最新日本食品微生物检测方法

最新日本食品微生物检测 调制样液 25g样品+225ml灭菌生理盐水,均质混匀 ? 样液接种 10、100倍稀释液分别向两个空培皿中注入1ml ? 混 释 分别向两平皿中注入12-15 ml平板计数琼脂，混释后，将培养基表 面干燥 ? 培 养 将培皿反倒过来，35?1?培养48hr ? 计 数 ?判定 ? 特别是稀释度低的平皿，微生物的菌落和食品的碎渣很难区分，一般以食品 产生的碎渣没光泽，不够光滑等来识别。 ? 产生30-300个菌落，每个稀释度的培养皿中的全部菌落数用以计数，取两 个的平均值来表示 ? 以最低稀释度，菌落发育不到30个以上的时候也同样要将菌落数计算出来， 取其平均值作为结果 ? 以最高稀释度，菌落数可以数到300个以上的时候将平皿划分成1/2～1/8 （等份），数出其中1个格子里的菌落数再乘以倍数（即分数）就可以算出 来。 ? 推定检验操作顺序 调制样液 25g样品+225ml灭菌生理盐水,均质混匀 ? 样液接种 100倍稀释液分别向两个空培皿中注入1ml ? 混 释 分别向两平皿中注入去氧胆酸盐琼脂，混释后，将培养基表面干燥， 重层 ? 培 养 将培皿反倒过来，35?1?培养48hr ? 推定断定 发育出直径0.5mm以上的亮红色菌落的时候，推定为阳性。 熟练的话，到该步即可作出判断，必要时进行以下确认 ?确认检验步骤 菌线涂抹 用接种针挑取可疑地菌落，在EMB培养基上画线涂抹 ? 培 养 35?1?培养24小时 ? 菌移植 EMB培养基上的定型菌落的一半接种于乳糖肉汤，剩余一半涂抹在 平板计数琼脂上 ? 培 养 35?1?培养48小时 ? 革兰氏鉴别菌行芽孢判定 在乳糖肉汤中产气的菌株是用平板计数琼脂的菌 ? 确认判定 在EMB培养基上呈金属光泽暗紫红色的菌落作为定型菌落，在乳糖 肉汤中产气且革兰氏染色呈阴性就判为阳性 ?推定检验操作顺序 调制样液 25g样品+225ml灭菌生理盐水,均质混匀 ? 样液接种 取10ml的10倍稀释液接种于盛10mlBGLB中，分别接种3只管 ? 培 养 35?1?培养48小时 ? 断 定 浑浊产气则判为阳性 确认检验步骤同?中? 推定检验操作顺序 调制样液 25g样品+225ml灭菌生理盐水,均质混匀 ? 样液接种 取1ml的10倍稀释液接种于盛EC管中，分别接种5只管 ? 培 养 44.5?0.2?培养24小时 ? 断 定 浑浊产气则判为阳性 确认检验步骤同大肠菌群的确认 样液调制 25g样品+225ml灭菌生理盐水,均质混匀 ? 样液接种 取10倍稀释液0.1ml接种于干燥的MS培养基上 ? 平板涂抹 用L型玻璃棒涂抹 ? 培 养 43?1?培养24小时（公定方法35?1?培养48小时） ? 推定判定 定型菌落，金黄色葡萄球菌在MS板上显示出卵黄反应：首先将培 养皿倒过来寻找产生浑浊带的菌落，其次拿掉培养皿的盖子，从培 养皿的表面将平板向着阳光倾斜看到菌落的时候，它的周围确认有 象月晕一样的圆形油膜的时后就判定是阳性。或者没有圆形的油膜 的时候、只要菌落的周围有白色的浑浊带也判定为阳性。 熟练的话，到该步即可作出判断，必要时进行以下确认 ? 确定检查步骤 菌移植 将卵黄琼脂平板上的定性菌落接种于牛心浸汤 ? 前培养 35?1?培养18-24小时 ? 菌移植 实验兔血浆（干燥）按通常的方法溶解、每个小试管中分别注入0.5ml ? 静 置 35?1?、4小时静置 ? 推定判断 血浆的凝固或着进行纤维蛋白的析出 血浆的凝固（将试管倒置看）或着进行纤维蛋白的析出，每隔30分钟的观察进行4小时，没有观到凝固的时候、就要在第6、24小时的时候观察，凝固酶实 验的结果，如果血浆的凝固或纤维蛋白析出就判定实验呈阳性。MS培养基平板上显示出卵黄反应的典型菌落，大多数的时候凝固酶实验也呈阳性。