RP-HPLC法测定复方半支莲胶囊中野黄芩苷含量

RP-HPLC法测定复方半支莲胶囊中野黄芩苷含量 RP-HPLC法测定复方半支莲胶囊中野黄芩 苷含量 ? 348?安徽医药AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal2005May;9(5) RIP.HPLC法测定复方半支莲胶囊中野黄芩苷含量 赵向阳,沈静,刘峰,张春来 (安徽省宿州市药品检验所,安徽宿州234000) 摘要:目的建立复方半支莲胶囊中野黄芩苷的含量测定.方法采用RP—HPLC 法,甲醇一0.1%磷酸水溶液(30:70) 为流动相,在检测波长335nm下测定野黄芩苷的含量.结果野黄芩苷在2,529, 25.29mg?L范围内呈良好的线性关系; 加样回收率为101.50%,RSD为1.46%.结论该法简便且重现性好,可用于复方半支 莲胶囊的质量控制. 关键词:半支莲;野黄芩苷;RP—HPLC法 Contentdeterminationofscutellarinincompound hcrbascutellarjsebarbataecapsulebyHPLC ZHAOXiang—yang,SHENJing,LIUFeng,ZHANGChun—lai (SuzhouInstituteforDrugControl,Suzhou234000,China) Abstract:AimToestablishtheamethodofcontentdeterminationofscutellarinincompoundh crbascutellarjsebarbataecapsule. MethodsHPLCwasusedwithmethanol一 (0,1%)phosphoricacid(30:70)mixtureasamobilephase.Thedetectionwavelengthwas setat335nm.ResultsScutellarinshowedagoodlinearrelationshipatarangerof2.5291— 25,29mg?L,.Theaveragerecoveryand therelativetandarddeviationWas101.50%and1.46%respectively,ConclusionThemethod issimplewithgoodreproducibilityand canbeusedinqualitycontrolofarjsebarbataecapsule. Keywords:hcrbasetellarjsebabatae:scutellarin;HPLC 复方半支莲胶囊由半支莲,熟地黄,白芍等8味中药组 成.为了控制成品质量,我们选择半枝莲中有效成分野黄芩 苷作为指标,采用RP—HPLC法测定其含量,并进行了方法学 考察.结果明该方法能够准确,快捷的测定野黄芩苷的含 量.达到控制成品质量的目的. 1仪器与试药 Agilent1100高效液相色谱仪(美国Agilent);VWD紫外 检测器;复方半支莲胶囊(安徽安康药业,批号:040611);野 黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号:0842— 200102,供含量测定用,含量按96.4%折算);甲醇(色谱纯), 图1对照品,样品及阴性供试品色谱图 1.野黄芩苷对照品色谱图;2.供试品溶液色谱图;3.阴性供试品 色谱图 图1为优化梯度洗脱条件后,用WatersAccQ.Tag专用柱 (3.9mm×150mm,4m),分离分析复方氨基酸注射液 (15AA)所得的色谱图,15种氨基酸均达到基线分离,分析时 间仅为13.5min,运行周期为15min,比原AccQ.Tag标准方 法时间节省30min.通过对多次定量分析结果的比较,我们 发现优化后的方法与AccQ.Tag标准方法测量结果没有显着 差别,该方法可以运用于多个品种复方氨基酸注射液,包括复 方氨基酸注射液(3AA),复方氨基酸注射液(6AA),复方氨基 酸注射液(9AA),复方氨基酸注射液(14AA),复方氨基酸注 射液(15AA)的含量测定中. 3.2几个影响因素分析 3.2.1流动相A的pH的影响该pH对氨基酸保留时间影 响较大.pH偏高.酸性氨基酸出峰提前,碱性氨基酸出峰后 ,结果相反.为使碱性氨基酸(组氨酸)与前一相 移;pH偏低 邻峰有良好的分离,我们提高了流动相的pH,由原标准中的 4.95提高至5.02,让组氨酸出峰后移,提高分离效果. 3.2,2柱温的影响柱温对Arg/Thr,Met/Val峰对的分离影 响较大.我们分别采用柱温为37,38,39~C进行试验,发现柱 温为39?时,两峰对分离最好. 3.2.3衍生试剂加入量的选择在此快速分离方法的研究 中,我们曾分别加入20,17.5,15l衍生试剂,最终样品峰面 积均无显着变化.但加入12.5l衍生试剂时变化较大,重 现性差.综合考虑测定的准确度及降低成本诸因素,我们选 定衍生试剂的加入量为15. 参考文献: [1]陈永波,铙斌,覃兰.氨基酸和生物资源[J],2000,22(2): 54. [2]袁汉成.用AccQ.Tag法分析透析液中神经递质氨基酸[J].液 相色谱通讯,1999,29:5. [3]纪宇RP—HPLC法测定l7种复方氨基酸注射液中的,v.乙酰一 ,一半胱氨酸和,v.乙酰一,一酪氨酸[J].药物分析杂志,2002,22 (3):240. [4]倪维芳,金瓯,张劲松.HPLC法测定复合氨基酸胶囊中氨基 酸的含量[J].药物分析杂志,2004,24(4):402. (收稿日期:2005—02—02) 番 安徽医药AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal2005May;9(5)?349? 水(超纯水),其余试剂均为分析纯. 2方法与结果 2.1色谱条件的选择色谱柱:AlhechC(250mmx4.6 mm);柱温:3OoC;流动相:甲醇-0.1%磷酸水溶液(30:70), 流速:1ml?rain..;检测器:紫外光度检测器,335nm;在上述 色谱条件下,对照品与样品的色谱图见图1. 2.2对照品溶液的制备取野黄芩苷对照品适量,加甲醇制 成每1ml含1Og的溶液,即得. 2.3供试品溶液的制备取本品约0.2g,研细,精密称定, 置具塞的三角烧瓶中,加甲醇25ml,称定重量,超声处理3O rain,放冷,称重,用甲醇补足减失的重量,滤过,取续滤液,用 油性微孔滤膜(0.45Ixm)滤过,即得. 2.4辅料干扰试验取阴性样品(除无半支莲药材外,其它 组成同复方半支莲胶囊),按供试品溶液制备方法制备阴性 供试品溶液.照以上色谱条件进行试验,在阴性供试品溶液 色谱图中与野黄芩苷对照品峰相应保留时间附近范围均没有 干扰峰.见图1. 2.5线性关系的考察精密称取野黄芩苷对照品1O.93 mg,置25nll量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀.精密 吸取该溶液3ml,置25ml量瓶中,加甲醇至刻度,得浓度为 5O.58mg?L(标准品按96.4%折算后)的标准品储备液, 分别精密吸取上述溶液0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0ml,置1O ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得.分别进样1O l,以进样浓度为横坐标(),峰面积为纵坐标(y),绘制标准 曲线.进样浓度分别为2.529,5.058,10.116,15.147,20. 232,25.290mg?L,,峰面积积分值则为98.990,168.155, 419.625,632.530,848.225,1070.875mV?min,,结果表明 野黄芩苷在2.529,25.29mg?L范围内呈良好线性关系, 回归方程为y=43.366X一26.912;r:0.9994.见图2. 2.6精密度试验精密吸取对照品溶液(浓度为10.116 图2野黄芩苷标准曲线图 mg?L)1Ol,重复进样6次,测得峰面积积分值分别为 418.25,418.24,422.37,416.80,416.20,416.94,平均值为 418.13,计算RSD:0.49%. 2.7稳定性试验取本品(批号:040611)内容物,按本文 2.3项下的供试品溶液制备方法制备供试品溶液,精密吸取 供试品溶液1Ol,分别0,2,4,8,12h进样一次,共进样5次, 测得峰面积积分值分别为423.48,421.86,418.74,432.1, 429.03,平均为425.04,计算RSD=1.14%.结果表明野黄芩 苷峰面积在12h内基本稳定. 2.8重复性试验取本品(批号:040611)内容物,按本文2. 3项下的供试品溶液制备方法制备,平行试验5份,测野黄芩 苷含量分别为0.428,0.422,0.423,0.424,0.421mg?粒,, 结果野黄芩苷平均含量为0.424mg?粒,,RSD=0.6%. 2.9回收率试验取已知含量的样品(批号040611,含量: 0.4mg?粒)5份,分别精密加入浓度为0.145g?L野黄 芩苷对照品溶液1ml,按本文2.3项下的供试品溶液制备方 法制备,测定.结果见表1. 2.10样品测定取3批(批号040611,040612,040613)复 方半支莲胶囊,按本文2.3项下方法制备供试品溶液.分别 精密吸取供试品溶液,对照品溶液各1Ol,注入高效液相色 谱仪,测定,计算,结果见表2. 表1加样回收率试验 表2样品中野黄芩苷的含量测定结果 3小结与讨论 本方法流动相的选择参考了中国药典2000年版一部半 枝莲项下野黄芩苷的含量测定的流动相,结果野黄芩苷与杂 质峰分离度不好,峰形较差,更换过几根色谱柱,均得不到改 善,通过查阅文献及实际摸索,又试验采用乙腈-1%醋酸水溶 液系统;乙腈43.1%磷酸水溶液系统;甲醇.o2%磷酸水溶 液系统;甲醇-0.03%磷酸水溶液系统;甲醇-0.1%磷酸水溶 液系统;甲醇-0.05%磷酸水溶液系统等作为流动相进行色谱 分析,结果表明甲醇-0.1%磷酸水溶液(30:70)系统作为流动 相时,野黄芩苷峰与其它峰达到良好分离,并阴性样品无干扰. 由于野黄芩苷的检测灵敏度较高,我们采用直接溶剂提 取法来测定野黄芩苷的含量,也减少了不必要的操作步骤及 误差.此外,对提取溶剂,提取方法及提取时间都进行了系统 考察,最后确定了本文中的供试品制备方法.这种方法简便, 误差小,使分析迅速,准确. 试验结果表明,应用HPLC法测定复方半支莲胶囊中野 黄芩苷的含量,具有较好的准确度和重复性.方法简便易行, 可做为该制剂的质量控制标准. 参考文献: [1]中国药典委员会编.中华人民共和国药典[S],一部.北京:化 学工业出版社,2000:89. (收稿日期:2005—03—21)