间接免疫荧光法检测血清中抗核抗体 临床免疫学

间接免疫荧光法检测血清中抗核抗体 临床免疫学 实验三、 间接免疫荧光法检测血清中抗核抗体 一、实验目的: 1、掌握免疫荧光法的原理。 2、掌握免疫荧光法检测过程中避免非特异荧光干扰的方法。 二、实验原理: 间接免疫荧光技术是利用荧光抗体标记第二抗体检测未知抗原或未知抗体，第一抗体，的方法。以检测人血清抗核抗体，ANA，为例。病人血清中ANA，Ab，能不各种系细胞核成分，Ag，特异性结合,此种结合的Ab，IgG型，能不荧光标记的羊抗人IgG，二抗，结合,在荧光显微镜下,细胞核显示荧光,提示血清中ANA的存在。 三、实验步骤: 1、小鼠断颈处死取肝, NS漂洗,剪取肝横断面印片于玻片上,左右各一处,自然干燥;滴加无水乙醇固定,室温凉干; 2、左右印片处分别盖上一片小纸片,分别滴加阳性血清和阴性血清各1滴,37?30′; 3、去除纸片,PBS冲洗1min×3次,吸干水分; 4、左右印片处分别盖上一片小纸片,并滴加荧光标记羊抗人IgG，二抗，各1滴,37?30 5、去除纸片,PBS漂洗1min×3次,吸干水分; 6、荧光显微镜镜检。 四、实验结果: 待测血清镜下可见明亮,清晰,圆点状荧光,大小不一。有均质型、斑点型、核膜型,其中以均质型多见。各型如下图所示: 对照血清为细胞不发出荧光;镜下见到模糊,较暗淡,块状荧光,无细胞形为非特异性荧光。 抗核抗体(均质型) 抗核抗体(斑点型) 抗核抗体(核膜型) 实验讨论: 一、注意事项: 1、制作核抗原片，印片，不宜太厚; 2、滴加的血清或荧光抗体要充分盖满抗原片; 3、荧光抗体孵育时要注意避光; 4、染色后的片子应及时镜检,不宜放置过久。 5、注意各步骤的漂洗要充分。