丙肝病毒RNA检测在丙型肝炎诊断和治疗中的意义

  丙型肝炎病毒RNA定量检测在丙型肝炎诊断及治疗中的意义 石安惠1 郭渝1 胡伟1  姜远凤2 文欢2 (1、 四川省宜宾市第二人民医院检验科，四川宜宾44000） (2、 四川省南充川北医学院实习生，四川南充 637000） 摘要　目的  探讨肝炎病毒RNA检测在丙型肝炎诊断及治疗中的意义。  用酶联免疫法从门诊及住院患者输血前/术前检查中筛查出的120例丙型肝炎抗体阳性者，采用PCR方法检测丙型肝炎RNA定量，结合该患者临床其他肝功能指标，排除其他肝炎患者，对丙肝RNA定量结果进行分组。结果  120例HCV抗体阳性者中，78例HCV—RNA定量结果>1.00E+03 IU/ML，42例HCV—RNA阴性，阳性率为65%。其中50例HCV—RNA>1.00E+04 IU/ML以上且排除其他肝炎或引起肝指标异常因素的患者相应的肝功能指标ALT(82.21~362.18U/L,平均值129.51 U/L)，AST（77.34~270.6 5U/L，平均值134.28 U/L）；28例HCV—RNA定量结果介于1.00E+03 IU/ML与1.00E+04 IU/ML之间，肝功能指标ALT值介于16.78~69.42 U/L，AST值介于24.13~72.42 U/L。42例HCV—RNA阴性中，36例肝功能指标处于正常范围，6例肝功能指标ALT介于268.60~1109.65 U/L，AST402.94~625.75 U/L，追踪其病历发现该6名患者分别患有酒精性肝炎，艾滋，梅毒，肺结核等可能会导致肝功能受损的疾病。经相关性分析，肝功异常水平与HCV-RNA含量呈正相关性（r=0.451，P<0.005）。结论  对丙肝抗体阳性者作丙型肝炎病毒RNA定量检测，以确证是否为丙型肝炎现症患者，再根据其肝功能指标进行对症抗病毒治疗，从而辅助指导临床医生及时给患者对症用药具有较大意义。 关键词  丙肝抗体；丙肝RNA 定量；丙肝诊断、治疗。 Clinical significance of the examination of hepatitis virus RNA in diagnosis and treatment of in patients with HCV. Shi An-hui1，Guo Yu1,Hu Wei1 ,Jiang Yuan-feng2,Wen Huan2. (Department of Clinical Laboratory ,The second people’s Hospital of Yibin City, Sichuan Yibin,644000, China)   【Abstract】 Objective  To disuss clinical significance of the examination of hepatitis C virus in diagnosis and treatment of in patients with HCV. Methods Real-time fluorescence PCR used to detect the quantity of HCV—RNA in 120 cases anti-HCV masculine samples,which come from outpatient and hospitalization,preopreative examination with ELISA.Other patients with the clinical liver function indicators, exclude other hepatitis, grouping analysis of HCV RNA quantitative results.results  78 cases of 120 cases of HCV antibody positive, HCV - RNA positive, 42 cases of HCV - RNA negative, positive rate was 65%,50 cases of HCV RNA positive and rule out other hepatitis or liver function factors cause liver abnormalities in patients with the relevant indicators ALT(82.21~362.18U/L,the average 129.51 U/L)AST（77.34~270.6 5U/L，the average 134.28 U/L），28 cases of HCV RNA positive liver function indicators ALT16.78~69.42U/L,AST24.13~72.42 U/L。42 cases of HCV - RNA in the negative, 36 cases of liver function index in the normal range,orther 6 cases of liver function ALT268.60~1109.65 U/L，AST402.94~625.75 U/L，Tracking the case found that the 6 patients with alcoholic hepatitis, AIDS, syphilis, pulmonary tuberculosis, etc. May cause liver damage of disease.Conclusion  For hepatitis c antibody positive for hepatitis c virus (HCV) RNA quantitative testing, to confirm whether for hepatitis c patients, according to the liver function index to suit the antiviral treatment, so as to suit the medicine to guide clinicians have larger significance.     【Key words】Anti-HCV; HCV RNA; Diagnosis; Treatment; Clinical observation       我国是病毒性肝炎的高发区。全球HCV感染者约1.7亿，我国人群抗HCV阳性者达3.2%，约3000万[1]。HCV基因组为单股正链RNA，目前可将HCV分为6个不同的基因型，同一基因型可再分为不同亚型。基因型分布有显著的地区性差异，我国以1b型为主。HCV主要通过输血及血制品、注射、血液透析、性接触等传播。人体感染HCV后，可引起病毒血症，感染后第一周可从血液或肝组织中用PCR方法检出HCV RNA，HCV RNA阳性是病毒感染和复制的直接标志，第二周开始，可检出抗HCV[1]。HCV感染后易慢性化，导致肝炎、肝脏纤维化、最终肝硬化。实验室检查可出现血液三系减低，肝功能指标升高[1]。为此，我们通过120例临床检测结果分析来探索丙肝RNA检测在丙型肝炎诊断及治疗中的临床价值。 1 资料与方法 1.1  一般资料  选择2012年6月—2013年1月在我院门诊部及住院部患者需做输血前/术前检查的标本，经ELISA方法检查，HCV抗体阳性120例；其中男性66例，女性54例，年龄在24—82岁之间。 1.2  检测方法与试剂  1.2.1  HCV RNA测定  采用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测，仪器采用X3000P扩增仪，试剂由湖南圣湘生物科技有限公司提供。操作严格按照按试剂盒说明书进行操作。HCV RNA定量的阴性参考值<1.00E+03 IU/ML. 1.2.2  HCV 抗体测定  采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测，仪器采用安图2010全自动酶标仪，试剂由北京现代高达生物技术有限责任公司提供。严格按该试剂操作规程进行操作。Cutoff值为0.150，S/CO值大于0.150为阳性。 1.2.3  统计学方法 采用SPSS软件对实验数据进行统计分析处理，计数资料采用２检验，对肝功采用相关分析P<0.005，差异有统计学意义。 2  结果  120例HCV抗体阳性者中，78例HCV—RNA>1.00E+03 IU/ML，42例HCV—RNA阴性，阳性率为65%。检测120例患者的肝功能，其中，78例HCV—RNA>1.00E+03 IU/ML的患者中，50例患者的肝功能指标ALT(82.21~362.18U/L,平均值129.51 U/L)AST（77.34~270.6 5U/L，平均值134.28 U/L），28例HCV—RNA阳性肝功能指标ALT值介于16.78~69.42 U/L，AST值介于24.13~72.42 U/L，肝功能指标随着HCV-RNA定量值的升高而比例升高；42例HCV—RNA阴性中，36例肝功能指标处于正常范围，6例肝功能指标ALT介于268.60~1109.65 U/L，AST402.94~625.75 U/L，追踪其病历或其他检查发现该6名患者合并有酒精性肝炎，艾滋，梅毒，肺结核等可能会导致肝功能受损的疾病。经相关性分析，肝功异常水平与HCV-RNA含量呈正相关性（r=0.451，P<0.01）         一  肝功正常组与异常组在HCV-RNA阳性标本中的比例 HCV-RNA定量 抗HCV阳性（%） 肝功正常（%） 肝功异常（%） >1.00E+03 IU/ML 78/120（65%） 28/78（23%） 50/78（64%） <1.00E+03 IU/ML 42/120（35%） 36/42（86%） 6/42（14%） 注：HCV-RNA定量正常与异常者肝功能异常比例有显著差异（P<0.05）. 表二  120例抗HCV阳性标本血清 HCV-RNA定量与肝功指标的关系 标本数 HCV-RNA定量 （IU/ML） ALT （X-±S） （U/L） AST （X-±S） （U/L） 72 >1.00E+04 129.51±27.3 134.28±29.4 42 <1.00E+03 43.3±9.78 48.75±8.99 注：HCV-RNA定量正常与异常者肝功能指标有显著差异（P<0.01）. 3  讨论      丙型肝炎主要是由丙型肝炎病毒（HCV）感染所导致，该病毒主要通过血液/体液进行传播，占输血后肝炎患者总数的70%左右[2]。多数丙肝病毒感染者无明显症状，发病比较隐蔽，极易慢性化，具有相当高比例发展成肝硬化，肝癌[3]。因此尽早诊断、及时治疗对丙肝患者尤为重要。 目前诊断主要是依靠抗HCV以及HCV RNA的检测。但由于抗HCV检测存在窗口期、不能区别现症感染和既往感染、受集体免疫水平影响等缺陷[4]，不能及时诊断出病毒感染HCV抗体不是保护性抗体，而是HCV感染的标志[1]。HCV-IgM阳性提示现正HCV感染，HCV-IgG阳性提示现正HCV感染或既往感染，而HCV-IgM的检测受较多因素的影响，如球蛋白、RF等，稳定性不如HCV-IgG[5]，因此临床上检测的HCV抗体多数是HCV-IgG，因此不能较好地区别现症感染和既往感染，而实时荧光定量PCR检测HCV RNA含量，可直接反映体内HCV的活动和复制程度等优点，有利于尽早诊断，便于临床及时诊断及疗效观察。 表1通过对120例抗HCV阳性患者检测HCV RNA，其中阳性78例，阳性率达到65%，35%患者HCV处于低复制。表2通过对78例HCV RNA阳性血清的HCV RNA含量及其肝功能血清酶检测结果的比较，从分子学定量角度和生物化学角度证实了HCV RNA含量与肝功能血清酶异常水平呈正相关，与相关研究报告[6]一致.肝功能异常率也与HCVRNA含量呈正相关，也说明了HCV  RNA是在肝细胞中复制，对细胞产生直接或间接的损害。HCV RNA阳性是病毒感染和复制的直接标志，只要确证为HCV RNA阳性的丙型肝炎患者就需要抗病毒治疗。 许多研究表明，丙肝发病过程中肝炎病毒感染使机体免疫系统活化，这些活化的细胞可与因肝炎病毒感染而改变的肝细胞膜成分发生免疫应答，从而造成肝功的改变和肝细胞的坏死”。因此，尽早检测HCV RNA对于丙肝患者的早期诊断和治疗以及预防肝脏的进一步病变有着关键性的作用。因此，应对高危人群检测抗HCV的同时监测其HCV RNA含量，以便尽早诊断，早期治疗，防止HCV RNA含量进一步升高引起肝脏血清学和组织学病变。     总之，HCV抗体与HCV RNA含量联合检测在很大程度上提高HCV患者的检出率，为患者争取治疗时间，对高度怀疑丙肝病毒感染者，可在检测抗HCV的同时检测丙肝RNA。在临床工作中所遇见的血清HCV RNA定量水平较高的患者，应该及时考虑将其疗程适当延长或将剂量进一步加大，以保证能够获得更高的持续应答率[7]。同时对确诊丙型肝炎患者的治疗过程中监测HCV RNA含量，实时了解患者体内病毒复制情况，准确制定或修改治疗，以达到最佳治疗效果。                       [参考文献] [1]  杨绍基，任红，李兰娟,等.传染病学第7版[M].北京：人民卫生出版社，2008，26-40. [2]  羌韧.慢性丙肝血清HCV RNA和抗HCV检出率与肝功能损害的关系[J].交通医学，      2009,17（16）：640-641. [3]  朱世能，陆祎.丙肝病毒与肝细胞癌关系研究进展[J].第二军医大学学报，2003,24（4）：      356-359. [4]  王彦君，谭复明，陈伟华,等.重组干扰素治疗慢性丙型肝炎68例[J].中西医结合肝病杂志，2005,15（5）：295-296. [5]  郭园丽.丙型肝炎的诊断与治疗[J].金域检验通讯月刊，2012，136（10）：7. [6]  赵颖，魏军，王菊英.丙型肝炎病毒核酸定量测定的临床价值[J].宁夏医学杂志，20. [7]  唐美芳，杨俊文，骆成榆.丙肝肝炎基因型病毒量及肝损伤程度与α干扰素疗效的关系      [J].临床肝胆病杂志，2010,17（12）；289-290.