黄体酮乳膏经皮给药制剂研究（可编辑）

黄体酮乳膏经皮给药制剂研究（可编辑） 黄体酮乳膏经皮给药制剂研究 新疆医科大学 硕士学位论文 黄体酮乳膏经皮给药制剂的研究 姓名:赵文惠 申请学位级别:硕士 专业:药剂学 指导教师:高晓黎 2009-04 摘 要 黄体酮乳膏经皮给药制剂的研究 研究生:赵文惠 导师:高晓黎 教授 摘 要 目的:测定黄体酮在三种植物油中的平衡溶解度、制备工艺研究、质量研 究、研究黄体酮乳膏剂与胶囊剂在大鼠体内的药物动力学和相对生物利用度、考察 局部用药安全性及初步稳定性，研制黄体酮乳膏经皮给药制剂。:1.HPLC法测 定黄体酮的平衡溶解度。应用单因素试验筛选黄体酮乳膏的基质组成;用正交试验 优选乳化剂;2.采用HPLC测定乳膏剂中黄体酮含量，制定质量标准;3.通过加速试 验和长期试验考察制剂的初步稳定性;4.采用酶联免疫法测定大鼠血清中黄体酮药物 浓度，用DAS程序计算药物动力学参数;5.采用2%黄体酮乳膏对新西兰白兔进行皮 肤急性毒性实验、皮肤刺激性试验;对健康豚鼠进行皮肤过敏试验。结果: 1.黄体酮 在辛葵酸甘油酯的平衡溶解度为45.53 μg/ml，在红花油的平衡溶解为16.46μg/ml ，在 橄榄油的平衡溶解度为15.37 μg/ml 。2.优选确定黄体酮乳膏的处方组成。3.确定制剂 的质量标准，用高效液相色谱法进行有关物质的检查和含量测定，未发现其他甾体; 选铝管为黄体酮乳膏的包装材料。4.在室温和加速条件下观察，样品的各项指标均无 明显变化;5.黄体酮乳膏体内药动学行为符合一室开放模型，体内吸收血药浓度平稳， 维持1-2天释放，与对照组相比，AUC值有显著性差异，生物利用度明显增加，相对 生物利用度为353.7% 。6.2%黄体酮乳膏对新西兰白兔未引起急性毒性反应，对新西 兰白兔完整皮肤和破损皮肤无刺激性反应;对豚鼠完整皮肤无致敏作用。结论: 1.HPLC适用于黄体酮的平衡溶解度的测定;2.黄体酮乳膏剂的处方组成稳定、合理、 外观色泽光亮、质地细腻、涂展性好;3.制剂的质量标准可行，质量可控，并且定量 分析方法分离度好，灵敏度高;4.制剂的初步稳定性良好，为处方工艺及包装材料的 供依据;5.与黄体酮胶囊相比, 黄体酮乳膏的药物动力学参数呈可行性提 现明显的长 效缓释特征。应可成为安全长效且使用方便的制剂。6.局部应用黄体酮乳膏是安全的， 对完整皮肤不产生刺激性、过敏性和急性毒性; 关键词: 黄体酮乳膏;平衡溶解度;制备工艺;质量标准;药物动力学; ―1― 新疆医科大学医学硕士学位论文 Study on theTransdermal Drug Delivery Preparation for Progesterone Cream Postgraduate :Zhao Wenhui Supervisor :Gao Xiaoli Prof. Abstract Objectives: To determine equilibrium solubility of Progesterone in three kind Vegetable oil ，study on the preparation technology and quality standard, To study the pharmacokinetics and relative bioavailability of the progesterone cream and capsule in rats. To test the safety of the localized administration and the preliminary stability. To develop the Transdermal Drug Delivery preparation of progesterone cream. Method: 1. HPLC was established to determ the equilibrium solubility of the progesterone. The monofactor test was used to select the bases of the progesterone cream, the orthogonal test was used to optimize emulsifying agent. 2. To determine the content of progesterone in the progesterone cream by HPLC and set up the quality standard of progesterone cream.3. To study the premliminary stability of the progesterone cream by the accelerated test and the long-term test. 4. The concentration of the progesterone in the rats serum was mensured by the ELISA.The DAS software was used to calculate pharmacokinetic parameters. 5. The 2% progesterone cream was tested, the acute cutaneous toxicity experiment and skin irritation experiment were smeared on the alba-New Zealand rabbits , and the skin allergy reaction was performed in guinea pigs. Result: 1. the equilibrium solubility of progesterone in Octyl and Decyl Glycerate was 45.53μg/ml ，which in safflower oil was 16.46μg/ml,which in Olive oil was 15.37μg/ml. 2. The prescription composition of the progesterone cream was maked certain. 3. The quality criteria of the progesterone cream was setted up. With the content of the progesterone and its related substance was determined , other Steroids were not detected by HPLC,the aluminium-pipe was selected to the packed material of the progesterone cream. 4. on the normal and accelerated condition,the indicaters of the progesterone cream didn’t change significantly. 5. The results indicated that the Plasma concentration -time curves for Progesterone cream and Progesterone capsule fit one compartment open model after applied to the rats. the plasma concentration in the rat of the progesterone cream was relased and maintain in the 1-2 days . there was significant difference in AUC between cream and capsule, which ―2― Abstract suggested that cream had Higher bioavailability than capsule, the relative bioavailability is 353.7%. 6. The 2% progesterone cream hadn’t the acute toxicity and irritation to the intact or damaged skin of the alba-New Zealand rabbits and hadn’t allergy - inducing to the skin of guinea pigs.Conclusion: 1. The HPLC can be applied to the determine of the equilibrium solubility of the progesterone 2. The prescription of the progesterone cream was stable, proper and its outer appearance color was bright, its coating malleability was good. 3. The quality standard of the preparation was feasible and controllable, and the results showed that the quantitative analysis had the good resolving power and the high sensibility; 4. The preliminary stability of the preparation was sound, which provided evidence for the feasibility of the technology and packing materials; 5. Compared with the progesterone capsule, the pharmacokinetic parameters of the progesterone cream presented significant slowing releasing character,it should be safe ,long-acting and convenient. 6. The local application of the progesterone cream was safe, and no irritation allergia and toxicity to the intact skin. Key words: progesterone cream; equilibrium solubility; preparation technology study; quality standard; pharmacokinetics ―3― 中英文缩略词对照表 英文缩写 英文全名 中文译名 ERT Estrogen replacement therapy 雌激素 替代疗法 激素 替代疗法 HRT Hormone Replacement Therapy (雌，孕激素合用) HPLC High performance liquid chromatography 高效液相色谱法 PC Progesterone cream 黄体酮乳膏 YMX Yiin 益 玛欣 TDDS Transdermal drug delivery system 经皮给药系统 TTS Transdermal therapeutic system 透皮治疗系统 ELISA Enzyme-linked immunosorbent assays 酶联免疫吸附法 液相色谱-质谱联 LC-MS liquid chromatography-mass spectrometry 用技术 气相色谱-质谱联 GC-MS Gas chromatography-mass spectrometry 用技术 GC Gas chromatography 气相色谱法 学位论文独创性说明 本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的成果。据 我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过 的研究成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明 确的说 明并表示谢意。 研究生签名: 时间: 年 月 日 学位论文版权授权书 本人完全了解新疆医科大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学 位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文 用于赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查询。有权将学位论文的内 容编入有关数据进行检索，有权将学位论文的标和摘要汇编出版。保密的学位论 文在解密后使用本规定。 研究生签名: 时间: 年 月 日 导师签名: 时间: 年 月 日 新疆医科大学医学硕士学位论文 前 言 黄体酮 Progesterone ，又名孕酮、助孕素、孕烯二酮，为一种21 一碳甾体天然孕 激素。内源性黄体酮是在卵巢、睾丸、肾上腺、胎盘和中枢神经系统的神经胶质细 胞中，在黄体生成激素 LH 的作用下，由孕二醇转化而得。内源性黄体酮可使子宫 内膜从增生期转化为分泌期，从而促使子宫内膜成熟、剥脱并维持月经周期:黄体酮 还可使子宫做好接受胚胎植入的准备，在妊娠早期可稳定子宫内膜并起保胎作用， 是妊娠成功所必需的[1-3] 。 黄体酮广泛应用于黄体功能不全，体外授精后，经前综合征、继发性闭经，激素 补充疗法 hormonereplacementtherapy，HRT 中，在激素补充疗法中，给与雌激素的 同时，必须长期连续或在月经后期同时给与孕激素，以避免子宫内膜的过度增生， 降低因单用雌激素所引起的绝经后妇女患子宫内膜癌的风险，且能更好地预防骨质 而黄体酮是体内存在的成分，在孕激素类药物中副作用最疏松与牙周疾病。 小，因 此，在 HRT 中口服天然黄体酮制剂有着极大的临床需求。随着HRT 的更广泛应用， 黄体酮的临床应用价值会越来越大[4] 。 外源性黄体酮分为合成与天然黄体酮两大类。由于一些合成的孕激素在体内有 过量雄激素样作用，因此临床上应用时首选生理性孕激素。特别适用于绝经前后妇 女，因为生理性激素能持久为绝经后妇女作激素替代治疗。生理性黄体酮用 于激素 [5] 替代疗法 (HRT )，具有不抵消性激素使高密度脂蛋白增加和心血管病降低的优点 。 黄体酮除了在妇科外，也应用于非妇产科疾病中，如输卵管结石、肾绞痛、胆总管 结石与胆绞痛、前列腺增生症、食管癌等疾病的辅助治疗[6-7] 。 黄体酮可从植物甾醇如薯预皂苷配基经化学反应合成。1934 年黄体酮首先合成出 售，其与内源性黄体酮结构组成完全相同，统称天然黄体酮。天然黄体酮为白色或 类白色粉末，无臭、无味，分子量 314.47，熔点 128 到 132?，脂溶性很强，在37? 水中溶解度仅为 2mg/L，在氯仿中极易溶解，在乙醇、乙醚、植物油中溶解[8] 。 由于黄体酮特殊的理化性质，即黄体酮因溶解度很低 仅为2mg/L ，体内吸收差， 且口服后存在强的首过效应，可在体内多个组织代谢，半衰期极短 仅为数分钟 ，生 物利用度很低且患者个体差异较大，临床上一般作为肌注使用。但黄体酮在治疗中 常需长期给药，肌注给药给患者带来了极大的不便，且黄体酮注射剂为油溶液，注 射后疼痛，长期给药也会使给药部位产生萎缩，所以克服黄体酮的吸收差与代谢问 [9] 题，已成为黄体酮应用中的关键问题 。 黄体酮作为一种天然孕激素，在临床上应用广泛，因黄体酮需长期应用，克服 口服后的首过效应和广泛的代谢问题，以及改善黄体酮生物利用度低黄体酮 问题成 ―4― 前 言 为目前国内外研究的重点。因此,近年来不断探索其他的给药途径, 经研究证实，黄 体酮经皮下、直肠、阴道给药后均可被吸收[10] 。药物透皮吸收为理想的零级动力学 在激素的透皮吸收研究中发现甾体激素比其他激素易于透过皮肤[11], 过程。 黄体酮是 甾体激素, 黄体酮注射剂的临床不良反应[6]及它的分子量、理化性质、用药量也都表 明黄体酮有可能成为理想的透皮给药的药物，透皮吸收是被动吸收过程[12] 黄体酮在 临床应用比较广泛,具有重要的临床应用价值。但目前临床多以注射剂或口服制剂给 ,这种全身用药方式具有明显不良反应,研究高选择性作用于子宫内膜、对药 其它组织 影响较小、不良反应更少的黄体酮制剂是克服该药全身用药不良反应的研究方向[13] 。 经皮给药系统 transdermal drug delivery system, TDDS 是指在经皮肤给药后，药 物迅速穿进皮肤，进入血液循环而起全身治疗作用的控释剂。TTS 系统具有超越一 般给药方法的独特优点，可以不经过肝脏的“首过效应”和胃肠道的破坏，且皮肤 间层还有储存作用，使药物浓度曲线平级，避免了“峰谷现象”，提供可预定的和较 长的作用时间，维持稳定持久的血药浓度，毒性和不良反应小，使用方便。经皮给 药系统以其独特的优点，成为近年来国内外医药工作者的研究热点，发展迅速。研 究中的经皮制剂有膏药、搽剂、涂膜剂、巴布剂、骨架型贴片、膜控型贴片、微乳、 脂质体、包合物、前体药物与低共融物等[14] 。 透皮给药制剂 (经皮给药系统)是目前国际重点开发内容之一, 其成果不断涌现, 上市产品不断增多,它还可以与缓释制剂、前体药物、控释制剂及靶向制剂相结合形 成更新的透皮缓释制剂、透皮前体药物、透皮控释制剂、透皮靶向制剂,使之成为第 制剂重点开发的给药系统[15] 。药物透皮吸收临床应用领域发展三代药物 最快最具有 临床应用价值当属透皮控释制剂。它将药物透皮吸收临床应用推向崭新的台阶。真 正吻合了现代药剂发展的节拍，达到专属性强、定向、定位、便利、稳定、安全、 副作用小的特点[16] 。此外，如果其可用现代经皮给药方法代替传统的注射方法, 将广 泛地节约医疗资源:不需要专业培训的医护人员注射;减少一次性注射用品的丢弃 对环境造成的污染和浪费;避免针头共用造成的疾病传染等。总之, 经皮给药系统可 使患者受益,且给药方便,具有良好的社会效益和经济效益,其发展前景广阔,市场潜力 [17] 巨大，值得继续研究 。 黄体酮乳膏作为一种经皮吸收制剂，可避免口服给药可能发生的肝脏的“首过 效应”和胃肠道灭活、可维持恒定的血药浓度或生理效应，减少胃肠给药的副作用、 延长作用时间，减少用药次数、通过改变给药面积调节给药剂量，减少个体间的差 异，且患者可以自主用药，也可以随时停止用药。该制剂在国外广泛的应用于绝经 及更年期综合征的治疗，能够减轻绝经及更年期妇女的各类症状，即潮热、烦躁焦 虑、内心不安、记忆力减退、胸闷及皮肤张力下降、干燥、变薄等。国外的同类产 品有 Progesta Natural Liposomic Progesterone Cream、progesterone Liposomal Skin ―5― 新疆医科大学医学硕士学位论文 ’ Cream, Fem Cream, Pro-Gest Cream, Pro-Gest Body Cream、Women s Balance Cream、 Pro-Fem Progesterone Cream 等[18-27] 。但目前国内尚未见黄体酮乳膏的报道。 本课题研究目的是开发黄体酮乳膏经皮吸收制剂，由于黄体酮的溶解度低，为 了防止黄体酮由于未充分溶解导致黄体酮乳膏在放置过程中主药析出的现象发生， 拟通过处方前研究考察黄体酮在三种油溶剂中的平衡溶解度，根据黄体酮在 三种油 溶剂中的平衡溶解度确定各种油溶剂的用量，确保黄体酮乳膏的含量均匀性;拟单 因素试验筛选黄体酮乳膏的基质组成，用正交试验优选乳化剂，同时以外观性状、 、耐热试验、耐寒试验、pH 测定为评价指标确定乳膏的最终处方离心试验 与制备工 艺;用放大三批的供试品建立黄体酮乳膏的质量标准，在此基础上，进一步考察黄 体酮乳膏的稳定性为制剂的开发奠定基础;为指导临床用药剂量，对黄体酮乳膏和 黄体酮胶囊进行在大鼠体内的药物动力学研究，对其相对生物利用度进行考察;为 对黄体酮乳膏进行皮肤急性毒性实验、皮肤刺激考察皮肤局部用药安全性， 性试验、 皮肤过敏性试验。通过上述试验对该新制剂的开发研究奠定基础。 实验仪器与材料 1(仪器 上海光学仪器六厂生物显微镜 XSP-3CAI ，恒温恒湿培养箱HH-500SD (重庆市 永生实验仪器厂);强光照射试验箱 SHH-100GD (重庆市永生实验仪器厂); LC-20AB 高效液相色谱仪、SPD-M20A 检测器(日本岛津);Waters 2690 高效液相色谱仪、 Waters2487 紫外检测器;高速低温离心机(SIGMA,2-16K );美国伯乐公司酶标仪 model550 ;离心机TGL-16B 上海安亭科学仪器厂 ;电子天平(北京赛多利斯天平有 限公司)电热恒温水浴锅DK-S22 型(上海精宏实验设备有限公司);pH 计 FE20 梅 特勒―托利多仪器有限公司 ;KQ3200 超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司); 2 (药品与试剂 黄体酮对准品(中国药品生物制品鉴定所提供，20041205 );黄体酮 原料药， 陕西汉江药业股份有限公司，批号 20041221 );辛葵酸甘油酯 浙江建德市千岛精细 食品级，20071202 ;红花油(新疆塔原红花有限责任化工实业有限公司， 公司);橄 榄油(青岛海逸宏基健保食品有限公司);甲醇(美国天地公司，色谱纯);泊洛萨 姆 407 (德国BASF 公司，20080312 );氮酮(天津市福晨化学试剂厂，分析纯， 20061218 );二甲基硅油(自贡晨光药业有限公司，药用级，);天然VE (德国Cogin 公司，药用级);硬脂酸聚烃氧(40 )酯(南京威尔化工有限公司，药用级);甘油 (湖南尔康制药有限公司，药用级20080118 );丙二醇(湖南尔康制药有限公司，药 ―6― 实验方法与结果 用级 20071206 );孕酮ELISA 试剂盒(美国 Adlitteram Diagnostic Laboratories 公司提 供);黄体酮胶囊(商品名益玛欣，国药准字H20041902,标示量 50mg，批号 20080424 ， 浙江仙琚制药股份有限公司)。 3 (动物 Wistar 大鼠，体重 250,320g ;新西兰白兔,雌性,体重 2.0 ,2.5 kg ;豚鼠30 只， 雌性,体重 (300 ?20g );动物均由新疆医科大学实验动物中心提供,许可证号:SYXK (新2003-0001 )。 实验方法与结果 1(黄体酮的平衡溶解度测定 处方前研究 1.1 色谱系统适用性条件 色谱柱:Waters SymmetryShieldTM RP 18 150mm ×4.6mm ，5μm ,流动相: 甲醇-水 65 ?35 ,检测波长:245nm, 流速:1ml/min,柱温:25 ?。在上述 色谱条件下,黄体酮的 保留时间为 14.56min，色谱图见图 1 a b 图1 对照品(a )与样品(b )色谱图 1.2 标准曲线的制备 1.2.1 储备液的制备 精密称取黄体酮标准品 10mg 置 5ml 的容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度， 摇匀，得 2mg/ml 的原液;从原液中精密吸取 1ml 原液置 10ml 容量瓶中，加甲醇稀 释至刻度，得 200 μg/ml 的储备液。 1.2.2 标准曲线的绘制 精密吸取黄体酮的储备液 0.3ml、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0 ml 、2.5ml 分别置于 的容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得到浓度分别为 6 10ml μg/ml、 10 μg/ml、20 μg/ml、30 μg/ml、40 μg/ml、50 μg/ml 的标准溶液。分别取各标准溶 ―7― 新疆医科大学医学硕士学位论文 液注入高效液相色谱仪，以各组分的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回 归，得黄体酮的标准曲线方程为 Y 26433X-18745,R 0.9997 ，以上结果表明，在 6.0 μg /ml,50 μg/ml 范围内，黄体酮峰面积与浓度具有良好的线性关系。 表 1 黄体酮进样浓度与峰面积关系 进样浓度C μg/ml 6.0 10.0 20.0 30.0 40.0 50.0 峰面积A 145029 249541 500850 761724 1052300 1301696 y 26433x - 18746 1400000 2 R 0.9995 1200000 ) 1000000 积 800000 面 峰 600000 A 400000 200000 0 0 10 20 30 40 50 60 C μg/ml 图2 黄体酮标准曲线图 1.3 方法学考察 1.3.1 回收率实验 准确取已知含量的样品,加入不同浓度的对照品。按上述色谱条件测得的回收率 结果。 表2 黄体酮在辛葵酸甘油酯的饱和溶液的含量测定回收 率实验结果 已知含量 加入对照品 测定值 回 收率 平均回收率 RSD % (μg/ml ) (μg/ml ) (μg/ml ) (% ) (% ) 5 9.59 100.43 5 9.38 96.10 5 9.60 100.45 10 14.56 99.90 4.4708 10 14.46 98.89 100.02 1.80 10 14.52 99.48 15 19.83 101.74 15 19.90 102.17 15 19.73 101.03 ―8― 实验方法与结果 表3 黄体酮在红花油的饱和溶液的含量测定回收 率实验结果 已知含量 加入对照品 测定值 回收率 平均回收率 RSD % (μg/ml ) (μg/ml ) (μg/ml ) (% ) (% ) 5 6.75 100.98 5 6.79 101.80 5 6.77 101.54 10 11.46 97.62 1.6675 10 11.30 96.01 98.29 1.81 10 11.16 94.66 15 16.46 98.41 15 16.25 97.01 15 16.19 96.61 表4 黄体酮在橄榄油的饱和溶液的含量测定回收 率实验结果 已知含量 加入对照 测定值 回收率 平均回收率 RSD (μg/ml ) 品(μg/ml ) (μg/ml ) (% ) (% ) % 5 6.62 101.56 5 6.59 101.00 5 6.48 98.65 10 11.81 102.69 1.5032 10 11.52 99.81 101.31 1.57 10 11.93 103.84 15 16.70 101.01 15 16.95 102.68 15 16.63 100.55 精密度实验 1.3.2 分别取黄体酮在三种植物油中的饱和溶液按“2.1 ”条色谱条件连续 进样 6 次, 计算相对标准偏差 RSD ,结果 RSD 分别为 0.1308% 、0.1508%和 0.185%, 均小于 2%, 表明该方法的精密度良好。 1.4 平衡溶解度的测定 平衡法是将被测物系在某一温度下恒温搅拌一定时间,静置后分析上层溶液的组 温度下的溶解度。平衡法测定物质的溶解度数据,代表着物质溶解成作为该 达到真实 ―9― 新疆医科大学医学硕士学位论文 溶解平衡的数据,因此只要取样分析中精心操作, 采用高灵敏度的分析仪器 如 HPLC 等 进行检测分析,可以得到可靠的溶解度数据,而且该法对达到溶解平衡的速度没有 [28-29] 限制,对溶解速度快和慢的固液体系均可使 用 。 1.4.1 黄体酮饱和溶液的制备 将过量的黄体酮至于 10ml 具塞玻璃试管中,分别加入辛葵酸甘油酯、红花油、橄 5ml,25?摇床振摇24h, 离心,取上清液备用。 榄油各 1.4.2 供试样品溶液的制备 用内容量移液管精密黄体酮的饱和溶液 1ml，置 50ml 量瓶中，用乙醚分数次洗 涤移液管内壁，洗液并入量瓶中，加乙醚稀释到刻度，摇匀;精密量取 2.5 ml 置具 塞离心管中，在温水浴中使乙醚挥散，用甲醇振摇提取 4 次(每次 5 ml )每次振摇 10 分钟后离心 15 分钟，并用滴管将甲醇液移至 50ml 量瓶中，合并提取液用甲醇稀 释到刻度，摇匀;照黄体酮含量测定方法，经 0.45μm 滤膜过滤，取 10 μl 注入液相色 谱仪[30] 。 1.5 结果 对黄体酮的试样和黄体酮标准品分别进样,测得黄体酮试样在不同溶剂 环境中的 峰面积积分值见表 5 表5 黄体酮溶解度实验结果表 溶剂类型 峰面积积分值 样品溶解度 μg/ mL 平均值 μg/ mL RSD % 辛葵酸甘油酯 1175084 45.16 45.53 0.70 1189269 45.70 1189955 45.73 红花油 412640 16.32 16.46 0.83 416922 16.48 419772 16.59 橄榄油 386866 15.35 15.37 0.36 389325 15.44 386651 15.34 从表中结果可以看出:黄体酮在辛葵酸甘油酯的溶解度最大，在红花油 和橄榄 油的溶解度相当，其中黄体酮在辛葵酸甘油酯的溶解度约为红花油和橄榄油 的溶解 度 3 倍左右。辛葵酸甘油酯与甲醇互溶，其粘度和水的粘度相当，且无色 无味，不 易酸败，是很好的植物油替代品。 ―10― 实验方法与结果 2 (黄体酮乳膏制备工艺研究 2.1 剂型的选择 在黄体酮软膏处方的过程中，为制得稠度适宜、均匀细腻、涂展性好、易 清洗、稳定以及药物释放和皮内渗透较快的软膏，我们选用乳剂型基质，亦即所制 得的软膏为乳剂型软膏。 相对于油包水型基质，水包油型基质更加容易清洗，而且水包油型基质软膏中 药物的释放和皮内渗透较快，同时由于基质中水分的存在，使其增强了润滑性，易 于涂布。因此黄体酮乳膏拟定为水包油型乳剂。 2.2 工艺选择 制备软膏的基本要求，必须使药物在基质中分布均匀，细腻，以保证药 物剂量 与药效，这与制备方法的选择特别是药物加入方法的正确与否关系密切。乳剂型软 膏采用乳化法。乳化法是将处方中的油脂性和油溶性组分混合加热至 80?左右成油 (油相)，另将水溶性组分溶于水后一起加热至 80?成水溶液(水相)，溶液 使温度 略高于油相温度，然后将水相逐渐加入油相中，边加边搅至冷凝。固定处方组成筛 选完后，主要以外观，稳定性为考察指标，用单因素考察加药方式。 2.3 处方设计 为制成外观性状良好的(包括稠度适宜、均匀细腻、涂展性好、易清洗等)、稳 定的以及药物释放渗透快的 O/W 型乳膏，处方中选用了适宜的乳膏基质、乳化剂、 增溶剂、保湿剂、防腐剂以及渗透促进剂。 2.3.1 主药含量: 文献中有 2 % 、4 % 、8 %等黄体酮乳膏广泛用于绝经前后妇女和更年期综合征 的治疗。在国外，对于妇女更年期综合征除了用雌激素以外，大部分用黄体酮软膏 来减轻各种症状。2 ,黄体酮软膏可以直接涂抹在胸部、腋下、大腿内侧或直接用在 脸上，使用非常方便，不需要特殊设备，可以擦在身体的任何部位[31]，现以2%黄体 酮乳膏为准设计处方 2.3.2 辅料含量 2.3.2.1 透皮吸收促进剂、增溶剂、保湿剂、消泡剂 本课题组研究者通过实验证明 的氮酮为透皮吸收促进剂，与 5%的丙二醇合用效果更佳[32] 。黄体酮2% 在油相和水 相中溶解性均不好，丙二醇同时作为增溶剂，增加药物的溶解度，同时兼具保湿和 防腐作用。加入泊洛萨姆 407 作为增加黄体酮在油相的溶解度，同时调节油相的稠 度较好，而且泊洛萨姆 407 与皮肤有很好的亲和性。甘油作为 o/w 乳膏常用的保湿 剂，防止外相中水分失散而使乳膏变硬。需用甘油 12%,16%,同时加入消泡剂二甲 基硅油改善乳膏的涂展性，用量为 2% 。 ―11― 新疆医科大学医学硕士学位论文 2.3.2.2 防腐剂、抗氧剂 为防止乳膏污染、变质和腐败，加入适当的防腐剂。本方 选用尼泊金乙酯作为防腐剂。因为黄体酮不溶于水，难溶于油相基质。但溶于植物 油，为使其尽量均匀分散，参考国外黄体酮乳膏的配方，拟选择将其先加入 混合植 物油(用红花油、橄榄油、辛葵酸甘油酯等)中充分溶解后再加入其他油相成分。 植物油遇光、空气、高温等情况，易氧化降解。微量金属离子往往对氧化反应起催 作用，因此在用植物油作为基质时，一般要加少量抗氧剂，如 VE 化 和辅助抗氧剂 EDTA 。VE 浓度为 0.01%,0.5% 。 2.3.2.3 基质 油相应用泊洛萨姆 407 和单硬脂酸甘油酯调节稠度，作为软膏基质。 并用辛葵酸甘油酯、橄榄油、红花油适当调整油水两相的比例。 2.3.2.4 乳化剂 使用的乳化剂硬脂酸聚烃氧 40 脂，用量拟定为 3,7%，辅助乳化剂 单硬脂酸甘油酯用量为 1,3%和泊洛萨姆 407 用量为 6,8%待定，软膏 pH 值应接 近人体皮肤 pH5-6 的范围，以减少因pH 值不适对皮肤产生的刺激作用。 因此，实验集中于探索混合乳化剂单硬脂酸甘油酯、泊洛萨姆 407 和硬脂酸聚 烃氧(40 )酯的用量，以及油相基质(红花油、橄榄油、辛葵酸甘油酯)和水的用 量上。为此我们设计了以下实验: 单硬脂酸甘油酯用量的取值范围:1,3% ;硬脂酸聚烃氧(40 )酯用量的取值范 围:3,7% ;泊洛萨姆407 用量的取值范围:6%,8%;油相基质用量的取值范围: o/w 乳膏油相的相体积比以不超过 40%较为稳定，因为黄体酮为脂溶性药物，溶解度 低，为保证主药的均匀分散，故此乳膏设计为重油型，除去以上已知用量，其余植 物油总量为 23,27% 红花油、橄榄油、辛葵酸甘油酯 三者的比例根据具体情况而定。 水用量的取值范围:至全量。 2.4 处方评价标准: 外观性状: 应稠度适宜、细腻均匀、易涂展、易清洗。 离心试验: 取 l0g 样品置离心管中，离心 30min，应无油水分离及水分析出，外观性 状与初始比无明显变化。 耐热试验: 55 ?恒温24 小时应无油水分离，外观性状与初始比无明显变化。 耐寒试验: -20?放置24 小时应无油水分离，外观性状与初始比无明显变化 pH 测定:取3g 样品加入 10ml 新沸放冷蒸馏水，测得值最好接近人体皮肤 5-6 的范 围，最大不超过 8.3[33] 。 2.5 单因素试验筛选油性基质和水的用量 通过预实验及查阅文献确定 6 中乳膏处方，考察油性基质和水的用量试验显示， 当油性基质的用量大时，所需乳化剂用量增加，当乳化剂用量过少，乳剂不耐热， 易油水分离，用量过大，稠度大且耐寒试验质地变粗。经试验确定见表 6，处方 C 为辛葵酸甘油酯用量为 20% ，橄榄油用量为2.5% ，红花油用量为2.5% ，甘油用量为 ―12― 实验方法与结果 8%，所制得的乳膏外观细腻均匀，离心试验、耐热试验、耐寒试验均符合要求，易 在皮肤上涂抹，皮肤亲和性好，易清洗，因此初步选择处方 C 为优选基质组成。 表6 油相和水相用量对乳膏剂的影响(单位:g、总量:100g) 处方 基质 A B C D E F 黄体酮 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 氮酮 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 单硬脂酸甘油酯 1.0 1.0 2.0 2.0 3.0 3.0 泊洛萨姆 407 6.0 7.0 7.0 8.0 6.0 8.0 辛葵酸甘油酯 15.0 18.0 20.0 22.0 25.0 23.0 橄榄油 6.0 4.0 2.5 1.0 0.0 0.0 红花油 6.0 4.0 2.5 1.0 0.0 0.0 二甲基硅油 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 硬脂酸聚烃氧(40 )酯 3.0 5.0 7.0 3.0 5.0 7.0 甘油 6.0 6.0 8.0 8.0 7.0 7.0 5.0 5.0 5.0 5.0 丙二醇 5.0 5.0 尼泊金乙酯 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 天然 VE 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 EDTA-2Na 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 纯水 45.88 43.88 39.88 43.88 42.88 40.88 评价结果: 外观性状 稠度较小 合格 合格 合格 稠度稍大 稠度较大 pH 值 6.52 6.40 6.57 6.62 6.43 6.59 离心试验 油水分离 合格 合格 油水分离 合格 合格 耐热试验 油水分离 合格 合格 基本合格 合格 合格 耐寒试验 质地较稀 质地稍稀 合格 基本合格 质地较粗 质地较粗 2.6 正交试验优选乳化剂 2.6.1 乳化剂的筛选及结果 经过文献资料和预实验结果，确定处方拟选用单硬脂酸甘油酯、泊洛萨姆 407 、 硬脂酸聚烃氧(40 )酯做为乳膏的乳化剂和调节乳剂的稠度，选择黄体酮 和氮酮组 ―13― 新疆医科大学医学硕士学位论文 成的油相的量及甘油、丙二醇、蒸馏水组成的水相的量固定不变 , 以单硬脂酸甘油酯、 4 泊洛萨姆 407 、硬脂酸聚烃氧(40 )酯为考察因素,各取 3 个水平 ,按 L9 3 正交表 设计实验方案 ,见表 7 。 表7 因素水平表 因素 水平 硬脂酸聚烃氧(40)酯 A 单硬脂酸甘油酯(B) 泊洛萨姆407(C) 1 3% 1% 6% 2 5% 2% 7% 3 7% 3% 8% 正交试验安排及试验结果表 表8 试验号 A B C D 细腻性 涂展性 稠度 稳定性 综合分 1 1 1 1 1 5.8 6.0 7.0 7.0 25.8 2 1 2 2 2 7.0 8.0 10.0 7.0 32.0 3 1 3 3 3 5.0 5.0 6.0 5.8 21.8 4 2 1 2 3 8.0 8.5 9.0 8.3 33.8 5 2 2 3 1 6.5 7.5 7.0 7.5 28.5 6 2 3 1 2 7.0 6.0 7.5 5.8 26.3 7 3 1 3 2 8.5 9.0 7.5 10.0 35.0 8 3 2 1 3 9.0 9.0 9.0 9.3 36.3 9 3 3 2 1 9.0 9.0 9.5 10.0 37.5 均值1 26.53 31.53 29.47 30.60 均值2 29.53 32.27 34.43 31.10 均值3 36.27 28.53 28.43 30.63 极差R 9.73 3.73 6.00 0.50 注:稳定性试验是以离心法和耐热、耐寒试验所得的平均值来计算。完全不分层这外观性状无变 化者记 10 分;微微分层者根据分层情况记 5,9 分;油滴析出者记为 0,4 分;完全分层破乳者 记 0 分。 由直观分析表8 可知 , R R R ，影响乳膏性质的因素主次顺序为A (硬脂 A C B 酸聚烃氧 (40 )酯) C (泊洛萨姆407 ) B (单硬脂酸甘油酯)，最优处方为 A B C 。 3 2 2 ―14― 实验方法与结果 每个因素三个水平之间的趋势为 A ,A ,A 、B ,B ,B 、C ,C ,C ，直观分析 3 2 1 2 1 3 2 1 3 结果为 7%硬脂酸聚烃氧(40 )酯、7%泊洛萨姆 407 、2%单硬脂酸甘油酯。 对实验数据进行方差分析，方差分析结果见表 9 。方差分析表明，A 、B 、C 因 素均有统计学意义(P 0.05 )，直观分析与方差分析两种结果结合来确定乳化剂，筛 选 7%硬脂酸聚烃氧(40 )酯、7%泊洛萨姆 407 、2%单硬脂酸甘油酯混合乳化剂为 黄体酮乳膏的优选乳化剂。 表9 方差分析表 变异来源 SS V MS F P A 149.076 2 74.538 317.859 0.05 B 23.476 2 11.738 50.055 0.05 C 61.736 2 30.868 131.633 0.05 误差 0.470 2 0.235 总变异 234.758 8 2.6.2 正交试验结果的验证 根据正交试验结果以 7%硬脂酸聚烃氧(40 )酯做乳化剂，7%泊洛萨姆 407 、2% 单硬脂酸甘油酯调节乳膏稠度，制备 3 批黄体酮乳膏 通过补充试验进行验证, 并进 行稳定性考察.验证内容包括外观、涂展性、细腻性、耐热耐寒试验和 pH 值，结果 如下: 表10 正交试验验证结果(n 3 ) 批号 涂展性 细腻性 稳定性 稠度 综合分 X ?SD RSD (% ) 20080507 9.2 9.6 10 9.0 37.8 20080513 9.2 9.8 10 9.0 38.0 38.1 ?0.36 0.95 20080514 9.5 10 10 9.0 38.5 通过初步稳定性考察和比较 ,结果制备的软膏外观光亮、细腻、稠度适宜、 稳 定性好。说明以 7%硬脂酸聚烃氧(40 )酯、7%泊洛萨姆 407 、2%单硬脂酸甘油酯 的处方量为基础的处方可以作为制备黄体酮乳膏的首选处方。 2.7 单因素考察加药方式。 固定处方组成筛选完后，主要以外观，稳定性为考察指标，用单因素选择加药 方式。 ―15― 新疆医科大学医学硕士学位论文 2.7.1 直接加入到油相溶解后与水相混合 乳膏不细腻，有较多气泡和少量颗粒，离心后上层有较多气泡，耐热试验也有 少量气泡，耐寒试验外观无太大变化，pH 值合格。 2.7.2 油相与水相混合后，加入到成型的基质中 乳膏不细腻，黄体酮不溶有很多小颗粒，离心后外观无变化，耐热试验有油水 分层现象，耐寒试验外观无太大变化，pH 值合格。 2.7.3 首先用植物油完全溶解后，加入油相，再与水相混合 乳膏细腻、均匀、光亮、涂展性、清洗性好，并且离心、耐热、耐寒试验、pH 值测定合格。 结果表明通过采用第一种加药方式，所制备乳膏的外观及稳定性均符合 标准。 2.8 结论 2.8.1 处方组成 最终处方组成确定见表 11。 表11 2%黄体酮乳膏处方组成(100g) 物料 用量(g) 作用 油相 A 黄体酮 2.0 主药 B 氮酮 2.0 透皮 吸收促进剂 C 单硬脂酸甘油酯 2.0 辅助乳化剂，调稠度 D 泊洛萨姆407 7.0 辅 助乳化剂，增溶剂 E 辛葵酸甘油酯 20 稀释剂 增溶剂 F 橄榄油 2.5 调稠度 G 红花油 2.5 调稠度 H 二甲基硅油 2.0 消泡剂 I 天然VE 0.01 抗氧剂 水相 J 硬脂酸聚烃氧(40)酯 7.0 O/W型乳化剂 K 甘油 8.0 保湿剂 L 丙二醇 5.0 透 皮吸收促进剂 M 尼泊金乙酯 0.1 防腐剂 N EDTA-2Na 0.01 辅助 抗氧剂 O 纯水 39.88 溶剂 总重 100 ―16― 实验方法与结果 2.8.2 制备工艺 2.8.2.1 将 A 加入 E 、F 、G 的混合油中，置水浴70?,80?搅拌使溶， 再加入B 、