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大鼠人工体神经—内脏神经吻合术后异类神经元微管相关蛋白2和睫状

2017-12-26 11页 doc 31KB 23阅读

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大鼠人工体神经—内脏神经吻合术后异类神经元微管相关蛋白2和睫状大鼠人工体神经—内脏神经吻合术后异类神经元微管相关蛋白2和睫状 郑州大学,,,,年硕上论文 人工体神经一内脏神经吻合术后异类神经元,,,,和;,,下的表达变化 大鼠人工体神经一内脏神经吻合术后异类神经元 微管相关蛋白,与睫状神经营养因子的表达变化 研究生: 史玉洁 导师: 高晓群郑州大学医学院人体解剖学教研室 郑州,,,,,, 中文摘要 研究目的 脊髓损伤(,;,)导致的肢体瘫痪和膀胱,直肠功能障碍一直是医学上的一大难题。近几年来,我国脊髓损伤后膀胱和直肠功能重建的研究有了重大突破,肖传国在国际上率先提出了“人工建立体神经一...
大鼠人工体神经—内脏神经吻合术后异类神经元微管相关蛋白2和睫状
大鼠人工体神经—内脏神经吻合术后异类神经元微管相关蛋白2和睫状 郑州大学,,,,年硕上论文 人工体神经一内脏神经吻合术后异类神经元,,,,和;,,下的表达变化 大鼠人工体神经一内脏神经吻合术后异类神经元 微管相关蛋白,与睫状神经营养因子的表达变化 研究生: 史玉洁 导师: 高晓群郑州大学医学院人体解剖学教研室 郑州,,,,,, 中文摘要 研究目的 脊髓损伤(,;,)导致的肢体瘫痪和膀胱,直肠功能障碍一直是医学上的一大难题。近几年来,我国脊髓损伤后膀胱和直肠功能重建的研究有了重大突破,肖传国在国际上率先提出了“人工建立体神经一内脏神经反射弧修复截瘫后膀胱功能”这一神经学新概念。通过吻合大鼠躯体运动神经(,,前根,,。,,)与内脏躯体混合运动神经(,,前根,,,,,)建立人工体神经一内脏神经反射弧,基础研究与临床实践均证实,,躯体运动神经元能够再生并支配内脏神经节前纤维和躯体运动神经纤维。这对脊髓损伤导致神经源性膀胱的治疗有着重要的临床意义。但是对成功支配或与异类神经靶器官连接的,,神经元(异类神经元)的功能特性有待研究阐明,以利于更好的研究影响异类神经再生的因素。 人工体神经一内脏神经吻合术后神经轴突再生的影响因素可分为促进和抑制作用两类,其中微管相关蛋白,(,,,一,)和睫状神经营养因子(;,,,)都是能促进并影响轴突再生的重要生物活性因子。故而本实验通过对大鼠人工体神经一内脏神经反射弧模型,,脊髓前角中,,,一,和;,,,表达的动态变化,探讨了异类神经元的特性和人工反射弧建立的影响因素,对进一步研究人工反射弧的形成与功能机制,以及促进再生修复的干预手段的研究有重要意义。郑州大学,,,,年硕士论文 人,体神绎一内脏神经吻合术后异类神经元,,,,和;,陌的表达变化方法,建立大鼠人工体神经一内脏神经反射弧模型:在大鼠椎管内分离出左侧,,前 根(,,,,)和,,前根(,,,,),在,,神经入椎间孔水平分别离断,,,,和,,,,,, ,— ,可吸收缝线吻合,,,,头端和,,,,尾端,建立大鼠人工体神经一内脏神经反 射弧模型,并分为正常组,术后,、,,、,,、,,、,,天组。,总,,,的提取:在规定时间点取,,伤侧脊髓组织,,,,,用,,,,,,试剂提取 总,,,,琼脂糖凝胶电泳检测,,,完整性,紫外分光光度计检测总,,,含量。,反转录聚合酶链反应(,,,,,,, ,,,,,,,,,,,—,,,,,;,,,, ;,,,, ,,,;,,,,,,,,,;,) 扩增手术后各时间点,,,一,和,,,,的,,,,在脊髓神经元的动态表达水平, 通过凝胶图象分析仪对电泳条带进行半定量检测。,免疫组织化学方法检测各时间点,,,一,和,,,,的蛋白在脊髓神经元的动态表 达水平。,实验数据用,,,,,,(,软件进行,检验与单因素方差分析。结果,正常大鼠脊髓内,,卜,与,,,,,,,,水平较低,人工体神经一内脏神经吻合术 后,,,,与,,,(,各时间点表达变化的差异有显著性(,,,(,,),术后,天时,,,运动神经元,,,(,的,,,,和蛋白表达水平均较正常动物增 高,,,天时达高峰,,,天时则低于正常水平(,„,(,,):,术后,天时,,,运动神经元,,的,瑚?,和蛋白表达水平均较正常动物增高, ,,天时达高峰,,,天时则恢复并接近正常水平(,,,(,,);结论, ,,,一,反映脊髓运动神经元的功能状态,术后的表达水平变化与神经反射弧生 长与建立的过程相一致,并且与,,运动神经元(异类神经元)的功能重塑有 关。,脊髓,,,,表达的变化与再生髓鞘化进程密切相关,其在术后的代偿性升高, 起到保护脊髓,,运动神经元(异类神经元)与促进神经元芽生的营养作用。 郑州人学,,,,年硕上论文 人工体神经一内脏神经吻合术后异类神经元,,,,和;,,,,的表达变化关键词 人工体神经(内脏神经吻合术;微管协同蛋白(,(,,,一,):睫状神经节营养因子(;,,,)塑型奎兰~竺~~堡主堕壅 尘三苎塑丝二蜜壁塑丝堕鱼查重量丝壁丝重竺竺~塑~婴塑壅~奎~~坐 ,,, ,,,,,,,,,, ;,,,,,, ,, ,量,,,, ,,, ,,,, ,, ,,;,,,,, ,,,,,, ,,,,, ,,,,,;,, ,,,,,,;,,,,,,,,,; ,,,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,,: ,,,,, ,,, ,,,,,: ,,,,?,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,; ,,,,;,, ,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,?,;,,,;,,,,,,, ,,,,,,?,, ,,,,,,“,,,),, , ,,,,,;,,, ,,,,;,, ,,,,,,, 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,,,,,,,(,,,一, ,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,,;,,, ,,,,;,,,, ,,;,,,, ,,,;, ;,,,;;,,,,,,, ,,, ,,,,;, ,,,, ,,,,,,,,,,(,, ,,,,, ,,,,,, ; ;,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,, ,, ,,(郑州大学,,,,年颁,论文 人工体神经一内脏神经,纫台术后异类神经元,,,,和;,的表达变化,,,,, ,,,, ,,,, ,, ,,,,“;,,, ,,,,, ,,,,,, ,,,,, ,,讧,;,, ,,,,,,;—,,,,,,,,;,,,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,;,,,,, ,,, ;,,,,, ,,,,,,,一, ,,, ,卜,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,, ,,;,,,,,, ,, ,;“,, ,, ,,, ,,,,,;,, ,,,,,,;(,,,,,,,,; ,,,,,,,,,,,,, ,,,, ;,, ,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,?, ,,,,?,,,,,,, ,,,, ,,;,,, ,,(,,,,,,,, ,,, ,,,,,;,, ,,,,,,;—,,,,,,,,至; ,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,,:,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,—,,,,,, ,,,, ,,,曲,,, ,,,一,,,舀,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,, ,,,,,,,,,;,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,一,, ,,,,,,,,; ,, ,,,,,, ,,, ,,,,,, ;,,,;,,, ,,,,,, ,,,,,, ,,; ,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,, ,,;,,,,,,,,, ,,,, ,, ,,,墙, ,,, ,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,, , ,,,,(,,, ,, ,,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,(,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,(, ,,,,, ,,, ,,,,,;,,,,:,, ,,,百,;, ,,,, ,,,,,,,,,,, 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,郑州大学,呻,年硕十论文 人,体神经一内脏神经吻合术后异类神经元,,,,和;,,,的表选变化, ,, , ,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,, ,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,, ,,,一, ,, ,, ,,,,,, ;,,, ,,,,,,, ,,;,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,, ;,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,, ,,,,, ,, ,, ,,,,(,,, ,, ,, ,,,, ,;,,, ,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,, ,,,,, ,,,, ,,,,, ,, ;,,叫,,,,,, ,,,,,(,,,(,,)(, ,,,,, ,,, ,,,,,;,, ,,,,,,;—,,,,,,,,; ,,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,;,,,,,, ,,,, ;,,,,,;, ,, ;,,,,,,, ,, ,,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,, ,噜,,;,,,, ,,如,,,;,,(,, ,, ,,,, ,,,,, ,,,,,,,,?,,,, ,,,;, ,, ,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,珊,, ,;,,,(,,,;,,,,,,, ,,,,, ;,,,, ,,,,,, ,,,;,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,,, ;,,, ,,,,, ,,,,,,,,, ;,,,,,; ,,,,,, ,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,, ,,;,,;,,,,,, ,,,, ,,,伊,,,, ,,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,;,, ,,,,,,;,,,,,,,,,; ,,,,, ,,,,,(,,, ,, ,,, ;,,(;,,,,, ,,,, ,, ,,,,, ,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,;,,,,,,(, ,,,,咖,,,,,,,,?,,,;,,,,, ,, ,,,, ,,,, ,,, ,,,,;,,,, ,,, ,,, ,,,,,, ;,,, ,,,,, ,,,,, ,,, ,, ;,, ,,,,,,;, ,,,,,,,, ,,, ,,,,, ,;,,,,,,,,,,(,,,,,,,,,,,,,,;,, ,,,,,,;,,,,,,,,,; ,,,,, ,?,,,,,,,,,: ,,;,,,,,,,(,,,,;,,,,,,,,,,,,,(?廿,,); ;,,,,,, ,,,,,,,,,,,; ,,;,,,(;,,同 ,,— 郑重声明 本人的学位论文是在导师指导下独立撰写并完成的,学位论文没有剽窃、抄袭等违反学术道德、学术规范的侵权行为,否则,本人愿意承担由此产生的一切法律责任和法律后果,特此郑重声明。 学位论文作者(签名):史,。菇 此年,月弓口日郑州人学,,,,年硕十论义 人工体神经一内脏神经吻合术后异类神经元,,,,和;,,,的表达叠化 大鼠人 工体神经一内脏神经吻合术后异类神经元 微管相关蛋白,与睫状神经营养因子的表达变化 研究生: 史玉洁 导师: 高晓群 郑州大学医学院人体解剖学教研室 郑州,,,,,, 刖吾 脊髓损伤(,,,,,, ;,,, ,,,,,,,,;,)导致的神经源性膀胱一直是社会和医学的难题之一。我国大多数脊髓损伤患者都因肢体瘫痪和大小便功能失控,丧失自立自理能力,生活质量极差。排尿功能障碍更可进一步引起尿毒症、慢性肾功能衰竭、泌尿系统感染和结石等许多并发症,这是脊髓损伤患者晚期死亡的主要原因,也是医疗和护理的棘手问题。 近几年来,我国脊髓损伤后膀胱和直肠功能重建的研究有了重大突破,肖传国在国际上率先提出了“人工建立体神经一内脏神经反射弧修复截瘫后膀胱功能”这一神经学新概念【,】,把两个结构和功能完全不同的躯体运动神经与支配膀胱的副交感神经吻合起来,在皮肤区域一相应的脊髓节段一膀胱之间重新建立新的神经反射通路,使膀胱逼尿肌功能得到恢复,同时尿道括约肌也可得到一定程度的恢复,以改善神经源性膀胱的排尿功能,,,,。并且从,,,,年开始应用于临床治疗脊髓损伤后大小便失禁患者(,,余例)取得成功晤。,,。,,,,年开始应用于治疗先天性脊柱裂脊髓脊膜膨出所致大小便失禁患儿(,,例)取得成功【,】,同时,神经示踪和神经电生理的基础研究方法也证实:通过大鼠躯体运动神经(,,前根,,,,)与内脏躯体混合运动神经(,,前根,,,,)吻合后建立的人工体神经一内脏神经反射弧,“躯体运动神经元能够再生并支配内脏神经节前纤维和躯体运动神经纤维,,,, ,,。郑州大学,,,,年硕士论文 人工体神经一内脏神经吻合术后异类神经元,,,,和;,,,,的表达变化 作为开创这一神经学新领域,首先攻克脊髓损伤后大小便失禁这一世界性难题的我国,必须完善脊髓损伤或脊髓病变所致神经性膀胱,直肠的功能重建理论和技术,深入开展“人工体神经一内脏神经反射弧”的基础研究和应用研究,以开启新的研究领域,丰富神经学理论,保持我国在此领域的国际领先地位。 为建立人工反射弧而行体神经和内脏神经吻合后,体神经运动纤维能再生替代副交感节前纤维是人工建立的反射弧发挥作用的关键,这种异类神经再生以前基本无人研究,因此,本实验对成功支配或与新的靶器官连接的,,神经元(异类神经元)的功能特性做了初步研究,以利于更好的研究影响异类神经再生的因素。人工体神经一内脏神经吻合术后神经异类神经轴突再生的影响因素可分为促进和抑制作用两类,其中神经元微管相关蛋白,(,,,(,)睫状神经营养因子(;,,曰和都是能促进并影响轴突再生的重要生物活性因子【,,,。,,,(,存在于神经元胞体的树突和轴突,是微管间桥的主要成分。,,,(,可与微管连接促进它的稳定,并可能参与神经元的发育、结构稳定、突起形成及突触可塑性的调节【,,】,因此,,,一,在神经元与轴突的再生中发挥重要作用。,,,,属于神经调节细胞因子家族中的一员,内源性;,,,主要来源于周围神经施万细胞、中枢神经胶质细胞以及神经元的自分泌【”】。脊髓运动神经元中在主要受哪影响,同时,其它神经营养因子也发挥作用【,,】。 本实验在通过做人工体神经一内脏神经吻台术后,,,,,,和;,,,在异类神经元再生过程中表达水平发生的规律性变化,对于影响反射弧建立的相关因素做了初步探讨,有助于进一步阐明脊髓损伤后用人工反射弧重建膀胱,直肠功能的神经分子生物学基础、研究人工反射弧的形成与功能机制,以及促进再生修复的干预手段的研究。郑州大学,,,,年硕上论文 人工体神经一内脏神经吻合术后异类神经凡,,,,和;, ,,的表返变化 材料与方法,主要试剂和材料,(,实验动物:,,,级成年,,,,,,雄性大鼠,体重,,,,,,, ,,由湖北省实验动物中心提供。,(,主要试剂,,,,,,试剂 美国,,,,,,,生物试剂公司,,,提取试剂盒 美国,,,,,,,生物试剂公司引物 武汉中和生物试剂公司合成逆转录试剂盒 美国,,,,,,,生物试剂公司,;,反应试剂盒 美国,,,,,,,生物试剂公司,,,分子量,,,, ,, 武汉博士德公司小鼠抗大鼠,,,(,单克隆抗体 武汉搏士德公司兔抗大鼠;,,,单克隆抗体 武汉博士德公司,,(,,,,试剂盒 北京中山生物有限公司,,(,,,,试剂盒 北京中山生物工程有限公司,,,显色试剂盒 北京中山生物工程有限公司多聚甲醛 美国,,,,,生物试剂公司,(,,焦碳二乙酯(,,,;) 美国,,,,,生物试剂公司琼脂糖 美国,,,,,生物试剂公司溴化乙啶(,,) 美国,,,,,生物试剂公司二甲苯 上海试剂一厂中性树胶 上海试剂一厂,(,常用溶液,,,水合氯醛:,,,水合氯醛溶于,,,,,蒸馏水中。,,多聚甲醛溶液:,,多聚甲醛:, 水浴中加热,待温度与水浴平衡,,多聚甲醛溶于,,,,,蒸馏水中,在,,? 时加,, ,,,, ,(,,,,强烈摇动直至多聚甲醛完全溶解,冷却至室温,加蒸馏水至,,,, ,,,用中性滤纸过滤,室温储存待用。取,,, ,,,,多聚甲醛,, ,,过滤饱和苦味酸和,,, ,,,(,, ,,(,,,(,),混匀即成。郑州人学,,,,年硕,论丈 人工体神经一内脏神经吻合堑异类型元堂~塑竺垒翌盟塞垄壅些琼脂糖加样缓冲液:,(,,,溴酚蓝,,,,(,,,)蔗糖水溶液。,,,,,,,液配置:,,,,,,,?,,,, ,(,,,,舀,,,,,,,?,,,,, ,,(,,,吕,,,,,,,,蒸馏水,,,,,,,调节至,,,(,,低温冻存待用。,,,蔗糖,,,缓冲液:蔗糖,,,,加入,,,液,,, ,,,搅拌使之溶解,过滤,至,?冰箱中待用。,,,蔗糖,,,缓冲液:蔗糖,,,,加入,,,液,,, ,,,搅拌使之溶解,过滤,至,?冰箱中待用。多聚赖氨酸溶液:,,,,,公司进口分装。用时蒸馏水,:,,稀释。,(,主要仪器显微手术器械 美国电子分析天平 瑞士,,,,,,,,,,,超净工作台 苏州净化仪器设备公司高压灭菌消毒锅 英国,,,,,,超低温冰箱 , 同本,,,,,电热恒温水浴箱 美国;,,, ,,,,, ,微量进样器 美国,,,,,,,,离心机 美国,,,,,,,,,;,扩增仪 美国,,,,,,,,,,(,,,凝胶图象分析仪 上海培清科技有限公司恒冷冰冻切片机 德国莱卡高倍光学显微镜 日本尼康,,(,,,,电泳槽 上海复同生物技术研究所,,,电泳仪 ( 上海生化所生物技术开发公司微波炉 广东格兰仕电器公再,,,,,,紫外分光光度计 日本,,,,,,方法,(,动物分组 ,,只,,,级成年,,雄性大鼠,体重,,,,,,, ,,由湖北省实验动物中心提供。随机分为,组:正常对照组,术后,、,,、,,、,,和,,天组,每组动物郑州大学,,,,年颁十论文 人工体神经一内脏神经吻合术后异类神经元,,,,和;,,,的表达~咝均为,,只。,(,动物模型的建立 参照人体人工体神经一内脏神经吻合术手术方式改造而成。将成年,,大鼠在实验环境中适应性饲养,天后,用质量浓度为,,咖,的水合氯醛,按照,(,,,,,【,体重进行腹腔注射麻醉。待动物麻醉成功后,将动物取俯卧位,固定四肢和头部。寻找腰,至腰,椎体,剪去毛发,碘伏消毒,取背部正中切口,然后在,,倍手术显微镜下操作。切开皮肤 后顺肌肉走行钝性分离,尽量避免过多的损伤和出血。分离腰,至腰,椎板,用咬骨钳咬掉,暴露硬脊膜。用显微镊轻提起硬脊膜,避免损伤脊髓及马尾神经从,用剪刀轻轻剪开后在大鼠椎管内分离出左侧,,前根(,,??)和,,前根(,,,,),在,,神经入椎间孔水平分别离断,,,,和,,,,,, ,—,可吸收缝线吻合,,,,头端和,,?,尾端,连续缝合硬脊膜后,注,(,,,生理盐水入蛛网膜下腔,然后分层缝合。所有大鼠置于,,,,,?,湿度,,,,,,,,光暗周期为,, ,的安静环境中饲养。模型大鼠术后,一,周会出现腹部肿物,为扩张的膀胱。术后大鼠定期消毒手术创口,对于存在尿储留的动物每日人工协助排尿,,,次。 图,人工反射弧重建示意图 ,,,,脊神经后根,(,,脊神经前根,(吻合口,(左,届脊神经后根 ,(脊神经节 ,(左,,脊神经前根 ,(膀胱郑州大学,,,,年颂士沧文 人工钵神经一内脏神经吻合本质趔丝垂型塑竺竺室垄窒些 图,人工反射弧建立手术照片,(,动物模型制作注意事项及成功判断标准 人工体神经一内脏神经吻合术大鼠模型制作是根据人人工体神经一内脏神经吻合手术方式改变而成。在打开腰,—,椎板后,分离左侧腰,、,脊神经前根。在分离过程中应轻微分离和牵拉,注意避免过强刺激和损伤脊髓及后根。分辨脊神经后根和前根的方法是:前根较后根细,位于腹内侧,当牵拉腰,前根时动物下肢会出现较明显的运动反应。而牵拉后根时动物没有明显反应。在经过预实验中的反复练习,本实验中人工体神经,内脏神经吻合术大鼠,停叮爸唬 质鹾蠖ㄆ谙 臼 抟焕 劳觯 拷 胪臣蒲Х治觥?人工体神经一内脏神经吻合质醮纯冢 纺颍 术大鼠模型建立后,大鼠左侧下肢应出现运动功能障碍,肌肉一定程度的萎缩,泌尿系统会出现血尿及神经源性膀胱的症状,如:尿失禁,尿储留。,(,逆转录一聚合酶链式反应(,,,,,),(,(,动物组织标本收集 正常组大鼠随机选取,只,模型大鼠在术后饲养至,、,,、,,、,,和,,天时每组随机选取,只大鼠用,,,水台氯醛(,(,,,,,【,)腹腔内深度麻醉,打开胸 ,郑州大学,,,,年硕,二论文 人工体神经一内脏神经吻合术后异类神经元,,,,和;卜,,,的表碴兰至盟腔,由心尖部插管至主动脉后,,,,,,,,;水灌注,,,,,内灌注完,在打开腰,—,椎板后,将腰髓, ,节段取出,在显微镜下以正中沟为界,将脊髓分为损伤侧及未伤侧,取伤侧脊髓组织,,,,,用以提取总,,,。,(,(,总,,,的提取与鉴定 总,,,的提取采用的是美国,,,,,,,生物试剂公司总,,,提取试剂盒,所用所有器材均经,(,,,,,;水浸泡过夜,高压灭菌后在鼓风干烤箱中烤干,操作过程均在超净台中进行,全部实验过程中戴一次性手套,并经常更换。具体操作步骤如下: (,)伤侧脊髓组织,,,,迅速移入,(,,,,,,,,,,,,中。 (,)加,,,,,,试剂,,,,混匀,冰浴,分钟。 (,)加氯仿,(,,,,混匀,冰浴,,分钟。 (,),?,,,,,,,离心,,分钟。 (,)仔细吸取上层水相,移入另一管中,加,(,,,异丙醇,置室温,,分钟。 (,),?,,,,,,,离心,,分钟。 (,)加,,,乙醇,,,,混匀,充分洗涤沉淀,,?,,,,,,离心,分钟。 (,)弃上清液,真空干燥,用,,,“,水重悬,贮存于(,,?。 (,)取少量做紫外扫描分析和琼脂糖电泳分析。 ,,,的鉴定:采用电泳法鉴定,,,的质量(参照医学分子生物学实验教犁,,,, (,)凝胶的制备: 称取琼脂糖,(,,,加入,,,,,,(,,,,,;水处理过的,×,,,中,加热溶解后加入 ,,,‖,,的溴化乙啶(,,),(,,,,混匀。室温静置半小时左右,使胶凝固。 (,)样品的制备与上样: 在一灭菌的,,,,,,,,,管中加入: ,,, ,锄,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,, ,×,,,, ,,, 将上述成份混匀后,离心,秒钟使管内液体集于管底,随后上样。郑州人学,,,,年硕士论文 人工体神经一内脏神经吻台术后异类神经丘,,,,和;,,,的表达变化 (,)在,×”岖中以,,,;,的场强电泳,,,分钟后在紫外灯下观察电泳结果,并摄影。 ,(,(, ,,,,的反转录 采用,,,,,(,,为引物反转录得到所有,,,,的单链;,,,,反转录 .
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