[宝典]氯霉素滴眼液微生物限度检查法的验证

[宝典]氯霉素滴眼液微生物限度检查法的验证 氯霉素滴眼液微生物限度检查法的验证 目的:验证氯霉素滴眼液的最佳冲洗量。方法:以4种不同冲洗量对氯霉素滴眼液按2005年版药典二部通则中眼用液体制剂的微生物限度检查法规定，按无菌检查法中薄膜过滤法处理后，加入阳性对照菌试验。结果:验证出氯霉素滴眼液最佳冲洗量为500ml.结论:氯霉素滴眼液的最佳冲洗量的验证按本法操作简单易行。 关键词:抗生素药;薄膜过滤法;冲洗量 《中国药典》2005年版规定，眼用液体制剂的微生物限度检查除另有规定，按无菌检查法中薄膜过滤法或直接接种法检查，通过对无菌检查法中薄膜过滤法处理的4种最佳冲洗量的验证，出氯霉素滴眼液的最佳微生物限度检查法，提供简便易行的检验方法 :仪器:HTY—?型智能集菌仪(杭州泰林医疗器械厂)泵苏调至130rpm;一次性使用全封闭集菌培养器(杭州泰林医疗器械厂)，规格:KSF330，孔径:0.45um，专用于抗菌性供试品。试剂:0.1%蛋白胨水溶液，自制:0。9%氯化钠溶液，自制。培养基:脱水硫乙醇酸盐流体培养基(需氧菌、厌氧菌培养基)脱水改良马丁培养基(灵敏度符合《中国药典》规定，中国药品生物制品检定所)菌种:金黄色葡萄球菌,CMCC(B)63501,、生孢梭均,CMCC(B)64941,白色念珠菌,CMCC(B)98001,黑曲霉,CMCC(F)98003,(中国生物制品检定所)供试品:氯霉素滴眼液 方法与结果 2.1对照菌的制备 取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢菌的斜面培养物各1环，分别接种至5ml应羊肉汤培养基中，30—35C培养18—24小时。取生孢梭均培养物至硫乙醇酸盐培养基中，30—35C培养18—24小时。取白色念珠菌培养物至改良马丁培养基中，23—28C培养24——48小时。接种黑曲霉培养基至改良马丁培养基琼脂斜面上，23—28C培养5—7天。加入3—5ml0.9%无菌氯化钠溶液，洗下孢子。上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液分别稀释，制成每ml中约10—100cfu并计数，备用。 薄膜过滤法的方法验证 冲洗剂为0.1%蛋白胨水溶液。按《中国药典》规定取样量的供试品溶液，通过孔径0.45um的已被冲洗剂润试过的一次性全封闭集菌培养器，分别用300,500,1000,1500ml的冲洗量分次振摇冲洗，抽滤至干，最后一次冲洗液中分别加入相应的对照用菌液。再加入刘乙醇酸盐培养基或改良的马丁培养基各100ml，相应温度培养3—5天，逐日观察结果。 2.3氯霉素滴眼液微生物限度检查试验 按《中国药典》规定取样量，按照上述验证过的无菌检验方法进行检查。供试液全量通过集菌培养器，用0.1%蛋白胨水溶液500ml，分3次冲洗完，每次经振摇后抽干，冲洗完毕后，量筒注入硫乙醇酸盐培养基各100ml，其中一筒在最后一次冲洗液中加入金黄色葡萄球菌做阳性对照;另一桶注入改良马丁培养基100ml，同时做0.1%蛋白胨水溶液的隐形对照试验。分别置30—35C培养箱中培养7天，逐日观 察结果。结果阳性对照菌24小时内生长正常，隐形对照及供试液菌澄清无菌生长，检验符合规定 3.讨论 3.1培养基的选择 规格为,,,,,,集菌培养器(孔径:,.,,um) 适于抗菌性供试品培养器，对药品吸附性小，故易于冲洗。而非抗菌性供试品普通培养器如APY330、,,,,,等所需冲洗量药增大一倍，一破坏滤膜的完整性，故建议适应于抗菌性供试品专用培养器，从而减少所需冲洗量 ,(,冲洗液的选择 《中国药典》,,,,年版中,.,,氯化钠作为冲洗液，其检出率低。按《中国药典》,,,,年版规定为了保护供试品可能存在的微生物而使用了,.,,蛋白胨水溶液，本人通过进一步的实验使用,,,.,的氯化钠蛋白胨缓冲液替代,.,,的蛋白胨水溶液，通过验证结果无差异，故建议,.,,蛋白胨水溶液或氯化钠蛋白胨缓冲液作为冲洗液 ,.,冲洗量的选择 对于抑菌性强的药物，应加大冲洗量或加大培养基用量，使其抑菌作用消除。一般而言，冲洗量如果小于,,,ml存在抑菌效应，结果易造成假阳性，但冲洗量如果大于1500ml，实验中已造成过量冲洗，考虑冲洗液的体积大小(即冲洗量)对细菌易有杀伤力，且难以比卖弄滤膜的不完整性和造成浪费，故冲洗量宜选择300—1500ml，通过 本验证实验，氯霉素滴耳液的冲洗量选择500ml 3.4集菌仪泵速的选择 具有抗菌活性的液体制剂，冲洗供试品流苏不宜过快。过滤抗生素供试品如果转速太快，对细菌有损伤作用，易造成实验结果假阴性，每次冲洗都应关泵，防治空气泵入，减少假阳性的出现，建议抗生素用品冲洗时泵速可设为130rpm，其他药品为缩短时间可选择160rpm 3.5滤膜浸泡时间的选择 水溶性供试品过滤前先将少量冲洗液过滤一侵润集菌器中的滤膜。建议滤膜浸泡10分钟为宜，有利于抗生素的过滤洗脱。 3.6方法选择 薄膜过滤法有封闭式过滤器和开放式过滤器。在开放式薄膜过滤器，冲洗量较大，会影响滤膜的孔径，使滤膜受损，影响结果准确性，建议采用封闭式过滤器，可减少操作环节污染，避免实验结果的假阳性。 3.7建议