B啪sA,OIINP,n?髓一^I啪E.0亡娜r呦髓0fllll- 一出口m瑚BNAinplm1u??pk?B.C啊, l992;?:693 4Pfiste~H.H峋viTI峙alldlca【lCan- ,19盯;椎:113 5咖IIiJ.1出T.SehNtSmM|lB黜l0idalldwartycci【】D- m0fdwdlveIyP0f岫哪celln眦fie- 脚删ilhIlLIn岫Il0衄』Surg ,l993;17:133 6'l'oklT,‰?埘lIiJ,P舢kJs,do/.15Oa~le"叫)日pm咖m恤B efiol~0f岫H?Ilscellcmi蝴0fdinoldw帅蛆n. mJ却m,1991;10:107 收穑:l9.1?目:I0埘 InfectionofHllIIlanPapfllom~in NeolflaslnsoftheRespiratoryTract Xing~qlFengCui~en2flgHIyIletal t犯n'胁q矿Med/co/岛屿,[-一rs471OO3) AbsacI删:T0既plo砖theinfectionofhumanpapiu加1a,randre]orlbethein— feefi~andthen印plaBl啪intherespiratoryepeJn删pbIsn1sinChineseadultpatients.Me~hods:The rmtltipleP(alldinsituhybridization帆Ilsedforthedetectionof?DNAin85casesofbenignand T?alig叫ntneoplasmsofrespiratoryhtIIthepa山0Ill0gicalsttIdy.扎:In13ofthe即eci ?唧1s 啪mled,}玎wDNAw硝identified(13/85,15.3%),ineluaing6of36ca8esofpIlary"g0laly| 考朗l[1eo— p吗(6/36,16.7%)蚰d7of49ca瞄lung哪姗oI玛cellca耽in0嘲s(7/49,14.2%).如唧 the 13c《lsestI|rr埘speeimem,?10sIofthemwe嘴 positiveforHPV6/I1types.Conc:~nerewerettPV infeefi~inrespiratoryepithelialneoplasmsinChineseadultpatientsand}玎 wmaypJaroleinthe ~eogenMsoftheseneoplasms. Key,r凼phaIynaIyrIealneoplasm;lungneoplosm~eareinoma~squ删Il8cell;papillo— r~aviras;yrnemsechainrBacrion;insituhybridization