脆性X综合征的筛查、诊断和社会适应能力及Fmr1基因敲除小鼠的神经机制研究

脆性X综合征的筛查、诊断和社会适应能力及Fmr1基因敲除小鼠的神经机制研究 脆性综合征的筛查、诊断和社会适应能力 及基因敲除小鼠的神经机制研究 ? 论文作者签名: 哆锄参 指导教师签名:避 论文评阅人 评阅人 评阅人 评阅人 评阅人 南京医科大学 答辩委员会主席:陈荣华教授 南京医科大学附属南京儿童医院 委员:黄松明教授 浙江大学医学院附属儿童医院 委员:舒强教授 委员:尚世强主任医师浙江大学医学院附属儿童医院 委员:堕查墼咝 塑里查堂匡堂堕堕星堕堕堕 委员: 年月 答辩日期:蕊 越籀;: 豁两 。:坤。 矗钕:书 疆 雾滚 点 ×:.巍 , ‰ 矛 赫祭簿粼 ‘:~.二???毕。.。?, ? , :至坠兰坠型坠 :三如盟坚粤生’ : ? 帆: 。岬吨峨越吨删咖、唧叫柚吨删衄面岍时 :啦曜 ?删?州口&酬醅 目 :删呲岫哑“酬咄?:?“ ? :: 坚型罩蓄霉雨再?三。矗珏三;; 瑚剩叫..?二‖浙江大学研究生学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发 或撰写过的研究成果,也不包吉为获得逝’江盘芏或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在碱文中作 了明确的并表示谢意。 学位论文作者签名 签字期:。/年月 日 伽书 学位论文版权使用授权书 有权保留并向国家有关部门或机构 本学位论文作者完全了解 逝.江盘堂 送变奉论文的复印件和磁盘.允许论文被查阅和借阅。本人授权逝望盘堂可三 将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播.可以采用影印、 缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 保密的学位论文在解密后适用本授权书 学位论文作者张哆锄扫 副一签舻?多移专年月? 箍字同期:年月 签字期; 蔓 ,‘; : 『. 般一 辍 徽 ?‘荒 鬻 辫一 固 壤 袭 :篙 二。叫蝴节也 醅峨每辫‘ 滋辫喜 躲黼~: ’’ 登浙讧大学博:学位论业 致谢 在职攻读博士学位终于即将毕业,值此论文完成之蕲,谨向所有指导,帮助、 关心和支持过我的老师.同学.同事及家人表示深切的谢意 首先衷心感谢恩师赵正言教授.从博士论文的选题,实验的,到实验对 象的募集和论文的撰写,导师都给予我悉心的指导和不断的鼓励.导师孜孜不倦 的科研精神,严谨求实、一丝不苟的治学态度,和蔼可亲的为人品格漾深影响着 我,将成为我今后为人,治学.从医的楷模. 本文的分子生物学研究得到了中心实验室吴鼎文老师的大力帮助和支持,在 此致以崇高的敬意和深深的感谢.同时.感谢病理科顾伟忠老师和实验室吴亦株 老师在动物实验操作中给予的帮助。 感谢儿童保健科邵洁主任.从研究对象的募集到研究的具体实施过程中.都 给予了无私的帮助和支持. 感谢在学习和工作上给予我许多支持和关怀的师兄师妹们:感谢师蛆解喜红. 痔谢师兄郜朝春,李中跃。感谢秦玉蜂,庸建英,季钗、李明燕,朱丽,棘琴、 徐佳露.王艳霞等师妹.是你们的关心和鼓励给了戎一路前行的力量和勇气. 感谢儿保科所有同事在攻读博士学位期间给予我的大力支持和鼓励. 感谢科教科朱红老师在研究生培养环节上的积极引导. 感谢浙江大学实验动物中心的各位老师在实验动物的饲养和标本处理过程 中 给予的帮助和支持. 感谢淅江省各地特殊学校、计生办.福利院的老师和工作人员以及孩子们的 支持和帮助.感谢脆性综合征儿童及其索长的信任和支持. 感谢我的先生孙琮和女儿孙好竹,谢谢他们在生活中给予我的理解和支持. 感谢我的父母亲和公公婆婆的支持和鼓励. 竺智伟 年月于杭州新江大学博学位论文 中女捕蔓 脆性综合征的筛查、诊断和社会适应能力 及基因敲除小鼠的神经机制研究 浙江大学医学部 儿科学儿童保健 博士研究生 竺智伟 导 师 赵正言教授 中文摘要 脆性综合征 ,是一种常见的遗 传性精神发育迟滞性疾病,其发病率高达/.绝大多数的是由于染色 体窖 ?基因重复序列过度扩展导致基因 甲基化而引起的.男性患者临床表现较女性患者严重,主要表现为中,重度的 精 神发育迟滞,伴特殊面容,如长胜、大或招风耳,青春期以后出现大睾丸,许多 患者还表现为多动,冲动、焦虑,社交退缩、刻板语言等孤独症样行为.早期发 现、早期治疗和干预.可班显著改善患几预后,并为家系成员提供遗传咨询,避 免家族中再次出现同样患者,具有不可估量的社会效益和经济效益. 本研究应用双重实时荧光定量技术,印普通宴时荧光定量联合甲基 化敏感性限制性内切肆定量. . ,技术,进行患者脚,基序列和 岛甲基化程度的定量撞剥,结果发现,该技术对男性患者的诊断效率极高, 既可以诊断全宪变男性,也可以辨别男性全突变,前突变嵌合体,与 相当:对女性全突变患者的甲基化分辨牢也较高,可以作出诊断,但对于女性垒 突变和全突变,前突变嵌合体的分辨率欠佳.该技术自动化程度高,重复性好,夹 速经济.需要量少,可以进行高适量的大样本检测,因此.我们建议可以将 其推广用于脆性缘合征尤其是男性患者的分子生物学诊断和人群缔查. 堑垩查坚丝堡兰 ?兰塑堑 目前,关于我国脆性综台征儿童临床特征和社会适应能力的研究尚属空白. 本研充通过临床检查表和社会适应能力量表对男童进行评估,结果发现,六 项简易临床检查表兰分的切值是适合我国男童的早期筛查,该切值既可以早 期发现可能患的男童,对其进行分子生物学诊断,提高 的栓出率,又 可以使 %的可疑患儿避免进行脆性综合征的宴验室诊断,大大减少诊断 成本,而不会精诊任何患儿.对确诊儿童的评估发现,中国男童的注意酞陷, 多动障碍 的发生宰明显高于其他国家的报道,可能与我们的患儿未积极进 行药物治疗有关.同时,研究还发现, 我国脆性综合征男童的社会适应能力较差,明显落后于同年龄的正常儿童. 与 问智龄正常儿童和同智龄同年龄的唐氏综台征 ,儿童相仿, 但是,各个维度发展不均衡,作业操作,参加集体堰动和自我管理能力甚至落 后 于儿童.固此,要改善我国儿童的临床症状和生活质量.需要加强早期 诊断和积极治疗.以及针对患儿临床特征的特殊训练和教育. 脆性综台征动物模型的应用.为神经病理学机制的研究提供条件,进而 促进了针对神经机制的靶向药物治疗的发展.本研究通过实时荧光定量和 免疫组化, 实验方法,对基固敲除,小鼠三个 主要脑区大脑皮层,海马和小腊突触后致密物蛋白 ,一及其蛋白质时空表达的改变进行探索.结果发现,在这三个 主要脑区中,及其蛋白质的表达在生后第天最低,天明 小鼠 显上升,在青春期或成年期达到高峰.与野生型对照组小鼠相比, 不蕾在生长发育期、,.还是成年期海马部位 与蛋白质的表达水平均显著降低.园此,我们认为在海马部位的表达受 的调节,海马区的受损与脆性综畚程患者海马依赖的学习功能雕 碍有关.该结果为进一步针对逢径的靶向治疗研究提供了依据. 关键词:脆性综合征:怖查:诊断;宴时荧光定量;临床检查表;社会适 应能力;基因蚊除;.新江学博十学位论 英文摘竖 , : .::. , 舒 , . , . . . ,, ‘ .’, ? ?, ?,, 【淅口丘学博‘擘位论女 其空摘嚣, / , . , 蚰? ??. % . 曲 , . .. . 百一. 英盘摘? 新辽大学博十学位论 , ?一. ? “ , , ,,一,? : ;;; ; ; ;爿 ,:; 缩略语 浙江学弭:学位诧女 缩略语 脆性综合征 精神发育迟滞 。 ? 连锁的精神发育迟滞 ? 脆性精神发育迟滞脆性精神发育迟滞蛋白 艨发性卵巢功能不垒 脆性相关的震颤/共济失调综台征非翻译医 垒突变前 突变 印迹 聚合酶链反应 孤独症谱系障碍 注意缺陷多动障碍 执行功能 』.羟色胺再摄取抑制剂基因敲除 野生型代谢型咎氨酸受体 缩略 女江大学博学位论文 长时程抑制 ? 智商 发育商母系家族女性精神疾病史 ?母系家族连锁的精神 发育迟滞 “ 儿童孤独症行为量表韦氏儿童智力量表 皮勃迪图片词汇璎试 . 精神障碍性疾病的诊断和统计手册一第四版 伽 曲线下面积 兰卵巢早衰美国智能不足协会 删 独立生活能力 姐 。 运动能力 作业交往 。 鲥 参加集体活动 自我管理 ? ; 儿童孤挂症评定量表 皿 一 帅 .甲基.天门冬氢酸?浙江大学博岸址地盘 %略 突触后致密物蛋白突触后致密物 膜结合鸟苷酸教酶阐循环 蛋白质印违 光密度 逆转录 甲基化敏感性限制性 内切酶定量. 目 次 .. .............. 致谢.. 中文摘要................ ... ? 英文摘要...............?... ? 缩略语,.,.....,..........?.. 目次 第一章引言.................... . 的历史演变..... 的流行病学研究.. .. 的遗传学研究..... . 的分子遗传学机制? .的遗传特征........ .. 的诊断方法......... . 的神经机制研究....... 的表型研究...........认知功能表型.......,.. .行为表型....?..... . . 其他表型..... 曲相关治疗和干预研究... ..... . 针对症状的治疗 . 针对神经生物学机制的涪疗 , .行为干预.........参考文献.................... 第二章藏重实时荧光定量诊断脆性综合征及家系研究 . ........................... 材科与对象 .............. ...?... 主要仪器 . 主要试剂............................. ....... .对象...................... .... . ......... .研究方法............ . ...... ..血液基因组的抽提. . .......... ..常规.......... . 基因组的印迹杂交............ .双重实时荧光定量方法.................. ..?. .结果.......?....?...............?. ............ . .常规结果... . .. .?. 同位素印迹杂交分析结果. . 双重荧光定量结果.,..................... . ......,,..,....,.... . .讨论...., 小结. ... ................... ... ............................ 巧拍拍”嚣如强弛弛驺帕拍钉 .参考文献.. 第三章脆性综台征临床特征的饰查意义和社会适应能力研究 脆性综合征临床特征的饰壹意义.............?... .研究对象和方法........................ ..结果....................................... . 讨论..?....?......?....??.. .脆性综畚征儿童社会遗应能力研究.................. .研究对象和方法......................... . ....?. .研究结果....... ,讨论........................................ .... . .小结...,..............,,.. 如。:鸵?以?:阳乃 参考文献....................................他 第四章基因献除小鼠脑组织时空袁达的研究. .实验材料和方法..... . .. . . . 实验材料.......... ........ ..... 上研究方法................. .研完结果.............................. . 鲫舳虬蛇铊 小鼠脑中一时空表达的改变 . 舛 小鼠脑中一蛋白质时空表达的改变 ........................ .. 叭 .讨论.... .小结, ........................................ ? 舛 .参考文献.......................... 们 综述??..?...?....?.? 拍 作者简历及在学期间所取得的科研成果.?....浙?凡学博‘学位论空 第一 乖引 脆性综合征的筛查、诊断和社会适应能力 及基因敲除小鼠的神经机制研究 浙江大学医学部 儿科学儿童保健 博士研究生 竺智伟 导 师 赵正言教授 第一章引言 脆性综合征 .简称是遗传性智 力障碍中最常见的原固,在先天性智障成四中仅次于唐氏综合征.患者除 表现为精神发育迟滞,以外.还伴有多动,冲动,注意缺 陷等行为问题和不同程度的特殊面容.如长胜、大耳等. . 的历史演变 年,和报道了一个大家系,该家系有个精神发育迟滞的男 性和几十轻度异常的女性‘”.由于男性症状较女性严重.他们认为这是一种 连 锁的遗传性疾病.后人将其命名为“综奢征”【”.年,发现 一个家族中四位男性和三位女性携带者的染色体长臂耒嫱具有不寻常的随 体样结构”.他称其为标记染色体 .随后将近十年的时 问里,该现象一直是个谜.直到年,用缺乏叶酸的培养基培养细 胞,发现能重复出现该标记染色体?.因为该标记染色体中期.部位的次 缢痕使得染色体远端看起来几乎不能与染色体其余部分相连,所以称该病的 染 色体是“脆性的.易折断的”.从此以后.脆性综合征被用来描述这种浙?学 博士学位论立 第一常引言 类型的连锁的精神发育迟滞? ,。该脆性位点 被命名为,表示是第一个被发现的染色俸上的脆性位点。直到年 .,简称基因被克隆之 脆性精神发育迟滞 前.人们一直通过细胞遗传学方法检测该脆性位点来诊断.后来. 等人重斯分析了和早年报道的家族系谱,证实其脆性位点就位于 部位口.因此,“综合征”逐渐被“脆性综台征”所取代. . 的流行病学研究 最初对脆性综台征发病率的估计是基于将.脆性位点作为该病曲细胞 标志,当时认为男性人群中的发病率为/到/‘”.自从年 基因被发现并应用分子技术诊断以后,男性的发病率被修正为/阍.从 此以后,有关脆性综合征发病率的报道逐渐增加.的发病率固种族不同而 不同,欧洲裔美国男性的发病率为/到/,而非洲裔美国男性的发病 率为/?.英格兰一项最大的研究在接受特殊教育的位男孩中发现 例,据此推测其普通人群的发病率为/?.亚洲人群的发病率也因 地域不同而不同,中国大陆精神发育迟滞人群的发病率替近美国高加索人 群”. 而台湾的一项大样本的新生男耍的筛查报道,普通人群的发病率较低,约为 /“. 原来脆性综台征的发病串大多是从特殊人群发病率阿接推测到普通人群, 近几年来,随着高通量筛查技术的发展,许多研究者尝试进行大量普通人群 的血片缔壹.其中两项在西班牙的研究分别筛壹了和份血片,结果发 现,普通男性人群中的发病辜分别为/和,高干原来的推测: 而等人对美国例男性新生儿筛查血片的研究发现,美国白人.非洲 裔及西班牙裔的发病率分别为/./及/”,接近原来的『可接推测.浙江大学博: 掌也论女 蒋一章亩 但是,由于前两项研究的样奉量相对较小,等人经过样奉量矫正后舟析认 为,这三项研究的发病率之间殳有显著差异. . 的遗传学研究 .. 的分子遣传学机制 年,等人用定位克隆技术在囊皂体 位点发现脆性 综合征的基因,从雨揭示了的分子机制. 基因长 ,包含个外显于,一般情况下,垒长. 的 编码的蛋白质垒长个氨基酸,分子量 ,当然,不同的剪接方式会产生 不同的转录子?.在第一外显子的端非翻译区 ..内有 三核苷酸重复区,翻译启动于重复区下游 处.而重复区上游 处有一岛。正常人的重复数为,最常见的是次.重复数? 称为“灰色区域”.夼于正常和前突变之间.没有临床表现:当重复数扩展 到.时,称为“前突变”,女性可能表现为卵巢早衰,部分前突变携带 者?岁会逐渐出现意向性震颠,步态共济失调和轻微的帕金森综台征表现,即 ,川:当 脆性震颤,共济失调综合征 重复数超过时,称为全突变.全突变者的重复序列.岛和附 近的基固序列都发生进度甲基化。导致基目静致,不能转录.翻译产生其编码 蛋 自质 见固.. 几乎所有的脆性综合征都是由于上述重复区的过度扩展所导爰的.只 有极少散的病例是由基因的点突变或完全缺失所引起【珏捌.因此, 基因编码蛋白质的缺失是表型的基础.第一章引言 ?《 一 ?? 一. 静 ?夸 ????‘孙?喇计.日日州 的?喝柚?吲啊?岫?吐?矸 目呷? ? 图正常个体、前突变个体以及垒突变个体基因转录和翻译的示意图旧】 表达水 前突变患者的分子发病机制不同于患者的全突变; 平在前突变患者增强.而垒突变患者刑下降或缺失。而水平在全突变患者 减少或缺失,而在前突变患者则正常或接近正常. .. 的遗传特征 脆性综合征符合连锁的遗传法则:女性有条染色体,男性有条 和每染色体.基因位于染色体.所有基因垒突变的女性每次 生育都有%的风险将全突变的染色体传递给胎几.其儿子往往会继承全突变 而患病,而女儿刚不一定会患病.但是,也有极少数的情况.印全突变女性的 子 代发生逆转重复数减少或前突变.全究变或嵌台体的男性,不会将其传 递给儿子,而是将前突变传递给女儿.全突变男性的精子仅携带前突变的 基因四,固此,极少有报道称全突变或嵌台体男性生出全突变女儿咖. 对于基因前突变重复数的下限存在不同意见,有人认为是,也 有人认为是,但太多数的人群罐查研究均等其定为.根据脆性综合征的特 殊遗侍方式.美国医学遗传学隶杵重复敏归粪为正常等位基因.第一章宣 淅江上学阱学他论空 重复数介于.之间者为前突变.重复数则为仝突变。而重复数介 干 之问则被认为是不确定的或“灰色区域”等位基“. 重复数的正常基因比较稳定.可以代代相传而不发生扩展. .的“灰色区域”等位基因不太稳定,容易在传代过程中发生扩展,出现前突 变的子代.但不会扩展为全突变.而前突变的基因则很不稳定,在侍代过 程中容易发生扩展,使得重复数增加四,出现全突变的子代,偶尔也会缩短, 甚至成为正常?.重复序列发生扩展的概率与传递者的性别有关.女性前突 变携带者在传代过程中比较容易发生扩展,出现全突变的于代,其儿子和女 儿都 有患病的风险。前突变男性在传代过程中则不会发生扩展,其所有女儿都是 前突 变携带者,而所有的儿子均正常. .. 的诊断方法 脆性综合征最早是通过细胞遗传学方法诊断的,即用缺乏叶酸的培养基培 养细胞后,在.部位出现叶酸敏感的脆性位点.但是,该技术的假阳性和假 阴性率均较高,并且对携带者的检测价值也非常有限.自从年基圄被 成功克隆以后.细胞遗传学方法就不再作为的诊断方法.而直接检剥 基因或其编码蛋白的分子遗传学方法成为的诊断方法.这些方 法也可以用于羊水细胞和缄膜绒毛取样进行产前诊断. 分子遗传学方法包括和 检测基因以及抗体结 合反应检测. 被认为是诊断脆性综告征的金.该方浩既能区分 基固的前突变和垒突爱,也能明确其甲基化状态.年。等从外周血 提取基因组,用限制性内切辞和甲基化敏感的酶双 辟切,然后与同位素标记的探针.进行杂交.分析杂交后片段的 太小,可以了解的重复数和岛甲基化状态”.正常基因通 双酶切后,用 的杂交带: 过 探针杂交,男性仅有一条 渐学博上学&论立 旃一章?青 女性由于一条染色体随机失活而使舢,基因甲基化,甲基化基因不能鼓酶 消化,故出现 两条杂交带.基因前突变携带者经上进方法 杂交后,男性仅有一条大干 的杂交带:女性则出现一条大于.和一条 的杂交带.而垒突变男性患者仅有一条大于.的杂变带;女性则出现三条杂交 带:一条正常有活性的杂交带.,一条甲基化无活性的杂交带.,以 及一杀基因异常扩展伴过度甲基化的杂交带大于,. 年等应用地高辛标记的探针进行 诊断脆性综台征, 从而避免了同位素的污杂”】. 也有不足之处,太费时、费钱和费力,需要较多量的;而 且不能明确具体的重复数,速对于前突变和重复数介于?之间的灰色区 域的等位基因尤其重要。 , 聚合群链反应 常规的方法是在基因重复序列的两端设计引物.正常 基因和重复数小于的前宪变,可以用法扩增出阳性条带.而且可以 明确具体的重复数.而重复数超过的前突变和垒突变患者,由于 重复区含量很高.扩增比较田难,目此常规的洁就不能扩增出 阳性条带.方法比较快速,所需量较少。可以用于大量人群的筛壹.但 是,女性患者和嵌合体男性,如果用常规浩很容易误诊为正常.目前,各种 改良的方法正在探索之中. 抗体检测 通过抗体结合反应可毗检剥琳巴细胞中存在与否.垒突变的脆性男 性不产生,而正常或前突变携带者的淋巴细胞胞浆中可以检测到州. 后来,作者将该方法进行了改进,通过患者的发根检剥抗体闻,既避免抽 血的痛苦,标本又便于运输.抗体检剥方珐可以用于男性患者的诊新:但是女性 惠者的另一条正常絷色体仍然可以产生,因此不能通过抗体检测来诊断 女性全突变患者:另外,抗体检剥不能区分正常和前突变等位基因.因此,抗体 检利应用较步,仅限于男性患者的人群筛查。 浙?人学博学位碚立 . 的神经机制研究 基因突变后不能转录翻译产生编码蛋白质,从而导致脆性综 台征.基因献除,动物模型小鼠或果蝇也没有的 表达,并呈现许多与人类患者相似的表型特征,因此, 动物模型成 为研究脆性综合征神经解剖学,神经生物学机制及其治疗方法的重要工具。 患者’和动物模型‘”神经解剖学政变主要表现为树突棘形态的 异常。脆性基因的突变导致成年期皮层神经元棘密度增加,并出现更多非成熟 形态的棘:大头蘑菇型的棘减少,而细长型伴过多伪足的棘增加.无论是生长发 育期还是成年期海马神经元。都存在棘形态的异常‘。 一系列研究发现,与许多包括自身结台并调节其在 树突和棘的翻译,尤其是受组代谢型谷氨酸受体,毒簟碱乙酰胆碱受体?啪其 他突触四聚体连接受体如多巴 胺受体教活后的翻译。在动物模型中,许多受调控的蛋白 区组 亚型的教活可以诱发长时 质的表达上调?.在海 程抑制 .,即表现为突触反应减弱.而激活诱发 的过程需要预先存在于突触后树突的的快速翻译?. 小鼠海 马的匕野生型.对照组增强【”。由此,提出了脆性综 台征的理论,该理论认为,的神经和精神症状是由于组或 亚型过度教活所致脚.另外,最近有研究发现,除了抑制突触部位 的转录和翻译以外,还可能对某些如.起稳定作用. 虽然关于神经机制的研究非常多,但是的缺失导薮患者诸多 临床表现的具体机制尚未明确. . 的表型研究 脆性综合征主要表现为精神发育迟滞.多动.冲动、注意缺陷等行为问题. 部分患儿出现焦虑,社交退缩.刻板动作等孤独症样行为.除此之外。男性浙 江学博学位论文 第一章引占 还会有不同程度的特殊面容,如长胜,大耳等 ..认知功能表型 精神发育迟滞是脆性综合征最常见的临床表现,基因垒突变的男性 %会出现智力障碍.其智商通常夼于之间四,而携带全突变的女性中仅 有.%表现为智力异常,而且智力低下的程度较轻.但是,全突变女性往 往存在心理障碍.比如情感障碍,回避型人格障碍和刻板习惯性障碍”. 有研究发现.男性的智商与的水平和母亲受教育的程度有关.随着 年龄增长智商遥新下降】.等人用 .量表对名脆性综台征的男童先后次进行非语言智商测试, 结果发现,随着年龄增长,男童非语言智商显著呈线性下阵,并且其智商平均 水平和变化的速串与母亲受教育程度、儿童是否台并孤独症或水平无关‘川. 作者分析,的下降并非儿童智力的总体恶化,而是由干儿童智力的增长连 度低于正常平均水平.因此,相对于智打量表,其智商得分随年龄增长而减 少. 认知功能障碍直接影响复杂信忠的短期记忆.视觉空间技能以及语言能力. 因此,语言发育迟缓往往是儿童就诊的最初症状‘”.男童的语言能力与 其是否合并孤独症谱系障碍 密切相关,没有合 并的男童,其感受性和表达性语言的能力均与非语言智商相匹配的正常 儿童相仿.而合并的男童语言能力明显低于非语言智商相匹配的正常儿 童. ..行为表型 脆性综合征男性往往表现出孤独症样行为,比如视觉交互注意缺陷.触觉 抵抗和刻板重复性行为‘”.其中相当多的男性合并有孤独症,发病率夼于% 到%之可州.近十多年来的研究发现,合并孤独症的患者比单纯或 单纯孤独症的患者临床表现严重得多,包括更严重的发育障碍衅.较低的认 知能 力邮.较低的适应性行为。矧,以及更多的问题行为【碉.第一苹苦 淅讧大芈博‘学位论文 绝大多数的儿童还表现为多动、注意缺陷以及冲动行为,这些行为使得 / 许多儿童,尤其是男孩被诊断为注意缺陷多动障碍综告症【 】“川.而且患者发生的概率明显高于不 明原因的智力低下者%%,并且不依赖于忠儿的智力年龄和水平【“. 等人用种经心理学方法检测男童的注意力包括选择性注意.分散注 意和持续注意.结果发现,儿童在计划和组织视觉搜索,将注意从一个目标 转移到另一个目标.或从一个概念转移到另一个概念时比唐氏缘台症和正常 儿童 困难;另外,/对无关刺激的注意抑制能力也鞍对照组儿童弱【叫.当完成 需要高度注意能力的执行功能? 任务时,儿童的注意 缺陷尤为突出.等人比较脆性综合征男孩和智龄匹配的对照组,男 孩在执行功能的诸多方面,比如注意抻制,工作记忆、认知灵活性和计划等能 力 均存在显著缺陷删.提示男童的执行功能障碍不仅仅归因干发育迟缓,而更 可能与其特殊的神经认知缺陷有关.在认知功能较好的女性中执行功能的缺 陷也较常见?. ..其他表型 脆性综合征患者往往表现出比较特殊的面容特征.比如大头、长脸.大耳/ 招风耳,前额和下巴突出.青春期后的男性患者往往出现大睾丸.还有人报道 合并其他体格特征,如腭弓高,肌张力低下.扁平足.关节牲弛以及二尖瓣脱 垂廿 ,【州等等.这些表现可能与结缔组织异常有关‘伺, 但是,这方面的研究不多,具体机制知之甚少. 脆性综各征还会出现其他的临床表现,包括瘴痛等.有报道称儿童癫 %”】. 痛的发病率较高,达%,二尖瓣脱垂达 此外,不同的文化背景对儿童的智力状况和行为发育会产生不同的影响.上 述认知和行为研究大都是在美国高加索人群中进行,迄今为止,尚没有关于中国 汉族人群儿童临床表型和社会技能的报道.浙江学博?学位论文 筹一章引盲 . 的相关治疗和干预研究 脆性综合征的治疗包括药物治疗、行为干预毗及多学科的合作,如针对发育 迟缓的言语和语言治疗、作业治疗、物理治疗,以及特殊教育等.其中药物治疗已 经从原来只针对临床特征进行用药发展到目前针对神经病理机制的靶向药物治疗。 ..针对症状的治疗 和其他遗传性疾病或不明原因的智力障鹰儿童一样,脆性综合征儿童 的发病率较高’.有研究显示,中枢兴奋剂可以改善儿童的 症状”.选择性羟色胺再摄取抻制剂可以缓解脆性综合征患者 %以上时间的焦虑和相关问题【”.临床上通常用抗精神病药物治疗脆性综合 征男性和女性的易赦惹,攻击性.情绪不稳定和固执行为.刹培酮 是过去几年里应用最广迁的抗精神病药物,该药临床效果鞍好,对成年男性 的攻击行为和男童的其他易发怒等异常行为以及孤独症样特征均有改善四. 脆性综合征患者发生癫痫的风险增加.男孩为%一%,女孩为%【“”. 患者癫痫症状通常用单一的抗惊厥药就可以控制,治疗时除了考虑抗惊厥药 物的使用范围外,还要考虑到患者的特殊性,比如肌张力低下,结缔组织疏 松以及认知和行为问题.具有加重张力减退、菜和日问镇静等副作用的药物 应 该避免使用. ..针对神经生物学机制的治疗 基因敲除动物模型的应用,促进了针对神经生物学机制治疗的研究. 根据神经固于的作用机制分为以下几类:下调从族或其他联接受 体到树突翻译机制的转导信号通路的活性:降低受调控的个别蛋白质的 活性;上调细胞膜表面受体木平及其活性;修正其他调节突触活性 的受体或蛋白的活性:应用反义技术阻断受调控的的翻译. 针对性靶向治疗在模型中甚至是成年动物模型中也有疗效.由此可见,不仅 仅发 育朔的大脑需要,成年期圈缺失所致的突魁功能障碍也能被逆转. 第一帝 浙江大学蚺学怔论女 ..行为干预 脆性综合征往往存在许多行为问题,比如:多动冲动、焦虑,社交退缩、 刻板等孤独症样行为.因此.行为干预也是一个不可或缺的治疗手段.动物和人 粪研究均提示,环境变化可以影响行为比如.高质量的家庭环境,可以使脆 性综合征孩子的孤独症样行为更少.适应性行为更好...等人对 患者行为干预提供了详细的综述和建议,该建议遵循功能性行为分析和前因 一行为一后果模式的原理.其理论依据是:不良行为是如何维持下来并得到奖赏 的.并且.应该如何通过正性强化法用恰当或适合的行为替代这些不良行为删. 由于患者合并孤独症的概率很高,因此,有作者建议将孤独症的心理行为治 疗应用到患者斟.高功能的患者可以进行心理治疗和心理咨询旧,比如 通过脱敏疗法减轻焦虑,通过结构化认知行为方法处理抻郁,以及通过小组治疗 处理社会技能问题等等. 综上所述,脆性综合征是一种发病率鞍高的导致智力障碍的遗传性痍病, 患者除了表现为精神发育退滞以外,还伴有不同程度的特殊面容和行为问题. 但是.非典型的个案外表特征并不明显,增加临床诊断的田难,井且,女性患者 临床表现鞍轻者不易被发现,因此,家族中往往重复出现该病.许多园发育迟缓 或智障就诊的儿童,如果可以确诊为,不仅使其无需浪费时问及金钱四处求 医,同时也可以尽早得到特殊干预和治疗.并且,通过发现先证者,医生可以为 家族成员提供遗传咨询,减少或避免家族中再次出现类似患者,从而减轻家庭和 社会的负担.因此,开展的诊断和认知研究具有深远的社会意义和经济效益. 本课题进行了以下几方面的研究:用双重实对荧光定量浩谤断脆性 综台征,并进行了余例家系遗传学研究;脆性综合征临床特征的筛壹 意义和社会适应能力研究;基因敲除小鼠脑组织时空表达规律 的研究.毗达到以下目的:建立的饰壹.诊断及遗传咨询的临床平台; 提高临床医生对的识别能力,以早期发现和早期治疗,为儿童的特 殊干预提供理论依据:探讨脆性缘台征的神经机制,为靶向治疗提供依据.浙?人学博学位论文 第一章引言 .参考文献 ? : . . 】 : ?: . 【】 :【】 :: 】 , ? :?】 . . :? . , . :? .】 ,:?【】 , , : . :? , 【】 ,儿, : 【 , :】 , :? . ,?砒 】 .:江举牌学位论空 第一常州卉 . , : ,, , ? , : ” . , , .:?. .: ” . , , ? : 博 . , , ::?伸 ./ , . :.加 .:. / .. 鲥一觞 . . :一 北. ,,?:? ? . . . . 。 浙旺大学博学位论女 第一苹引言 . : .?, , :?. 】 : : . , , .: 一 , 硌, , : . . , 【】 , .: ? . 【】 , , ×: , 】 ,帆. : , 口 . . :一 .舭 【 :. . , 【】 , 鹅一口自 浙?九学博‘学位论::, ,】 , :: . , 】 :。 . , , 【】 , ? :. 】 , ,、?:一“ , , , 【】 , ? : , , 】? :? . . , 【】 , ..:. , , 【】 ? :淅旺大学博?学位论女 第一章自,【】 ,? / . :? 【? , , . :. . 【 . , ? : .【】 , , .. : .. :,】 , :? . 】 ,鲥 . 【 , , , . :? , . 】 .:. ..】:?.新旺凡学博学位论立 第一章引占 让 ,, , . : ?, , ? . , :? , , . ?. . , :? % . , , . . . , . . . ,:? 弛 , . , :】? 孵 , , 。. 酣 :. :. ?., , ,, . :, :? 矾 丁 .: ., . : 浙江大学博?学位论文 第一帝引占 , ,.:? 【】 , , ?: :. , 】 . : . :一, , , 【】 , . :? ’ 【】 , , , . : . . , 】 :? . ., 】 . :【 . : . ?【】 , , , :..难一章引占 断?大学博学位娩立 ’ , .【【,, . :?,.: 】 :? .? , 【】 ?: ,? 【】 , , , : 】 : , , 【】 . : : :. , 。 ’ . , 【 : .: . 【】 , :. ., , ,? 【 : . 浙江人学博学位论文 【】 , ,.,【 , , , ,:? 】? ,~ . ?、:? . 】? , 【】..: , ? , 】? : , , 】 , ?: , , , 【】 .:? 【】 . : :.. . 】谢, ,一 ?;浙工人学博学位论 蚺一章双取实时荧光定且诰断脆性综古缸致象系研咒 第二章双重实时荧光定量诊断脆性综合征及家系研究 %以上的脆性综合征是由于基因重复序列异常扩展出现全 突变重复数超过以上。导致其上游岛甲基化.使得基因编码蛋白质 缺失所致?,另有不到%的患者是由于基因点突变或缺失突变 引起“.而且,患者认知缺陷的严重程度取决于基因甲基化的程度,而非其全 突变的大小”』。全突变的基因如果不伴有甲基化则可以转录翻译产生部分 。患者的认知缺陷程度也较轻,因此,的诊断方法主要用于鉴别 基因的重复数和岛甲基化状态. 印迹杂交 技术是目前公认的诊新脆性综合征的金 标准‘”.该方往敏感性和特异性均很高,既能区分基因的前突变和全突变, 也能明确其甲基化状态.但是, 技术非常繁琐费时.费用昂贵,并且 需要较多量的,不适用于大规模的筛查:而用地高辛标记探针的 方法要求高】,不太稳定,如果选择标记探针则存在同位素污染问题, 因此,到目前为止尚来在许多发展中国家包括中国推广. 常规技术用引物扩增包括重复序列在内的片段,正常 基因和重复散小于的前突变,经法扩增,在琼脂糖或胶电泳 后呈现阳性条带,而且可以明确具体的重复数.该技术简单、灵敏.快捷. 需要血液量少,已经广泛应用于大量人群的筛查.但是.常规法也有局 限性,只能扩增重复数小于的基因片段,重复数大于的前突 变和全突变基因在常规扩增后均不能显示可辨认的条带.女性由于有 两条染色体.其中一条在正常情况下随机失活,如果一条染色体的等位 基因垒突变.则另一条会教活而产生正常,因此,用常规法无法区分 女性正常和全突变或高拷贝的前爽变. 近年来,有作者将普通方浩进行改良.扩大了其有效性.比如用嵌台引