[最新精品]MMP -9及TIM P-1在口腔白斑及白斑癌变组织中的表达及意义

[最新精品]MMP -9及TIM P-1在口腔白斑及白斑癌变组织中的达及意义 更多专业、稀缺文档请访问——搜索此文档，访问上传用户主页～ MMP -9及TIM P-1在口腔白斑及白斑癌变组织中的表达及意义 MMP -9及TIM P-1在口腔白斑及白斑癌变组织中的表达及意义 【摘要】目的:探讨MMP-9、TIMP-1在口腔癌变发病机制中的 作用和意义。方法:采用免疫组化染色SP法对人口腔粘膜白斑50例、 白斑癌变患者18例及正常口腔粘膜18例的粘膜鳞状上皮细胞MMP-9 及TIMP-1表达进行半定量性分析。结果: 粘膜白斑(白斑癌变MMP-9 、 TIMP-l的表达均高于正常口腔黏膜组织( P < 0.05)。MMP-9表达强 度依次递增，TIMP-1表达强度依次递减。结论: MM P-9可能在口腔 白斑的发生发展中起重要作用，其活性受T IM P-1的负性调控。 【关键词】白斑;基质金属蛋白酶-9;基质金属蛋白酶抑制剂-1; 免疫组织化学;白斑癌变 MMP -9 and TIM P-1 in oral leukoplakia and leukoplakia tissues and its significance 【Abstract】 Objective MMP -9 and TIM P-1 in oral leukoplakia and leukoplakia tissues and its significance. Methods: Immunohistochemistry SP method were 50 cases of oral leukoplakia, 18 patients with leukoplakia and normal oral mucosa of 18 cases of mucosal squamous cell MMP-9 and TIMP-1 expression was semi-quantitative analysis. Results: leukoplakia. Leukoplakia MMP-9, TIMP-l expression were higher than normal oral mucosa (P <0.05). Expression of MMP-9 gradually increased, TIMP-1 expression of descending order. Conclusion: MM P-9 in oral leukoplakia may play an important role in the development of its activity by the T IM P-1's negative regulation. 【Key words】 leukoplakia; matrix metalloproteinase -9; matrix metalloproteinase inhibitor -1; immunohistochemistry; leukoplakia 更多专业、稀缺文档请访问——搜索此文档，访问上传用户主页～ 【中图分类号】R46+2【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2011)03-0021-01 口腔粘膜白斑是公认的癌前病变，其癌变率约在3-5,左右。发病机制尚不十分清楚。已有研究表明，多种蛋白酶及其抑制剂在肿瘤的生长、浸润和转移过程中起重要作用。基质金属蛋白酶-9 (matrix metalloproteinase-9， MMP-9)通过降解基膜中的层粘连蛋白、 ?型胶原等成分， 破坏基膜的完整性， 并因此被认为在恶性肿瘤的浸润转移中扮演重要角色，MMP- 9的活性受基质金属蛋白酶抑制剂-1 (tissue inhibitor of metalloprot einase -1，TIMP-1)的负性调控。口腔鳞状细胞癌( 鳞癌)MMP-9及TIMP-1的表达相关已见报道^[1]。口腔粘膜白斑中MMP-9及TIMP-1的表达如何，罕见报道。本研究采用MMP-9及TIMP-1单克隆抗体白斑组织 50例。白斑癌变组织18例。研究MMP-9及TIMP-1与白斑癌变过程之间的关系。 1 材料与方法 1.1 材料:2001年3月~2009年3月经本院病理确诊的口腔粘膜 最白斑患者 50例，其中男性32例，女性l 8 例 ，年龄最大68岁，小37岁。在口腔粘膜白斑的基础上长期追踪后发现鳞癌的患者 1 7例，其中男性1l例，女性6例，年龄最大 6 8岁，最小49岁。人正常口腔粘膜组织 1 8例为对照组。取病变组织及正常口腔粘膜组织由病理科制成蜡块备用。 1.2 方法 采用免疫组化SP方法对18例正常口腔粘膜标本，50例口腔粘膜白斑标本，18例口腔白斑癌变标本进行检测试剂MMP-9，TIMP-1鼠单克隆抗体为一抗，工作浓度分别为1:80，1:100;SP试剂盒(包括生物素标记的第二抗体、第二抗体非免疫性山羊正常封闭血清、SP溶液、复合消化液等)、胰酶、DAB显色剂(二氨基联苯胺)购自Zymed公司，双氧水、中性甲醛均购自北京鼎国生物公司。用磷酸盐缓冲液代替一抗作为空白对照，SP法染色MMP -9，TIMP-1。具体操作按说明进行，6μm石蜡切片常规脱蜡水化,由胰酶消化15min修复抗原,加50μL 过氧化物酶阻断液室温15min,加50μL非 更多专业、稀缺文档请访问——搜索此文档，访问上传用户主页～ 免疫性山羊血清室温10min,分别加一抗(MMP-9，TIMP-1鼠单克隆抗体)室温2h,加二抗室温10min,加链霉亲和素-过氧化物酶室温10min后二氨基联苯胺显色,苏木素轻染,脱水,透明,封片。同时用PBS分别代替抗体作阴性对照，用已知阳性切片作阳性对照。置于400倍物镜下，每张切片随机选6个视野，用Olympus Micro Image 4(0图像处理系统自动计数免疫阳性细胞数。采用两人双盲法观察切片，以细胞浆内出现棕色、棕黄色颗粒为阳性细胞，以 Bresalier^[2]半定量公式判断染色结果。综合染色强度和阳性细胞数量分级,按着色强度将无、弱、中、强分别记为0~3分:按阳性细胞比例数将,20%为0 分,20%~50%为1 分,50%~75%为2分,,75%以上为3分。两者相加后分3级:0~2分为(-), 3~4 分(+),? 5分(++)。VEGF表达的判定以染色强度和阳性纽胞百分率的得分之和进行评估。a(染色强度:阴性为0，弱阳性为1，阳性为2，强阳性为3;b(阳性细胞百分率:无阳性细胞为0，?25 为1，26 ~5O 为2，>5O 为3;a+b之和最高为6，0~2视为阴性，3~6视为阳性。根据公式计算每张切片的平均染色强度:I,s,0×F,0，1×F,1，2×F,2，3×F,3。记I,s,0为阴性，0,I,s?1为弱阳性，1,I,s?2为中度阳性，2,I,s?3为强阳性。 1.3 统计方法 各组间上皮MMP-9，TIMP-1表达阳性率采用X,2验，检验水准P,0.05。所有处理在SPSS13.0软件上进行。 2 结果 2.1 癌变组织、白斑组织经MMP-9，TIMP-1免疫组织化学染色后，阳性标本中可见细胞的胞浆出现棕黄色颗粒。 2.2 3组标本MMP-9，TIMP-1表达情况。 2.3 MMP-9在正常口腔黏膜，黏膜白斑，白斑癌变中表达率分别为27.8,， 72.0,，77.8,。3组间 检验，正常组与白斑组，白斑癌变组均有显著性差异(P,0.05 );白斑组与自斑癌变组无显著性差异( P>0.05)。 TIMP-1在正常口腔粘膜，粘膜白斑，白斑癌变中表达率分别为88.9,，68.0,，16.7,。3组间 检验，正常组与白斑 更多专业、稀缺文档请访问——搜索此文档，访问上传用户主页～ 组，白斑癌变组均有显著性差异 (P<0.05);白斑组与白斑癌变组有 显著性差异(P<0.05)。 3 讨论 口腔粘膜白斑属于癌前病变 ，从正常口腔粘膜膜组织发展到白 斑再到癌变的过程，机制尚不十分清楚。MMP-9是一种被糖化的，分 ku的胶原酶，主要是由中性细胞和巨噬细胞产生。TIMP-1子量为92 是MMP-9的特异性抑制剂，与具有酶活性的MMP-9以1:1分子比例 非共价键结合而抑制MMP-9的活性。许多研究表明，MMP-9的过度表 达与人类恶性肿瘤的侵润和转移过程密切相关^[3,4]。 本研究表明,与正常对照组相比,白斑组的MMP-9表达阳性率明 显增高,而白斑癌变组的MMP-9的表达阳性率增加不明显; 与白斑组 相比,白斑癌变组的MMP-9表达无明显增加,说明MMP的表达从正常胞 膜到癌变过程是逐渐增加的，表现为从量变到质变的过程。而与正常 对照组相比,白斑组的TIMP-1表达阳性率明显降低,而白斑癌变组的 TIMP-1的表达阳性率降低也明显; 提示TIMP-1对MMP-9从正常-白 斑-癌变过程是一种抑制作用。 参考文献 [1] 刘友良，唐瞻贵等.基质金属蛋白酶-9及基质金属蛋白酶抑 制剂 -1在口腔鳞状细胞癌中的表达研究[J].口腔医学，2010，2(30): 80-82 [2] Chen YK,Hsuen SS,Lin LM,Increased expression of inducible nitric oxide synthase for humam oral submucous fibrosis,verrucous hyperplasia,and verrucous carcinoma[J]. IntJ Oral Maxillofac Surg,2002,31(4):419 [3] Ashida k,Naktsukasa H,Higashi T,et al.Cellularb distybution of 92-KD type collagenase/gelatinace Bin human hepato cel-lular carcinoma [J].Am J Pathto,1996,149(6):1803-1811 [4] Shirahe K,Shimada M,Kajiyama K,et al.Expression of matyixmetall-oproteinase-9(MMP) in surgically resected in tyahepatic cholangic 更多专业、稀缺文档请访问——搜索此文档，访问上传用户主页～ Carcinomas[J].Surgery,199,126(5):842-846, 作者单位:418000 湖南怀化市第二人民医院,1 570102 海南医学院附属医院,2,