正交试验法优选枣仁安神胶囊提取工艺

正交试验法优选枣仁安神胶囊提取 [摘要] 目的:优选枣仁安神胶囊提取的最佳工艺条件。方法:以浸膏中酸枣仁皂苷A 和B的含量为指标，用高效液相色谱测定，采用L9(34)正交试验优选提取工艺。结果:最 佳工艺条件为8倍量水，煎煮3次，每次1.5 h。结论:优选的枣仁安神胶囊提取工艺稳定、 可行，提取率高。 [关键词] 正交试验 枣仁安神胶囊 酸枣仁皂苷A 酸枣仁皂苷B [中图分类号] R284.2[文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2011)02(b)-047-02 Study on optimizing the decocting extraction for Zaoren Anshen Capsules by orthogonal design method YU Qi (Department of Pharmacy, the Central Hospital of Loudi City, Hu'nan Province, Loudi 417000, China) [Abstract] Objective: To study on optimizing decocting extraction for Zaoren Anshen Capsules by orthogonal design method. Methods: Optimized the decocting extraction with L9(34) orthogonal test, the yields of extracts, the content of the Jujubaside A and Jujubaside B were used as evaluating criteria. They was determined by HPLC. Results: The optimal condition was 8 folds amount of water, 3 times, 1.5 hours each time. Conclusion: The optimized extractive technology is stable and efficient with high yields. [Key words] Orthogonal test; Zaoren Anshen Capsules; Jujubaside A; Jujubaside B 酸枣仁胶囊是由酸枣仁、丹参、五味子(醋炙)组成，具有养心安神、镇静催眠之功效， 用于失眠、头昏、健忘等的治疗。酸枣仁为方中君药，其中酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B为 酸枣仁镇静催眠的主要成分[1]。笔者参照文献[2-7]，以出膏率、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂 苷B为指标，采用正交试验法对酸枣仁等药材的煎煮工艺进行优选，以期获得最佳工艺条件。 1 仪器与试药 岛津LC-10A高效液相色谱仪和Alltech 2000蒸发光散射检测器;甲醇为色谱纯，其他 试剂均为分析纯;酸枣仁皂苷A和B对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110734-200509、 110814-200607，供含量测定用)。 2 方法与结果 2.1 水煎煮组正交试验 采用正交试验法对酸枣仁、丹参和五味子水提工艺进行优选。以提取次数(A)、提取时 间(B)、加水量(C)为试验因素，各3个水平，以出膏率和酸枣仁皂苷A和B含量作为考察 指标进行试验。因素水平见表1。 表 1 提取因素水平表 Tab.1 Factors and levels tablet of extraction 2.2 出膏率的计算 分别按处方量称取药材适量，用水浸泡0.5 h，大火煮沸后，分别按照正交试验表中的时间以文火煎煮，过滤，合并水煎液，浓缩，置干燥恒重的蒸发皿中，并置于50?干燥箱内至完全干燥，取出，置于干燥器内放冷并称重，计算出膏率。 2.3浸膏中酸枣仁皂苷A和B含量测定 2.3.1 色谱条件Agilent zorbax C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱;柱温:25?;流动相:甲醇-水-冰醋酸(70?28?2)，流速:1.0 ml/min，飘移管温度:105?，气体流速:1.2 L/min，进样量:10 μl。 2.3.2 对照品溶液制备分别精密称取酸枣仁皂苷A和B对照品适量，加甲醇溶液分别配制成浓度为2.10 mg/ml的酸枣仁皂苷A溶液和浓度为2.24 mg/ml的酸枣仁皂苷B溶液，作为对照品溶液。 2.3.3 供试品溶液制备取本品内容物5 g，精密称定，加甲醇回流提取2次，每次加甲醇25 ml，回流1 h，滤过，合并滤液，蒸干，残渣加水30 ml溶剂，转入分液漏斗中，加水饱和的正丁醇溶液振摇提取3次，每次30 ml，合并正丁醇溶液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次50 ml，分取正丁醇溶液，蒸干，残渣加甲醇溶液使溶解，转入10 ml量瓶中，加甲醇溶液至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得。 2.3.4 线性关系考察精密吸取酸枣仁皂苷A和B对照品溶液(酸枣仁皂苷A浓度为6.14 mg/ml、酸枣仁皂苷B浓度为6.56 mg/ml)0.3、0.5、1.0、2.0、3.0 ml，分别置5 ml量瓶中，加甲醇溶液稀释至刻度，按上述色谱条件进行分析，测定其色谱峰面积，以色谱峰面积A为纵坐标，含量C(μg/ml)为横坐标绘制曲线，计算得回归方程为酸枣仁皂苷A:Y=21 851.2X-415.2(r=0.999 7)，酸枣仁皂苷B:Y=19 251.2X-145.2(r=0.999 8)，结果表明酸枣仁皂苷A浓度在0.368,3.680 mg/ml、酸枣仁皂苷B在0.394,3.936 mg/ml范围内呈良好的线性关系。 2.3.5 含量测定分别精密吸取对照品、供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，按“2.3.1”项下色谱条件测定，计算含量。 2.4 水煎煮组最佳工艺确定 对正交试验结果进行极差和方差分析，结果见表2、3。 表 2L9(34)正交试验结果 Tab.2 Result ofL9(34) orthogonal test 综合评分=(出膏率/最大出膏率)×100×0.2+(酸枣仁皂苷A含量/酸枣仁皂苷A最高含量)×100×0.4+(酸枣仁皂苷B含量/酸枣仁皂苷B最高含量)×100×0.4。 表 3正交试验方差分析 Tab.3 Variance analysis of orthogonal test F0.05(2，2)=19.0 由表2可知，3个因素的极差大小顺序为A,B,C，提取次数对提取工艺的影响最大，其次为提取时间，加水量影响最小。 由表3可知，因素A对本方的提取有显著性影响，因素B、C无显著性影响，故确定最佳提取工艺为A3B1C1，即用8倍量水，提取3次，每次1.5 h。 2.5 验证实验 按优选的最佳工艺提取3批样品，进行验证实验，得3批样品出膏率分别为24.14%、23.09%、24.47%，酸枣仁皂苷A含量分别为241.56、244.15、234.12 μg/g，酸枣仁皂苷B含量分别为210.45、214.58、208.66 μg/g，验证结果表明工艺基本稳定可行。 3 讨论 酸枣仁为方中君药，其中酸枣仁皂苷A、B为酸枣仁镇静催眠的主要成分，且易溶于水。水煎煮法能提取出较多的成分，且符合中医传统用药习惯，溶剂价廉、易得，结合实际生产中能耗、成本、安全性等因素考虑，确定水为提取溶剂。 正交试验结果所得的最佳工艺条件为A3B1C3，但其生产成本较高、生产周期较长，不符合生产实际，所以此工艺缺乏合理性。故选取了较符合生产实际的A3B1C1组合，并进行了工艺验证实验。结果表明，A3B1C1组合的浸膏得率和酸枣仁皂苷A、B提取率较高、稳定性较好，故选择A3B1C1，在提高提取率、保证疗效的同时达到了节约成本、缩短生产周期、经济效益的目的。 [参考文献] [1]王浴生,邓文龙.中药药理与应用 [M].2版.北京:人民卫生出版社,2000:1208. [2]王瑞,毕开顺.正交试验法优选解毒宣透汤提取工艺[J].沈阳药科大学学报,2002,19(4):284-286( [3]马玲云,吴朝阳.RP-HPLC-ELSD法同时测定中药及保健食品中酸枣仁皂苷A和B含量的方法验证[J].临床合理用药,2010,7(3):37-38( [4]张淑玲,沙玫,陆军,等.正交试验法优选和丹舒胶囊提取工艺[J].广东药学院学报,2010,26(1):41-44( [5]姚椹婷,张丽,李媛,等.正交试验优选复方JTL胶囊的煎煮提取工艺[J].中国实用医药,2010,5(4):23-24( [6]王烈群,张欣.蒙药荜茇三味胶囊提取工艺的研究[J].中国民族医药杂志,2010,2(2):37-39( [7]詹冬华,郑捷,熊志玲,等.咳特灵颗粒提取工艺研究[J].中南药学,2005,3(4):224-226( (收稿日期:2010-11-12) “本文中所涉及到的图表、公式、注解等请以PDF阅读”