米非司酮对早孕猕猴孕酮和雌二醇分泌的研究

米非司酮对早孕猕猴孕酮和雌二醇分泌的研究 米非司酮对早孕猕猴孕酮和雌二醇分泌的 研究 经济动物2001.5(4)4549 JournalofEconomicAnimal 米非司酮对早孕猕猴孕酮和雌二醇分泌的研究. 王训立,周建华,李志雄,范春梅,刘以训 (1.福建省生育科学技术研宄所福建省非人曼长类实验动物重点实验室, 福建福州350011;2.中国科学院动糖研究所生殖生轴擘国家重点实验室,北京 100080) 摘要:为开展生殖生曲学研究工作提供理想的动曲模型.进行了丰项试验,分析了米非司 嗣(RU486)对葬挂拄矩早期血清中孕嗣(P)和雌二醇(E2)的影响.蛄果明,注射RU486一 段时闻内孕嗣和雌二醇基奉不主,但/P比值有所增加,说明米非司胡干托内旁莹激素之同 的平衡,随着出血的发生,孕嗣,雌二辟均显着下降.这种降低与出血的发生有着明确的先后 关系.从而证实了敕素的麦化薄于蜕膜受拯. 关键词:米非司酮(RU486);裤擞;孕嗣;雌二辟 中田分类号:(H925文献标识码:A文章缩号:1007—7448(2001)04—0045—05 Ef『ecl0fMifepristoneonProgesteroneandEstradiolSecretionin Female只hesusMonkeyatEarlyGestaton WANGXun—li,ZHOUJian.hua,LIZhi.xiong,Chun—mei,LIUYi—xun (I.FujianResearchInstituteofFamilyPlanning,KeyLaboratoryforNon—Hu— DianPrimatesofFujian,Fuzhou,Fujian35001l,China;2.StateKLaborato. 删ofReproductiveBiology,InstituteofZoology,ChineseAcademyofSciences,Bei— ring100080,China) Abstract:Mifepristone(RU486)wasinjectedtofemalerhesusmonkeyattheearly gestationandtheeffectofMifeDrist0neinjectiononthe$eFumlevelsofprogesterone (P)and~tmdiol(E2)wasinvestigated.TheSerumlevelsofprogesterone(P)and estradiol(E2)wasnotchangedsignificantlyduringearlypregnancy,whiletheratio ofEz:Pwasincreased.Ontheincidenceofvaginalhemorrhage.SCEUEE~Pand levelsweresignificantlyreducedTheresultssuggestthathormonesmightbeessen timforthedeciduasinrhesusmonkey. Keywords:milepristone(RU486);rhesusmonkey;progesterone;estradiol ? 基盒璜目:中目科学院动物研究所生殖生物学国掌重点宴验室赍助项目研究内窖 之一 技穑日期:2001—03-20 经济动材2001拒 孕酮和雌激素在妊娠中的作用已为人们所知,对早期妊娠过程的维持也十分重要. 因为孕酮的绝大部分作用都必须在雌激素作用的基础上才能发挥,子宫孕酮受体 的含量 亦受雌激素调节,雌激素与孕酮的相互关系成为早孕维持方面不容忽视的一种因 素.在 临床应用米非司酮(Ru486)终止早期妊娠过程中,人们注意到,至少有4种生殖激素 发生 显着改变,即人绒毛膜促性腺激素(hCG),孕酮,雌二醇,前列腺素(PGs)蜕膜是胎盘 的组成部分之一,是子宫在妊娠期孕酮的作用下转化而成.猕猴是计划生育科研工 作中 选用的最理想的试验动物模型.由于非人灵长类动物与人类有许多共性…,尤其在 计划 生育药物研究中,具有更加突出的优越性.本文分析了RU486对猕猴妊娠早期孕 酮和雌 二醇的影响,旨在利用猕猴.作为一种高等级的试验动物,在开展生殖生物学研究 方面提 供理想的动物模型. 1材料与 11试验试剂 ,}{孕酮和H雌二醇为上海原子核研究所的产品,抗孕酮和雌二醇抗体由中国科 学院动物研究所庄临之教授提供. 1.2样品收集 本试验采用静脉注射的方法对猕猴进行给药,给药剂量分为两组:对照组(早孕 35d),注射1次(早孕34d),注射2次(早孕33,34d),同时在孕期的第32,33,34,35d 采血1次,每只均采血3mL,血样在37?温育1h后,离心分离血清一2O?冰箱存放,待 所有样品收集后,集中测定. 13样品处理 血清(0.5mL于10mL提取试管中) ?第1次抽提 CH2C12层 +第2次抽提 CH2c层 ?分装于测定试管,45--50?水浴,蒸干 溶于0.1mL磷酸盐缓冲液(PRs)中 14激素测定 样品管用缓冲液稀释成7种不同溶度(7.8,1000pg/100L),平行双管检测, 同时设T管,NSB管和B0管.标准管与赦测定管同时加入抗孕酮和雌二醇抗体与H一 孕酮和H雌二醇混匀,4?冰箱保温24h,加入活性炭4?离心15min收集上清测其 CPM值.以标准管(B/)百分结合率对应孕酮和雌二醇含量采用半对或log1ohit转 换绘制标准曲线.待测样品管CPM数用程序计算器计算其含量或算出其(B/)百分结 合率,再在标准曲线上查出相应的样品含量.试验数据经t检验求P值. 第5卷第4新王1IIf立等:米非司酮对早孕器襄孕酮和雌二醇分泌肭研究47 2结果与分析 2.1QH2CI2处理与猕猴血清测定的关系 用CH2cI2处理前和处理后,分别对猕猴血清中孕酮和雌二醇含量的测定,结果表 明, 经过处理的血清样品.随着血清量的增加,孕酮和雌二醇的含量也随着增加,得到 较好的 剂量反应曲线而未经处理的样品,几乎投有什么变化,而且孕酮和雌二醇含量很低 (见 图l,2). 兰 审 e 静 啦 姆 盎 l1 誉 I 品 的样品 圈1耒处理的样品和用cH2ck处理的样品中孕酮的剂量反应曲线 墨 * 如 蠕 珏 士 样品 理的样品 田2来处理的祥品和用ccI,处理的样品中雕二醇的剂?反应曲线 同时为了确定CH2c的处理是否会引起部分孕酮和雌二醇的丢失.通过H一孕酮 和3H一雌二醇掺人法.测定处理前后的H一孕酮和H一雌二醇含量,计算处理前后孕酮 和雌激素的回收率结果表明,经CH2Ch处理后,孕酮和雌二醇的回收率分别为97%= 2.1%和95%?1.3%,说明CH2C12不会影响血清中孕酮和雌二醇的测定. 22注射米非司酮对血渍中孕酮和雌二醇的影响 在米非司酮注射过程中.血清中孕酮和雌二醇变化趋势为注射后一段时间内基本不 变(P>O.05).但与出血的发生有着明确的先后关系,从而证实了激素的变化源于蜕膜受 损这一推测(觅表1). 经济动物2001年 表I米非司酮对血清中孕酮和雌二醇的影响 Table1EffectofRU486or=progesteroneandeskadiolsecretionintema[~rhesusm~'bkeyate arlygeslaton 23米非司酮终止早孕的机理 米非司酮终止早孕对内分泌激素的影响主要表现在与孕酮的竞争性结台,在应用 RU486流产期问,虽然血清中孕酮和雌二醇没有明显变化,但E2/P比值有所增加 (P<0.05),说明米非司酮干扰内分泌激素之间的平衡(见表2). 表2米非司酮对血清中E2/p比值的影响 Table2.EffectofRU486oatheralioofEz/P_nfemalei~estlsmo~:eyateanygestaton 注:X?S.n=3:表示P<o05 3讨论 为了使猕猴血清中孕酮和雌二醇的含量适合于放射免疫测定法,本研究改进常规 的 测定方法,是为了从血样中完全提取血清.首先采用对血样充分温育,经离心,除去各种 非特异影响因素;同时,因猕猴血清中孕酮和雌二酵的含量很低且处于游离状态很少,严 重干扰了孕酮和雌二醇的测定,为了提高测定的准确性,降低非特异性结合,应用cH1cl1 作为提取液抽提血清中孕酮和雌二醇,提高了本方法的灵敏度.CH2C12处理的血清样品 的剂量反应曲线与标准孕酮和雌二酵的剂量反应曲线的相关性,表明了本试验采用的测 定法稳定性好.由此可见,用放射免疫测定法测定猕猴血清中孕酮和雌二醇的台量,具打 较高的灵敏度和特异性,其准确度也符合RIA试验的要求,提示本方法对猕猴的生殖激 不失为一种准确,可靠的方法. 素的测定, 临床上应用RU486终止早期妊娠过程中,血浆的hCG,孕酮和E2变化总的趋势为服 药后一段时间内基本不变,但随着阴道出血的发生,hCG,孕酮和E2水平均显着下降这 种降低过程与阴道出血的发生有着明确的先后关系,在终止妊娠成功的妇女中很典 型J.而前列腺素增高,这是因为首先RU486的抗孕激素作用,使蜕膜细胞坏死,从而导 致内源性前列腺素合成增加;其次RU486的抗孕激素作用,使孕酮抑制PGs合成的作用 减弱 蜕膜组织具有多种功能,除具有胚胎营养功能,免疫保护作用外,还能分泌催乳素 (PRL)和PGs等,因而在维持猕猴早孕方面起着重要作用L4.在RU486的作用下, 猕猴 的蜕膜细胞发生变性,坏死,胎盘随之发生退行性变,滋养层细胞合成和分泌hCG减少, 继而导致妊娠黄体萎缩,溶解,合成及分泌孕酮和E2减少』.而孕酮和E2在血浆与组织 第5卷第4期王锕立等:米非司酮对早孕赫猴孕酮和雌二醇分撼的研究49 中含量的减少,反过来导致蜕膜组织进一步坏死,剥落.由此形成一个恶性循环,最后导 致子宫收缩,将胚胎排出.试验进一步证明,猕猴早孕期间激素水平的变化以及它们之问 的平衡对维持正常的生理功能具有重要意义. 参考文献 【IFengqLiuKLiuYX.etalExpressionumbIla…lno…【】Va【.rin~bittsandurokina~erL~'eptOr】pr …tfh…monkeyut?du~'ingeayplacentation[J]Placenta,2000.21:184-193 [2]李振甲.韩春生王建勤放射免疫分析{盍[M]北京:科学技术文献出版牡.1980:262-290 L3]hK~obiiEN山】D(eds),PlantTM.PubertyInPnmat 【M]NewYork:3"hePhysiologyoiReproductionRavcn Press,19881767 [4]buK,LiuYx.HuZY,e 【Temlx~ralexpressionofuroldnasetylP~phsmino~enactivators,tissuetypeplasadn~gen actiwtotsinhibitorType-lin~hesusmonkey?uB【u妊umduringthehnealtlu^?am俩柚艇andgre啪【jj Molce1lF.ado~nd.1997.133;109,i16 l5]柚以谰.胡召元.邹如盒.等人和恒河嚣胎盘基盘分撼tPA和PAI一1部位的鉴定[J],科学通报,1997,42 f】2):i324—1326 信?息?桥 鲁 我基地1984年创办至夸,已形成规模太,品种优, 技术先进,产品回收能力强的综台养殖龙头企业,去年 被中国动植物网络中心授予全国经济动物养殖示范 场:基地下设毛皮动物实验场,年生产蓝狐,雪狐,乌 苏里貉,白貉约12000只;山鸡实验场年生产山鸡约 25000只;广州商行年销往广州,港澳地压野生动物 100万只以上.近几年为满足市场需求,在全国范围 内推广以下可行养殖项目. 一 ,蓝狐,银狐:以动物下杂和粮食饲养,属高档皮肉差用动物.年产一胎,产 仔8,l5只.如庭院养l0组种狐(每组1公2母)年可荻利6万元以上. =,乌苏里貉:杂食动特,高档皮内兼用,年产1胎,产仔8,l2只如庭院养 l0组种貉(每组1公2母)年可获利4万元以上. 养殖技术,笼具,疫苗,免费在场学习.办理发运覆挂疫手续. 三,服务:提供